那些因素影响邻甲苯胺法测定血糖的显色反应?如何减少这些因素对实验的影响?
1.本法不需要除去蛋白质,邻甲苯胺试剂只与糖醛起反应,不与血中其他还原物质起反应。故测定值较Folin-吴宪法为低。
2.显色反应与水的含量有关,故应使标准管和测定管的含水量一致。
3.温度对显色反应有明显影响,煮沸时间和温度应准确控制。
4.显色后颜色不稳定,室温每放置1分钟,颜色降低0.15%。
5.邻甲苯胺试剂中冰醋酸浓度很高,使用不当容易损坏比色仪器。
6.邻甲苯胺是致癌剂,测定过程中应小心使用。
(1)邻甲苯胺法:葡萄糖与邻甲苯胺在强酸溶液中加热,葡萄糖的醛基与邻甲苯胺缩合成葡萄糖基胺,后者脱水生成席夫氏(Schiff)碱,再经结构重排列,生成有色化合物,吸收峰在630nm。本法操作简单,无须制备血滤液,血液中基本上无其他物质干扰本法。
(2)葡萄糖氧化酶法:葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并产生一分子过氧化氢。在过氧化物酶和色原性氧受体(如联太茴香胺、4-氨基安替匹林偶联酚)的存在下,过氧化氢分解,释放出初生态氧,氧化色素原,生成有色化合物。此法特异性高,操作简便,结果可靠,但较难获得实用的酶。
(3)血清葡萄糖己糖激酶法:在己糖激酶催化下,葡萄糖和ATP发生磷酸化反应,生成葡萄糖-6-磷酸与ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化下脱氢,生成6-磷酸葡萄糖酸,同时使NADP还原成NADPH。NADPH的生成速率与葡萄糖浓度成正比,在波长340nm下监测吸光度升高速率,计算出血清中葡萄糖浓度。此法的特异性比萄糖氧化酶法更高,是目前公认的测定血糖的参考方法。
置沸水浴中煮沸15min。取出于冷水中冷却,在630nm波长处比色,以空白管调零点,测定各管吸光度。
邻甲苯胺,又名2-甲苯胺,是一种有机化合物,化学式为C?H?N,常温下为无色或淡黄色,微溶于水,溶于乙醇、乙醚、稀酸。
市面上卖的床头的血糖仪也可以测血糖。