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不稳定。异硫氰酸胍是化学分子式为CH5N3·HSCN的化学物质。

简称：GITC

外观：白色晶体

熔点：115-120℃。

PH（4％水溶液）:4.5-7.0

紫外线吸收（300nm，6M）:≤0.1 abs单位

紫外线吸收（410nm，6M）:≤0.05abs

干燥失重：≤0.5％＃nsp。

使用异硫氰酸胍溶液需要现配吗？

答：提取试剂基于4M硫氰酸胍的终浓度：4mM柠檬酸钠，0.83％N-月桂基肌氨酸（十二烷基，N-甲基甘氨酸钠），0.2mMβ-CSB缓冲溶液由巯基乙醇制得；混合25 g异硫氰酸胍和33 mL CSB缓冲溶液直至完全溶解，并将溶液在65°C加热以制备变性溶液，将其在4°C下储存直至使用。

因此，不必立即使用异硫氰酸胍溶液，目前市场上有不同浓度的溶液，但长时间放置并不容易，否则会沉淀并需要仔细检查。使用此外，如果一次准备太多，建议分装。

异硫氰酸胍溶液准需要菌了吗？

答：异硫氰酸胍溶液无需灭菌。该溶液不是很稳定，通常将0.1％DEPC水用作裂解液。水已经消毒了。另外，在制备试剂时，所有用于RNA提取的试剂都需要用DEPC水制备，并且优选重新打开试剂并将其专用于RNA。

尽管无需对制备的裂解物进行灭菌，但应注意的是，实验中使用的塑料产品已标记为无Rnase。如果未在未打开的程序包中使用过它们，则可以直接使用它们，而所有其他则必须通过。处理：将DEPC加到双蒸馏水中至终浓度为0.1％，将塑料产品浸泡，然后将厨房通风过夜，然后用铝箔密封，在高温下高压灭菌至少30分钟，然后高压干燥，然后再干燥用。

异硫氰酸胍的毒性？

答：异硫氰酸胍的吸入，食入和皮肤接触可能会造成损害，因此在操作过程中需要穿戴实验室衣服，手套和护目镜。与酸接触时会释放出剧毒的气体，对水生生物有害。有害，可能对水环境产生长期不利影响，因此应避免释放到环境中。

如何处理废液？

答：实验室污染主要包括生物污染和化学污染，按形式可分为废水，废气和固体污染物。其中，生物污染包括生物废物污染和生物细菌毒素污染，化学污染包括有机污染和无机污染。通常，需要对各种废液进行分类。原则上，原始瓶子被回收。如果需要混合，则必须确保混合后试剂不会产生热量，有毒气体，爆炸等。药品的名称和浓度也必须在回收瓶上标出，并且必须统一回收。不得随意丢弃，以免造成环境污染和中毒。

异硫氰酸胍，CAS号：593-84-0，是一种白色结晶性粉末，有刺激性，对光敏感，溶于乙醇和水，熔点118℃。它和尿素、盐酸胍一样，都是强力的蛋白质变性剂，关于他们之间的介绍请查看之前的文章。异硫氰酸胍在变性裂解细胞和核酸提取中，能够迅速溶解蛋白质，导致其细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离，同时它能抑制细胞释放出的核酸酶，抑制RNA酶、防止RNA的降解，使核酸与蛋白质分离，保证核酸一级结构的完整性。然而，在实际的实验操作过程当中，涉及到异硫氰酸胍溶液的配制和使用中，经常会遇到一些问题，本文将对这些问题进行一一解答。

异硫氰酸胍溶液是否需要现用现配？

提取试剂以异硫氰酸胍的终浓度为4M为例：先以42mM柠檬酸钠、0.83%N-lauryl sarcosine(十二烷基，N-甲基甘氨酸钠)、0.2mM β-巯基乙醇制得CSB缓冲液；异硫氰酸胍25g、CSB缓冲液33mL，混合直至完全溶解，可加热在65℃助溶，制得变性液，4℃保存备用。

所以，异硫氰酸胍溶液可以不必非要现用现配，而且目前市场上也有不同浓度的溶液销售，但放置时间不易过长，否则会有沉淀析出，在使用前需要仔细检查；另外，如果一次性配制过多，建议进行分装。

异硫氰酸胍溶液配制好之后是否需要灭菌？

异硫氰酸胍溶液并没有必要灭菌，该溶液并不是非常稳定，而且配裂解液一般要用0.1%的DEPC水，水已经进行过灭菌。另外提取RNA的所有试剂在配制时都需要用DEPC水配制，而且试剂最好为新开启并作为RNA专用。

虽然配制好的裂解液不需要灭菌，但要注意的是，实验中所用到的塑料制品，已经标明Rnase-Free的，如果没有开封使用过，可以直接使用，其他的都必须经过处理：在双蒸水中加入DEPC，使其终浓度为0.1%，将塑料制品浸泡其中，通风厨过夜，之后再用铝箔封住，高温高压灭菌至少30min，干燥备用。

异硫氰酸胍的毒性如何？

吸入，摄入，皮肤接触异硫氰酸胍均可造成损伤，所以操作时需穿好实验服，戴好手套和护目镜；其与酸、碱（氢氧化钠）接触可释放极高毒性气体，建议在通风橱中操作。

使用过后的废液如何处理？

实验室的污染主要有生物性污染和化学污染，按形态大致可分为废水、废气和固体污染物。其中，生物污染包括生物废弃物污染和生物细菌毒素污染，而化学污染包括有机物污染和无机物污染。总体来说，各类废液需进行分类，原则上原瓶回收，如需混装，则需确定试剂混合后不产生热量、有毒气体、爆炸等。回收瓶上也需注明药品名称、浓度，进行统一回收处理，不可随意丢弃，造成环境污染和毒害。

异硫氰酸胍的作用？

除了在生化领域，异硫氰酸胍在新能源领域也有着不容忽视的作用。

根据已公开报道，在新能源领域，异硫氰酸胍主要作为电解质组分用于制备染料敏化太阳能电池和钙钛矿太阳能电池等新型太阳能电池，对于改善电池稳定性能具有重要价值。

程萍[1]等人以离子液体、无机层状材料、异硫氰酸胍等为主要组分，设计了一种准固态电解质，具有组分分布均匀、稳定性好的特点，能显著提高染料敏化太阳能电池的长期稳定性和光电转换效率。

熊娟等人[2]通过掺杂异硫氰酸胍制备了一种高效的钙钛矿太阳能电池，他们通过引入胍盐与硫氰根离子有效提高了钙钛矿电池的光电效率。通过实验证明，在同样放置624小时的前提下，未添加异硫氰酸胍的电池电池效率下降到初始值的约50％，而添加异硫氰酸胍的电池仍可保持初始效率的80％。异硫氰酸胍的加入，大幅度提升了电池的稳定性。另外，异硫氰酸胍的加入能够明显改善电池的回滞现象。

1. 一种准固态电解质及其制备方法与应用 CN101013766A

2. 钙钛矿太阳能电池及其制备方法 CN108987584A

异硫氰酸胍在此次YQ中的作用？

近日，发表在《国际检验医学杂志》上题为《XXGZ病毒核酸和抗体检测临床应用专家共识》的论文中提到，在XXGZ病毒采集过程中，推荐使用带有异硫氰酸胍等病毒灭活剂的采样管，灭活病毒同时提高检出率。那么异硫氰酸胍在XXGZ病毒核酸检测中有哪些作用，又是如何做到灭活病毒并提高检出率呢？

XXGZ病毒是一种RNA病毒，各种RNA病毒的核酸由于自体降解和生物酶介导的降解，是较难稳定保存的生物分子。而异硫氰酸胍是一类强有力的蛋白质变性剂，且具有无RNA酶和DNA酶活性的特点。采样管中加入异硫氰酸胍能够破坏RNA酶的分子结构，使样本中可能存在的核酸酶失活，起到稳定保存病毒样本的作用。

XXGZ病毒核酸检测流程包括采样→保存送样→病毒灭活→裂解核酸提取→检测等流程，异硫氰酸胍在核酸提取环节也发挥至关重要的作用。作为核酸裂解液的主要成分，异硫氰酸胍能迅速破碎病毒，使核蛋白与核酸迅速分离，同时抑制释放出的核酸酶活性，保证核酸一级结构的完整性，提高核酸提取效率。

可见，异硫氰酸胍在XXGZ病毒核酸检测中具有重要价值。

大家有其他关于异硫氰酸胍的问题，也可以在下方评论中留言，我看到后会更新解答。

就那植物来说吧！原理是一致的。方法不同。 1植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子。 二、设备 移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。 三、试剂 1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。 2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液 5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。 四、操作步骤： 1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。 2. 幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。 3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。 4. 室温下5000rpm离心5分钟。 5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。 7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。 8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。 9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃ 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。 10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。 11. 用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。 12. 将DNA重溶解于1ml TE, -20贮存。 13. 取2μl DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。同时取15μl稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。 [注意] 5g样品可保证获得500μg DNA, 足供RFLP、PCR等分析之用。

从细胞里提取出完整RNA并进行纯化，是进行许多基础分子生物学实验研究RNA功能机制方面的研究的首选和关键步骤。包括cDNA文库构建， northern杂交 ,检测细胞的转录水平, 定量PCR ,RT-PCR及体外翻译等。本文将会介绍RNA提取实验步骤，供大家参考。

1.方法背景

  从组织或者细胞中提取总RNA的方法是用含有异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞，异硫氰酸狐是一种常见且有效的蛋白质变性剂，在裂解细胞的同时能有效抑制内源性RNA酶活性。同时加入氯仿产生了第二相（有机相），DNA和蛋白质在有机相中被抽提，低pH值的酚将使RNA留在上层水相中。水相中的RNA可用异丙醇沉淀浓缩, 随后用乙醇洗涤沉淀，即可去除所有残留的蛋白质和无机盐，最终获得总RNA。

1.细胞或者组织样品匀浆处理

(1)贴壁培养细胞：细胞量为107,无须用胰蛋白酶消化，在去除培养液后，用预冷无菌PBS洗细胞一次，去上清，再加入1mL单相裂解液裂解细胞，可用枪头吹打混匀，使细胞裂解完全，最后转移到1.5 mL离心管。

(2)悬浮培养细胞：细胞量为107,可直接转移到15 mL离心管，500 rpm离心5 min 后；用预冷无菌PBS洗涤1次，弃上清，再加入1mL单相裂解液悬浮细胞沉淀，可用枪头吹打混匀，使细胞裂解完全，最后转移到1.5 mL离心管。

(3)组织样品：解剖所要的组织后，先将这些组织切成小块（100 mg),然后将组织放入盛有液氮的研钵中，用研棒磨碎组织，使组织成粉末状。在研磨过程中要不断添加液氮使组织保持冷冻状态，最后加入1mL单相裂解液裂解组织细胞，再转移到1.5 mL离心管。

2.RNA提取

(1)样品加入单相裂解液后，室温放置5 min,使样品充分裂解。如不进行下一步操作，样品可放入-70℃长期保存。

(2)如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖等，12000 rpm离心5 min,取上清。

(3)按每1mL单相裂解液加入200 μL氯仿，振荡混匀后室温放置15 min,使其自然分相。禁用旋涡振荡器，以免基因组DNA断裂。

(4)4 ℃ 12 000 rpm离心15 min后，样品会分成三层，黄色的有机层，中间层和上层无色的水相，RNA主要在水相中。

(5)小心吸取上层水相，至另一个新的1.5 mL离心管中。不要吸取中间界面，以免DNA和蛋白污染。

(6)在上清中加入等体积冰冷的异丙醇，-20 ℃放置1h以增加RNA沉淀。

(7)4℃ 12 000 rpm 离心10min，弃上清，RNA沉于管底。

(8)RNA沉淀加入1mL 75%乙醇（用DEPC水配置），温和振荡离心管，悬浮沉淀。

(9)4℃ 8 000 rpm离心5 min,尽量弃上清。用移液器小心吸弃上清，注意不要吸走RNA沉淀。

(10)室温晾干5〜10 min,让最后残存的痕量乙醇挥发。RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。

(11)用50 μL DEPC水或者TE溶解RNA沉淀，RNA溶液要放在-70℃保存。纯水和TE均需DEPC处理并经高压消毒。

3.RNA定量

RNA提取 完就应该来做RNA定量，RNA定量方法与DNA定量相似。RNA在260 nm波长处有最大的吸收峰。因此，可以用260 nm波长分光测定RNA浓度，OD值为1相当于大约40 μg/mL的单链RNA。如用1cm光径，用ddH20稀释DNA样品n倍并以ddH20为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度：

RNA (mg/mL) =40x (OD260读数）x稀释倍数(n)/1000 

纯RNA的OD260/OD280的比值为1.8-2.0,根据OD260/OD280的比值可以估计RNA的纯度。若比值比1.8低，说明有残余蛋白质、酚或者其他杂质存在；比值比2.0高，则提示RNA有降解。

4.RNA凝胶电泳

  RNA的电泳目的是检测28S和18S条带的完整性和它们的比值，或者是mRNA Smear 的完整性，可以用普通的琼脂糖胶进行。如果28S和18S条带明亮、清晰，没有出现涂抹状片段，并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，则可判断认为RNA提取的质量是好的。

5.保温实验

保温实验主要是来检测RNA酶的存在，关于RNA检测以及RNA酶的检测可以参考另外一篇 《如何检测RNA》

6.材料与试剂

6.1.试剂

单相裂解液（4 mol/L的异硫氰酸胍，0.1 mol/L的乙酸钠，0.2% β-巯基乙醇，50%饱和酚），氯仿（分析纯），异丙醇（分析纯），75%乙醇（用0.1%的DEPC处理过的无RNA酶的水稀释），DEPC·H2O,TE溶液（10 mmol/L的Tris·HCl，pH8.0，1mmol/L的EDTA），PBS（1×），焦碳酸二乙酯（DEPC），液氮。

6.2.仪器设备

冷冻台式离心机，电泳仪，电泳槽，电热恒温水槽，紫外分光光度计。

相关阅读：

《提取高质量RNA的技巧》

《植物组织RNA提取》

next generation sequencing就直接测RNA，传统的还是先转cDNA，原因么应该是rna比较脆弱啦。。。cDNA比较稳定。不过弊端还是很多的比方一个很突出的就是3’端bias。。

所以现在有了next generation 的rna seq。原理是一样的不过就是直接测RNA了。

third generation里边就开始测single molecule了，像前两天ibm说的那样哈哈。。。。。