怎么制作对硝基苯酚的标准曲线
试管中分别加入0.1 mmol/L对硝基苯酚0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6和2.0 mL然后分别加入 0.5 mol/L NaOH溶液至5mL(获得0.008、0.016 、0.032 、0.048 、0.064和0.080mmol/L留个浓度对硝基苯酚)混匀,室温放置30 min,405 nm比色,即可获得浓度-OD值标曲 。
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苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。
②
绘制葡萄糖标准曲线来得出单糖浓度与比色值的线性关系。
③
通过线性关系得出测定样品中单糖浓度从而可以反推出多糖的含量。
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苯酚溶液的制法:称取5g的苯酚,加入95ml蒸馏水,溶解。
反应液:分别取1ml的标准液,加入1ml的苯酚溶液,迅速加入5ml的浓硫酸,震荡摇匀。在沸水浴中加热15min后冷却到室温,在490nm波长下测定其吸光值。
我这两天刚做出来的,但是我的浓度是用的20ug/mg、40、60、80、100、120,其他的细节都是一样的。我只是按照我做的给你说的,你也可以灵活变通,比如沸水浴的时间,波长的选择都是按照自己的实验具体确定的,但是还是有些细节不能忽视的,比如苯酚要求用182℃蒸馏后得到的馏分,如果试验经费允许可以直接买重蒸酚,普通苯酚和重蒸酚价格相差有点大。具体我们可以讨论,我也是试验很多方法自己总结出来的,用苯酚测定糖是个技术活,而且冒着有毒的危险。
1. 苯磺化碱熔化法:
将苯蒸汽通过浓硫酸中,部分磺化为苯磺酸,之后用亚硫酸钠中和生成的苯磺酸生成苯磺酸钠,最后用氢氧化钠与苯磺酸钠熔融,生成苯酚钠。苯酚钠在水溶液中通二氧化硫,生成苯酚。
这是较古老的方法。工序多,原子利用率低,不易连续生产。同时,使用大量酸碱,设备腐蚀严重,维修费大。不过,生产技术较容易掌握。
2. 苯氯化水解法:
苯蒸汽与氯化氢催化反应,生成氯苯,氯苯在高温高压下催化反应生成苯酚和氯化氢。
该方法同样需要消耗大量酸和氢氧化钠,对设备腐蚀严重。苯酚收率不高。
3. 异丙苯氧化法:
用丙烯和苯在催化剂(如无水三氯化铝)作用下烷基化生成异丙苯;异丙苯很容易氧化生成过氧化异丙苯;过氧化异丙苯在硫酸存在下分解生成苯酚和丙酮。
异丙苯法是目前世界上生成苯酚最主要的方法,也最为经济。除了可以得到苯酚,还可以得到丙酮。需要注意的是中间产物过氧化异丙苯是不稳定过氧化物,有分解爆炸风险。
4. 直接氧化法
用分子氧、氮氧化物和过氧化氢作为氧化剂,催化氧化苯生产苯酚。
这类方法原子利用率高,副反应少。目前还在开发中。
① 苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物.再以比色法测定.
② 绘制葡萄糖标准曲线来得出单糖浓度与比色值的线性关系.
③ 通过线性关系得出测定样品中单糖浓度从而可以反推出多糖的含量