反相色谱中,为什么出峰顺序是苯,甲苯,乙苯,联苯? 苯为什么有极性?
试剂基本都有极性,只是苯比那些弱极性的稍微强那么一点.
苯的 pi 电子云分布得到处都是,跟苯反应都得是亲电试剂.极性来自于色散力.
后面甲基越多,电子云被甲基影响而减弱,显得极性更弱.
2,4-二硝基苯酚由于在2,4位置有吸电子基团会影响苯环中的共轭结构,使得整个分子净偶极矩较大,分子极性较强。在反相色谱中,由于固定相极性弱于流动相,根据色谱保留原理,极性较大的物质先于极性较小的物质流出,因此出峰顺序应为:2,4-二硝基苯酚>苯酚
正相是固定相极性大,反相是液相极性大,分离速度与极性关联最大,但是还关联到温度、柱压等等
不一定严格按相反顺序出,但某些样品的顺序肯定会变。
色谱书上有这样的例子。
正相和反相是根据固定相和流动相的极性差异定义的。
但分离的过程不只是按照极性大小出峰的。有很多因素综合作用。但是主要因素是极性大小,所以出来的结果一般符合上述规律,但有特殊。
大多数会反过来,但有的就不变,我以前做过一个样品,反相是甲苯123,正相是甲苯321,两个都是甲苯在最前面
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不知道老外看我们的英语是不是同样的感觉
实验员只要知道是什么,专家喜欢研究为什么?
我以前有个甲苯为溶剂的东西,不管正相还是反相,甲苯都在最前面,专家说因为甲苯个头小,跑得快,搞得我做凝胶的时候老是要想换了柱子了,个头大的跑得快了
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要得到重复性较好的结果要注意以下方面:
1、仪器要好:仪器重现性较好,注意灯的能量;
2、试剂要好:流动相纯度很重要;
3、操作要好:手法要熟练;
4、环境要好:避免震动、温度较大波动。
液相色谱法原理:
液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。根据固定相的不同,液相色谱分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱。
应用最广的是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为基质的键合相色谱。根据固定相的形式,液相色谱法可以分为柱色谱法、纸色谱法及薄层色谱法。
按吸附力可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶渗透色谱。近年来,在液相柱色谱系统中加上高压液流系统,使流动相在高压下快速流动,以提高分离效果,因此出现了高效(又称高压)液相色谱法。
扩展资料:
液相色谱法分类:
液固吸附色谱
高效液相色谱中的一种,是基于物质吸附作用的不同而实现分离。其固定相是一些具有吸附活性的物质如硅胶、氧化铝、分子筛、聚酰胺等。
液液分配色谱法
基于被测物质在固定相和流动相之间的相对溶解度的差异,通过溶质在两相之间进行分配以实现分离。根据固定相与流动相的极性不同,分为正相色谱和反相色谱。前者是用硅胶或极性键合相为固定相,非极性溶剂为流动相;后者是硅胶为基质的烷基键合相为固定相,极性溶剂为流动相,适用于非极性化合物的分离。
离子交换色谱法
基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换,依据这些离子对离子交换基具有不同的亲和力而实现分离。薄壳型离子交换树脂柱效高,主要用来分离简单的混合物;多孔性树脂进样容量大,主要用来分离复杂混合物。