为什么要对醋酸纤维薄膜进行染色操作
是因为以醋酸纤维薄膜为支持物,浸入ph8.6的缓冲液后吸去多余液体。将微量血清点于膜上,经电泳后,将薄膜置染色液中使蛋白质固定并染色,洗去多于染料。将膜条烘干,再将其用透明液进行透明处理。
醋酸纤维素薄膜电泳的特点:醋酸纤维素薄膜是由醋酸纤维素加工制成的。醋酸纤维素薄膜作为是电泳支持体。它有以下优点:
①电泳后区带界限清晰;
②通电时间较短(二十分钟至一小时);
③它对各种蛋白质(包括血清白蛋白,溶菌酶及核糖核酸酶)都几乎完全不吸附,因此无拖尾现象;
④对染料也没有吸附,因此不结合的染料能完全洗掉,无样品处几乎完全无色。它的电渗作用虽高但很均一,不影响样品的分离效果,由于醋酸纤维素薄膜吸水量较低,因此必需在密闭的容器中进行电泳,并使用较低有电流避免蒸发。
醋酸纤维薄膜电泳以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中,即可涂布成均一-细密的微孔薄膜,厚度以0.1mm-0.15mm为宜。太厚吸水性差,分离效果不好。太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。应用醋酸纤维薄膜电泳操作简单、快速、廉价。已经广泛用于血清蛋白,血红蛋白,球蛋白,脂蛋白,糖蛋白,甲胎蛋白,类固醇激素及同工酶等的分离分析中,尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低,但它具有简单,快速等优点。
尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电 泳低,但它具有简单,快速等优点.
醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。带电颗粒在电场力作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。由于各种蛋白质都有特定的等电点,如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中,则蛋白质将带正电荷而向负极移动。反之,则向正极移动。因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关,所以,可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。血清中含有多种蛋白质,它们的等电点都在pH
7.5以下。将血清放于pH
8.6的缓冲液电泳时,所有的血清蛋白都带有负电荷,在电场中将向正极移动。由于各种血清蛋白在相同pH时所带电荷数量不等,分子颗粒大小不一,因而泳动速度不同,经电泳被分离开来。血清蛋白质的等电点和分子量。
从前端至点样处的方向分别为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白及γ-球蛋白。
本实验以醋酸纤维素薄膜(简称CAM)为支持物分离血清中的不同蛋白质。它是一种良好的呈均一泡沫状疏松薄膜,厚约120μm具有一定的吸水性。
应控制染色时间.时间长,薄膜底色深不易脱去;时间短,着色浅不宜区分,或造成条带染色不均,必要时可进行复染.