苯酚的澄清水溶液冷却后，为何分层，上层是苯酚饱和水溶液，下层是水饱和苯酚溶液

配制方法： 在大烧杯中加入80mL去离子水，再加入300g 苯酚，在水浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有200mL去离子水的1000mL分液漏斗中，轻轻振荡混合，使其成为乳状液。静止7～10小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。 有商品化试剂更方便。

市售酚中含有醌等氧化物，这些产物可引起磷酸二酯键的断裂及导致RNA和DNA的交联，应在160℃用冷凝管进行重蒸。重蒸酚加入0.1%的8-羟基喹啉(作为抗氧化剂)，并用等体积的0.5mol/L Tris·Cl (pH8.0)和0.1mol/L Tris·Cl(pH8.0)缓冲液反复抽提使之饱和并使其pH值达到7.6以上，为Tris饱和酚（pH7.8左右）。

饱和酚在核酸纯化中有2种，一种为Tris饱和酚（pH7.8左右），故也称为碱性酚。另一种就是酸性酚，也就是水饱和酚。用于RNA提取时，则要制备酸性酚，也就是水饱和酚，因为在酸性条件下，RNA被分配于水相，而DNA在有机相，从而达到分离获得RNA的目的。水饱和酚同时能使蛋白质变性、沉淀，从核酸提取液中将蛋白质分离除去。因此，pH值不同，应用不同，切不可弄混，以免造成实验失败。

一、水饱和酚又叫水平衡酚。水饱和酚的PH小于7，一般是PH为5.0左右，通常与异硫氢酸胍一起使用，用于细胞RNA的提取，在酸性环境中，DNA在酚相，RNA在水相。两者就分开了。

二、Tris饱和酚一般PH大于7.8，用于DNA的提取。其中，酚是强的蛋白变性剂，可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出。 而Tris的主要作用是防治止酚类氧化，若酚类氧化，则会形成醌（两个苯环），醌含有强自由基，会破坏核酸结构。 同时，由于PH值大于7，在碱性环境中DNA处于水相，RNA处于有机相。从而分离上清，即可得到DNA。

Tris饱和酚的配置：1、冰箱取出重蒸酚，室温放置－－－68度水浴溶化，切勿立即放入68度的水浴中，以防玻璃炸裂

2、加8－羟基喹啉至0.1％和β－巯基乙醇至0.2％，（原液14. 4MOL/ML），混匀，溶液呈现黄色，倒入分液漏斗中（也可在烧杯中进行）

3、加入等溶剂的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反复混匀后，静至分层；放出下层黄色酚液，弃上层

4、加固体Tris约1g/100ml酚，摇匀，去水相

5、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)平衡数次，至PH为8.0

6、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)于棕色瓶中4度保存

7、如黄色消失或呈粉红色（说明酚已经被氧化），则不能使用

物理方法：

（1）将较大量的苯酚溶在水中,得到苯酚悬浊液,过滤得苯酚溶液.这种方案纯度较高.

（2）将较大量的苯酚溶在热水中,冷却至室温,得到苯酚悬浊液,过滤得苯酚溶液.这种方案速度较快且更能保证饱和但是因加热的过程在空气中进行,易加快苯酚氧化速度而使制得的苯酚溶液中混有较大量的苯醌等氧化产物.

苯酚饱和水溶液本身就是澄清的。

如果苯酚溶液中含有苯酚固体，则为悬浊液，加入氢氧化钠溶液后，溶液会变澄清，原因是：

C6H5-OH+NaOH-->C6H5-ONa+H2O，生成的苯酚钠可溶于水，所以会澄清。

核酸裂解液。苯酚用水饱和的目的是使其抽提DNA过程中，不致吸收样品中含有DNA的水分，减少DNA的损失。用Tris调节至pH为8是因为DNA在此条件下比较稳定。在中性或碱性条件下（pH5～7），RNA比DNA更容易游离到水相，所以可获得RNA含量较少的DNA样品。保存在冰箱中的酚，容易被空气氧化而变成粉红色的，这样的酚容易降解DNA，一般不可以便用。为了防止酚的氧化，可加入疏基乙醇和8-羟基喹琳至终浓度为0.1％。8-羟基喹琳是带有淡黄色的固体粉末，不仅能抗氧化，并在一定程度上能抑制DNase的活性，它是金属离子的弱螯合剂。用Tris pH8.0水溶液饱和后的酚，最好分装在棕色小试剂瓶里，上面盖一层Tris水溶液或TE缓冲液，隔绝空气，以装满盖紧盖子为宜，如有可能，可充氮气，防止与空气接触而被氧化。平时保存在4℃或－20℃冰箱中，使用时，打开盖子吸取后迅速加盖，这样可使酚不变质，可用数月。

自己配很麻烦，毒性也大。试剂公司都有卖，200ml只要50块，提200个样没问题。