非甲烷总烃浓度如何将室温下采样换算成标准体积浓度

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酵母蔗糖酶的分离纯化和活力测定

实验简介：酶的分离制备在酶学以及生物大分子的结构功能研究种具有重要意义。啤酒酵母中蔗糖酶含量丰富。本实验用新鲜啤酒酵母作为原料，通过破碎细胞，热处理，乙醇沉淀，柱层析等步骤提取蔗糖酶。并对其活力进行测定。

实验原理

蔗糖酶主要存在于酵母中，但工业上通常从酵母中制取。酵母蔗糖酶系胞内酶，提取时细胞破碎或菌体自溶。常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、离子交换和凝胶柱层析。以此可得到较高纯度的酶。

蔗糖酶催化下蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。用测定生成还原糖(葡萄糖和果糖)的量来测定蔗糖水解的速度，本实验中，蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5min,每产生l毫克葡萄糖所需酶量。 用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量，比活力为每毫克蛋白质的活力单位数。

实验操作

1. 提取

(1) 准备一个冰浴，将研钵稳妥放入冰浴中。

(2) 将10g湿啤酒酵母，和适量（5g）二氧化硅一起放入研钵中。二氧化硅要预先研细。

(3) 缓慢加入预冷的30mL去离子水，每次加2mL左右，边加边研磨，至少用30分钟。以便将蔗糖酶充分转入水相，至酵母细胞大部分研碎，以便将蔗糖酶充分转入水相中。

(4) （可选项） 研磨时用显微镜检查研磨的效果。

(5) 将混合物转入两个离心管中，平衡后，用高速冷离心机，4℃，10000rpm，离心5min。

(6) 用滴管小心地取出水相，转入另一个清洁的离心管中，4℃，10000rpm，离心15min。

(7) 将清液转入量筒，量出体积，用广泛pH试纸检查上清液pH，用1mol / L 醋酸将pH调至5.0，称为“粗级分Ⅰ”。留出1.5mL测定酶活力及蛋白含量，剩余部分转入清洁的离心管中。

2. 热处理和乙醇沉淀

(1) 预先将恒温水浴调到50℃，将盛有粗级分I的离心管稳妥地放入水浴中，45℃下保温30分钟，在保温过程中不断轻摇离心管。

(2) 取出离心管，于冰浴中迅速冷却，用4℃，10000rpm，离心10min。

(3) 将上清液转入小烧杯中，放入冰盐浴（没有水的碎冰撒入少量食盐），逐滴加入等体积预冷至－20℃的95%乙醇，同时轻轻搅拌，共需30分钟，再在冰盐浴中放置10分钟，以沉淀完全。于4℃，10000rpm，离心10min，倾去上清，并滴干，沉淀保存于离心管中，盖上盖子或薄膜封口，然后将其放入冰箱中冷冻保存（称为“级分Ⅱ”）。废弃上清液之前，要用尿糖试纸检查其酶活性（于下一个实验一起做）。

3. DEAE纤维素柱层析纯化酶蛋白

(1) 离子交换剂的处理

称取1.5克DEAE纤维素(DE-32)干粉，加入0.5mol／L NaOH溶液(约50m1)，轻轻搅拌，浸泡至少0.5小时(不超过1小时)，用玻璃砂漏斗抽滤，并用去离子水洗至近中性，抽干后，放入小烧杯中，加50mL 0.5mol／L HCl，搅匀，浸泡0.5小时，用去离子水洗至。近中性，再用0.5 mol／L NaOH重复处理一次，用去离子水洗至近中性后，抽干备用(因DEAE纤维素昂贵，用后务必回收)。实际操作时，通常纤维素是已浸泡过并回收的，按“碱一酸”的顺序洗即可，因为酸洗后较容易用水洗至中性。碱洗时因过滤困难，可以先浮选除去细颗粒，抽干后用0.5 mol／L NaOH-0.5 mol／L NaCl溶液处理，然后水洗至中性。

(2) 装柱与平衡

先将层析柱垂直装好，在烧杯内用0.02 mol／L，pH7.3 Tris-HCl缓冲液洗纤维素几次，用滴管吸取烧杯底部大颗粒的纤维素装柱，然后用此缓冲液洗柱至流出液的pH与缓冲液相同或接近时即可上样。

(3) 上样与洗脱

上样前先准备好梯度混合器，详见附录TH-500梯度混合器使用说明。

用5mL 0.02mol／L，pH7.3的Tris-HCl缓冲液充分溶解醇级分Ⅱ(注意玻璃搅棒头必须烧圆，搅拌溶解时不可将离心管划伤)，若溶液混浊，则4 000r／min离心除去不溶物。取1.5mL上清液(即醇级分Ⅱ样品，留待下一个实验测酶活力及蛋白含量)，将剩余的3.5mL上清液小心地加到层析柱上，不要扰动柱床，上样后用约30mL缓冲液洗去柱中未吸附的蛋白质，至A280降到0.1以下，注意从上样开始使用部分收集器收集，每管2.5～3.0mL／l0min。然后打开梯度混合器，采用30mL，0.02mol／L，pH7.3的Tris-HCl缓冲液和30mL含0.2mol／L浓度NaCl的0.02mol／L，pH7.3的Tris-HCl.缓冲液，进行线性梯度洗脱，连续收集洗脱液，控制流速2.5～3.0mL／10min。测定每管洗脱液的A280光吸收值。

(4) 各管洗脱液酶活力的定性测定

在点滴板上每一孔内，加一滴0.2mol／L，pH4.6的乙酸缓冲液，一滴0.5mol／L蔗糖和一滴洗脱液，反应5min，在每一孔内同时插入一小条尿糖试纸，10～20min后观察试纸颜色的变化。用“ ”号的数目，表示颜色的深浅，即各管酶活力的大小。合并活性最高的2～3管，量出总体积，并将其分成10份，分别倒人10个小试管，用保鲜膜封口，冰冻保存，使用时取出一管，此即“柱级分Ⅲ”。

4. 各级分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ蔗糖酶活力

用0.02mol／L，pH4.6乙酸缓冲液(也可以用pH5～6的去离子水代替)稀释各级分酶液，测出酶活合适的稀释倍数：

Ⅰ： 1 000～10 000倍；

Ⅱ： 1 000～10 000倍；

Ⅲ： 100～1 000倍；

以上稀释倍数仅供参考。

按“表1”的顺序在试管中加入各试剂，进行测定，为简化操作可取消保鲜膜封口，沸水浴加热改为用90～95℃水浴加热 8-10min，以5min生成的还原糖的毫克数为纵坐标，以试管中lmL反应混合物中的酶浓度(mg蛋白／m1)为横坐标，画出反应速度与酶浓度的关系曲线。

表1 各级分I、Ⅱ、Ⅲ蔗糖酶活性测定

各管名称 对照 级分Ⅰ 级分Ⅱ 级分Ⅲ 葡萄糖

管数 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13

酶液/mL 0.0 0.05 0.20 0.50 0.05 0.20 0.50 0.05 0.20 0.50 / / /

H2O/mL 0.6 0.55 0.40 0.10 0.55 0.40 0.10 0.55 0.40 0.10 0.8 0.4 0.2

乙酸缓冲液0.2mol/L,pH4.6 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 / / /

葡萄糖2mmol/L / / / / / / / / / / 0.2 0.6 0.8

蔗糖0.25mol/L 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 / / /

加入蔗糖，立即摇匀开始记时，室温准确反应5min后，立即加1mL 0.1M NaOH中止反应

二硝基水杨酸溶液 mL 1.0

用保鲜膜封口，扎眼，沸水浴加热5min，立即用水冷却3分钟。

H2O/mL 4.0

A520

稀释后酶活力 /

原始酶活力 /

5. 考马斯亮兰法测定各级分蛋白质含量

(1) 蛋白质标准曲线制作

取14支试管，分两组按下表平行操作。

表2 蛋白质标准曲线制作

试管编号/mL 0 1 2 3 4 5 6

标准蛋白溶液/mL

0.02mol/L Tris-HCl缓冲液/mL

考马斯亮兰试剂/mL

摇匀，1h内以0号试管为空白对照，在595nm处比色

A595nm

(2) 各级分蛋白质含量测定

考马斯亮兰G-250在酸性溶液时呈茶棕色，最大吸收峰在465nm。当与蛋白质结合后变成深蓝色，最大吸收峰转至595nm，在10~100μg/mL蛋白质浓度范围内成正比。因此在测定各级分蛋白质含量时应稀释适当倍数，使其测定值在标准曲线的直线范围内。根据所测定的A595nm值，在标准曲线上查出相当于标准蛋白的量，从而计算出未知样品的蛋白质浓度(mg/mL)。

6. 计算各级分的比活力、纯化倍数及回收率

为了测定和计算下面表3中的各项数据，对各个级分都必须取样，每取一次样，对于下一级分来说会损失一部分量，因而要对下一个级分的体积进行校正，以使回收率的计算不致受到不利的影响。

1活力单位(U)＝酶在室温，pH＝4.6条件下，每分钟水解产生1μmol葡萄糖所需酶量。比活力＝活力单位/mg蛋白。

表3 各级分的比活力、纯化倍数及回收率

级

分 记录

体积

(m1) 校正

体积

(m1) 蛋白质

(mg／m1) 总蛋白

(mg) Unit

(s／m1) 总活力

(U) 比活力

(Units

／mg) 纯化

倍数 回收率

(％)

Ⅰ1.0 100

Ⅱ

Ⅲ

下面表4是对假定的各级分记录体积进行校正计算的方法和结果：

表4 实验记录表

级分 记录体积 (m1) 校正体积计算 取样体积

(m1) 校正后体积

(m1)

Ⅰ 15 15 1.5 15.00

Ⅱ 5 5×(15／13.5) 1.5 5.5

Ⅲ 6 6×(15／13.5)×(5／3.5) 1.5 9.5

五、 结果

在同一张图上画出所有管的酶活力、光吸收值A280的曲线和洗脱梯度线。得出各级分的活力，比活力，提纯倍数以及回收率。

六、 注意事项

从上样开始收集，可能有两个活性峰，梯度洗脱开始前的第一个峰是未吸附物，本实验取用梯度洗脱开始后洗下来的活性峰。

七、 作业

1．为什么酶的提取需要低温操作？

2．热处理的根据是什么？

去除热敏感蛋白。

参考文献

1．邵雪玲，毛歆，郭一清．生物化学与分子生物学实验指导．武汉：武汉大学出版社，2003

2．张龙翔．高级生物化学实验选编．北京：高等教育出版社，1989

3．许培雅，邱乐泉．离子交换柱层析纯化蔗糖酶实验方法改进研究．实验室研究与探索，2002，21(3):82~84

编著者——陈彦，李绍飞

泥炭中的养分主要包括:氮、磷、钾营养三要素。

73.16.7.1 全氮的测定

方法提要

泥炭中氮的存在形态可分为两类:无机态和有机态。全氮的含量一般在1%～3.5%，其中能够被植物吸收利用的无机态氮仅占全氮的5%左右，占全氮95%的氮是有机态氮。有机态氮只有在微生物的活动下被逐渐矿化后才能被植物吸收。

泥炭中全氮的测定方法很多，通常采用重铬酸钾-硫酸消化法。用重铬酸钾-硫酸消化泥炭试样，使泥炭中的有机氮中的蛋白质经过硫酸水解成为氨基酸，而氨基酸在氧化剂重铬酸钾的作用下转化为氨，进而与硫酸作用生成硫酸铵，有机质则被氧化为二氧化碳，试样中的无机态氮(NH4+)转化为硫酸铵。用浓碱蒸馏，使硫酸铵转化为氢氧化铵而被蒸出，用硼酸吸收，以盐酸标准溶液滴定。主要反应如下:

岩石矿物分析第四分册资源与环境调查分析技术

试剂

硫酸。

氢氧化钠溶液(400g/L)。

饱和重铬酸钾溶液200gK2Cr2O7溶于1000mL水中，贮于锥形瓶中，用时加热溶解。

硼酸溶液20gH3BO3用水溶解，用水稀释至1000mL。加定氮混合指示剂少许，用稀盐酸或稀氢氧化钠溶液调节至淡红色(pH=4.5)。

定氮混合指示剂0.5g甲基红和0.5g溴甲酚绿放入玛瑙研钵中，用100mL乙醇研磨溶解，用稀盐酸或稀氢氧化钠溶液调节至pH=4.5。

盐酸标准溶液c(HCl)=0.02mol/L取1.67mLHCl，用水稀释至1000mL。用氢氧化钠标准溶液标定浓度(mol/L)。

氢氧化钠标准溶液c(NaOH)=0.1mol/L4gNaOH溶于水中，用水稀释至1000mL。

标定称取0.2000g在105℃烘干的苯二甲酸氢钾置于锥形瓶中，加50mL水溶解，加2滴酚酞指示剂，用氢氧化钠标准溶液滴定至由无色变为微红色保持半分钟不消失为终点。计算氢氧化钠标准溶液的浓度。

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式中:c为氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/Lm为称取苯二甲酸氢钾的质量，g204.22为苯二甲酸氢钾的摩尔质量的数值V为滴定消耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL。

分析步骤

称取0.5～1g(精确至0.0001g)小于0.25mm的风干泥炭试样置于150mL凯氏瓶中，加1～2gK2Cr2O7，加5mLH2SO4，于高温电炉上消解至冒浓烟并无黑色碳粒。取下冷却后，加5mL饱和重铬酸钾饱和溶液，于电炉上微沸5min。取下，加水70mL。再加400g/LNaOH溶液25mL，立即连接于已经通冷却水的氮蒸馏装置上，通入水蒸气，开始蒸馏，以25mLH3BO3溶液吸收，直至吸收液的体积达80～100mL时为止。硼酸吸收液用盐酸标准溶液滴定，测得全氮量，同时做空白试验。氮蒸馏装置如图73.58所示。

图73.58 氮蒸馏装置

按下式计算全氮的含量w(N):

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式中:V为滴定消耗盐酸标准溶液的体积，mLV0为空白消耗盐酸标准溶液的体积，mLc为盐酸标准溶液的浓度，mol/Lm为试样的质量，g。

注意事项

1)在使用氮蒸馏装置时，应先空蒸馏20min，使装置中可能存在的氮清除干净。

2)试样经硫酸消解后，应当充分冷却后，才能加入重铬酸钾否则反应激烈，溶液溅失。重铬酸钾加入后，如果溶液立即出现绿色或消化1～2min后即变为绿色，说明加入的重铬酸钾的量不足，可补加1g重铬酸钾。

3)加碱前的消化液，应当用水稀释70～80倍否则，酸度过大，加碱时容易引起激烈的反应，并在瞬间引起氮的损失。

4)蒸馏时产生倒吸的原因大致有几种情况:酸稀释的倍数不够，酸碱作用时产生高热后未能及时通气并又迅速冷却中途瓶内温度降低先停止加热后取下锥形瓶也会产生倒吸蒸馏时突然停电。解决的办法是:先将蒸气瓶的塞子打开，将冷却管下端脱离吸收液。

73.16.7.2 全磷的测定

泥炭中的磷，可分为有机磷和无机磷大类。其中无机磷主要以磷酸盐的形式存在，泥炭作为肥料使用时，主要利用的是泥炭中的无机磷，无机磷也叫有效磷有机磷则以卵磷脂、核酸、磷脂为主。此外，还有少量的吸附态和交换态磷。泥炭中磷的含量不高，大部分以有机态存在，不能被植物吸收。一般泥炭中全磷的测定，采用磷钼蓝光度法或磷钒钼黄光度法。

(1)磷钼蓝光度法

方法提要

试样用高氯酸-硫酸加热溶解，各种磷都变为正磷酸，加入钼锑抗混合显色剂，正磷酸与钼酸铵生成磷钼杂多酸，在Sb3+或Bi3+的参与下，再被抗坏血酸还原形成磷钼蓝，光度法测定。

试剂

硫酸。

高氯酸。

饱和碳酸钠溶液。

硫酸钼锑抗显色剂:①18mLH2SO4缓缓注入40mL水中，冷却。②将2g钼酸铵溶于60～70℃的水中，冷却。③将0.5g酒石酸锑钾溶于水中，用水稀释至100mL。④将①缓缓注入②中，在不断搅拌下将③加入，加水至1000mL，搅匀。贮于棕色瓶中。用时每100mL溶液加1.5g抗坏血酸。

五氧化二磷标准溶液，配制方法参见本章73.11.7磷的测定。

对硝基酚指示剂。

校准曲线

分取含磷0.0μg、20.0μg、40.0μg、60.0μg、80.0μg、100μg、120μg的五氧化二磷标准溶液分别置于50mL容量瓶中，加水至约15mL，加2滴对硝基酚指示剂，用饱和碳酸钠溶液调节溶液的颜色为淡黄色，准确加入2.5mL硫酸钼锑抗显色剂，充分摇匀，用水稀释至刻度，摇匀。放置30min后，用1cm比色皿，于波长660nm处测得吸光度，绘制校准曲线。

分析步骤

称取0.2～0.5g(精确至0.0001g)粒度<0.25mm的风干泥炭试样置于50mL锥形瓶中，加6mL(1+1)H2SO4，摇匀，再加10滴HClO4，加盖弯颈漏斗，加热溶解至溶液开始变白色或灰白色时，再煮沸15～20min。总煮沸时间为45～60min。取下冷却，加10mL水，转入50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

分取5.00mL溶液置于50mL容量瓶中，加10mL水、2滴对硝基酚指示剂，以下按校准曲线步骤操作，测定吸光度，在校准曲线上查得磷量。

按下式计算试样中磷的含量:

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式中:w(P2O5)为五氧化二磷的质量分数，%V为试样溶液总体积，mLV1为分取试样溶液体积，mLm1为校准曲线查得分取试液中磷量，μgm为称取试样的质量，g。

注意事项

用硫酸-高氯酸消化时，开始时温度不能太高，当有高氯酸白烟时，再提高温度使硫酸冒烟。用碱中和时，不能用氢氧化铵，因铵离子浓度>1%时会使蓝色消褪。也不能用氢氧化钠，因为若溶液中含有锰时会出现氢氧化锰沉淀，加酸也不会溶解。因此采用碳酸钠中和为宜。

(2)磷钒钼黄光度法

方法提要

试样以氢氧化钾熔融，磷形成正磷酸盐，用硝酸酸化，调节溶液酸度为5%～8%，加入钒钼酸铵显色剂，正磷酸盐与钒钼酸铵形成磷钒钼黄配合物，光度法测定。

试剂

硝酸。

钒钼酸铵显色剂①10g钼酸铵溶于50～60℃的100mL水中，冷却。②0.3g钒酸铵溶于50mL水中，加入50mL(1+2)HNO3，冷却。将①徐徐倾入②中，边加边搅拌，再加入18mLHNO3。

校准曲线

分取含五氧化二磷0.0μg、50.0μg、100μg、200μg、400μg、600μg、800μg的标准溶液分别置于100mL容量瓶中，加2滴酸碱指示剂，用100g/LKOH溶液调至中性，加5mLHNO3，加水至50mL左右，加入10mL钒钼酸铵显色剂，用水稀释至刻度，摇匀，放置30min后，用1cm比色皿，于波长420～470nm处测量吸光度，绘制校准曲线。

分析步骤

称取0.2～0.5g(精确至0.0001g)粒度<0.25mm的风干泥炭试样置于镍坩埚中，加4～5gKOH，放入高温炉中，由低温升起，于700℃熔融10～20min。取出冷却，放入250mL烧杯中，加50mL热水提取，水洗出坩埚，加20mLHNO3硝酸酸化，转入200mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。

分取10.00～20.00mL清液于100mL容量瓶中，加2滴酸碱指示剂，用100g/LKOH溶液调至中性，以下按校准曲线步骤操作，测定吸光度，在校准曲线上查得磷量。

试样中磷含量的计算见式(73.134)。

(3)有效磷的测定

方法提要

泥炭中的有效磷，就是泥炭中能够被植物利用的磷。用20g/L柠檬酸溶液提取泥炭试样，泥炭的有效磷被溶解进入溶液，再以磷钒钼黄光度法测定。

试剂

柠檬酸溶液(20g/L)。

其他试剂与73.16.7.2(2)磷钒钼黄光度法相同。

分析步骤

称取0.5g(精确至0.0001g)粒度小于0.25mm的风干泥炭试样置于300mL锥形瓶中，加50mL柠檬酸溶液，振荡30min，过滤于100mL容量瓶中，用水洗涤至90mL，再用水稀释至刻度，摇匀。

分取10.00～20.00mL溶液，用磷钒钼黄光度法测定。

有效磷的计算见式(73.134)。

73.16.7.3 全钾的测定

方法提要

泥炭中的钾有4种存在形态:水溶性钾、交换性钾、缓效性钾(非交换性钾)、难溶性钾(存在于原生或次生矿物的结晶构造中)。前两种为速效性钾，可直接被植物利用。泥炭中的全钾(氧化钾)含量一般在0.2%，常用原子吸收光谱法测定。

分析步骤

称取0.2g(精确至0.0001g)粒度<0.25mm的风干泥炭试样置于银坩埚中，加2gNaOH，铺平，于高温炉中由低温升至720℃并保持15min。取出冷却，放入250mL烧杯中，加50mL热水提取，于电炉上加热微沸5min，水洗出坩埚，用15mLHCl酸化，转入200mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。分取10.00mL清液于100mL容量瓶中，加2mL(1+1)HCl，用水稀释至刻度，摇匀。然后采用原子吸收光谱法测定全钾。具体分析步骤可参见第16章硅酸盐岩石分析。

对于泥炭样中钾的测定，也可以采用:0.2000g泥炭样灼烧成灰分后，转入铂坩埚或塑料坩埚中，加8滴H2SO4和10mLHF，加热至硫酸白烟冒尽后，以5mL(1+1)HCl及少许水微热提取，转入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度。再分取10.00mL清液于100mL容量瓶中，加2mL(1+1)HCl，加水稀释至刻度，摇匀，原子吸收光谱法测定。

影响乙醇法测叶绿素实验测量结果的关键因素有

1、环境因素如干旱、盐渍、低温、大气污染。

2、元素缺乏也可影响到测量叶绿素的含量。

3、实验样品的光照环境也会影响到测量结果。

生物实验总结 实验一 观察DNA和RNA在细胞中的分布 实验原理：DNA 绿色，RNA 红色 分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中。 实验结果: 细胞核呈绿色,细胞质呈红色. 实验二 物质鉴定 还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀 脂 肪 + 苏丹III 橘黄色 脂 肪 + 苏丹IV 红色 蛋白质 + 双缩脲试剂 紫色反应 1、还原糖的检测 （1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。 （2）试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），现配现用。 （3）步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色） ★模拟尿糖的检测 1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液 2、检测方法：斐林试剂（水浴加热）或班氏试剂或尿糖试纸 3、结果：（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。 4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。 2、脂肪的检测 （1）材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。 （2）步骤： 制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央 ↓ 染色（滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精） ↓ 制作装片（滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片） ↓ 镜检鉴定（显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒） 3、蛋白质的检测 （1）试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液） （2）步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色) 考点提示： （1）常见还原性糖与非还原性糖有哪些？ 葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。 （2 )还原性糖植物组织取材条件？ 含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。 （3)研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？ 加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。 （4）斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？ 混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。 （5)还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为？ 浅蓝色 棕色 砖红色 （6）花生种子切片为何要薄？ 只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。 （7）转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？ 切片的厚薄不均匀。 （8）脂肪鉴定中乙醇作用？ 洗去浮色。 （9）双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化？ 不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。 实验三 观察叶绿体和细胞质流动 1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片 2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色,球形或椭球形。 用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色,细胞质接近无色。 知识概要： 取材 制片 低倍观察 高倍观察 考点提示： （1)为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶？ 因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。 （2）取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉？ 表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。 （3)怎样加快黑藻细胞质的流动速度？最适温度是多少？ 进行光照、提高水温、切伤部分叶片；25℃左右。 （4）对黑藻什么部位的细胞观察，所观察到的细胞质流动的现象最明显？ 叶脉附近的细胞。 （5）若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针，则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是怎样的？ 仍为顺时针。 （6）是否一般细胞的细胞质不流动，只有黑藻等少数植物的细胞质才流动？ 否，活细胞的细胞质都是流动的。 （7）若观察植物根毛细胞细胞质的流动，则对显微镜的视野亮度应如何调节？ 视野应适当调暗一些，可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。 （8）在强光照射下，叶绿体的向光面有何变化？叶绿体的受光面积较小有一面面向光源。 实验四 观察有丝分裂 1、材料：洋葱根尖（葱，蒜） 2、步骤：（一）洋葱根尖的培养 （二）装片的制作 制作流程：解离→漂洗→染色→制片 1. 解离: 药液: 质量分数为15%的盐酸,体积分数为95%的酒精(1 : 1混合液). 时间: 3~5min .目的: 使组织中的细胞相互分离开来. 2. 漂洗: 用清水漂洗约3min. 目的: 洗去药液,防止解离过度,并有利于染色. 3. 染色: 用质量浓度为0.01g / mL或0.02g / mL的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色3~ 5min 目的: 使染色体着色,利于观察. 4. 制片: 将根尖放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子把根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片. 然后用拇指轻轻地按压载玻片. 目的: 使细胞分散开来,有利于观察. （三）观察 1、先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密,有的细胞正在分裂。 2、换高倍镜下观察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂间期。（注意各时期细胞内染色体形态和分布的特点）。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。 考点提示： （1)培养根尖时，为何要经常换水？ 增加水中的氧气，防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。 （2）培养根尖时，应选用老洋葱还是新洋葱？为什么？ 应选用旧洋葱，因为新洋葱尚在休眠，不易生根。 （3）为何每条根只能用根尖？取根尖的最佳时间是何时？为何？ 因为根尖分生区的细胞能进行有丝分裂；上午10时到下午2时；因为此时细胞分裂活跃。 （4）解离和压片的目的分别是什么？压片时为何要再加一块载玻片？ 解离是为了使细胞相互分离开来，压片是为了使细胞相互分散开来；再加一块载玻片是为了受力均匀，防止盖玻片被压破。 （5）若所观察的组织细胞大多是破碎而不完整的，其原因是什么？ 压片时用力过大。 （6)解离过程中盐酸的作用是什么？丙酮可代替吗？ 分解和溶解细胞间质；不能，而硝酸可代替。 （7)为何要漂洗？ 洗去盐酸便于染色。 （8)细胞中染色最深的结构是什么？ 染色最深的结构是染色质或染色体。 （9）若所观察的细胞各部分全是紫色，其原因是什么？ 因为在根尖只有分生区的细胞能够进行细胞分裂；分生区的特点是：细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞处于分裂状态；不能用高倍镜找分生区，因为高倍镜所观察的实际范围很小，难以发现分生区。 （10）为何要找分生区？分生区的特点是什么？用高倍物镜找分生区吗？为什么？ 染液浓度过大或染色时间过长。 （11）分生区细胞中，什么时期的细胞最多？为什么？ 间期；因为在细胞周期中，间期时间最长。 （12）所观察的细胞能从中期变化到后期吗？为什么？ 不能，因为所观察的细胞都是停留在某一时期的细胞。 （13）观察洋葱表皮细胞能否看到染色体？为什么？ 不能，因为洋葱表皮细胞一般不分裂。 （14）若观察时不能看到染色体，其原因是什么？ 没有找到分生区细胞；没有找到处于分裂期的细胞；染液过稀；染色时间过短。 实验五 比较酶和Fe3+的催化效率 考点提示： （1）为何要选新鲜的肝脏？因为在不新鲜的肝脏中，过氧化氢酶的活性会由于细菌的破坏而降低。 （2）该实验中所用试管应选较粗的还是较细的？为什么？应选用较粗的，因为在较细的试管中容易形成大量的气泡，而影响卫生香的复燃。 （3）为何要选动物的肝脏组织来做实验，其他动植物的组织的研磨液能替代吗？因为肝脏组织中过氧化氢酶含量较丰富；其它动植物组织也含有少量的过氧化氢酶，所以能够替代。 （4）相同质量的块状肝脏和肝脏研磨液，哪一个催化效果好？为什么？研磨液效果好；因为它增加过氧化氢酶与过氧化氢的接触面积。 （5）滴入肝脏研磨液和氯化铁溶液时，可否共用下个吸管？为什么？不可共用，防止过氧化氢酶与氯化铁混合，而影响实验效果。 实验六 色素的提取和分离 1、原理：叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂丙酮或无水乙醇——提取色素 各色素在层析液中的溶解度不同,随层析液在滤纸上扩散速度不同——分离色素 2、步骤： （1）提取色素 研磨 （2）制备滤纸条 （3）画滤液细线：均匀，直，细，重复若干次 （4）分离色素：不能让滤液细线触及层析液 （5）观察和记录: 结果滤纸条上从上到下依次为:橙黄色(胡萝卜素)、黄色(叶黄素)、蓝绿色(叶绿素a)、黄绿色(叶绿素b). 考点提示： （1）对叶片的要求？为何要去掉叶柄和粗的时脉？绿色、最好是深绿色。因为叶柄和叶脉中所含色素很少。 （2）二氧化硅的作用？不加二氧化硅对实验有何影响？ 为了使研磨充分。不加二氧化硅，会使滤液和色素带的颜色变浅。 （3）丙酮的作用？它可用什么来替代？用水能替代吗？ 溶解色素。它可用酒精等有机溶剂来代替，但不能用水来代替，因为色素不溶于水。 （4）碳酸钙的作用？不加碳酸钙对实验有何影响？ 保护色素，防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。不加碳酸钙，滤液会变成黄绿色或褐色。 （5）研磨为何要迅速？要充分？过滤时为何用布不用滤纸？ 研磨迅速，是为了防止丙酮大量挥发；只有充分研磨，才能使大量色素溶解到丙酮中来。色素不能通过滤纸，但能通过尼龙布。 （6）滤纸条为何要剪去两角？ 防止两侧层析液扩散过快。 （7）为何不能用钢笔或圆珠笔画线？ 因为钢笔水或圆珠笔油中含有其它色素，会影响色素的分离结果。 （8） 滤液细线为何要直？为何要重画几次？ 防止色素带的重叠；增加色素量，使色素带的颜色更深一些。 （9） 滤液细线为何不能触到层析液？ 防止色素溶解到层析液中。 （10）滤纸条上色素为何会分离？ 由于不同的色素在层析液中的溶解度不同，因而它们随层析液在滤纸条上的扩散速度就不同。 （11）色素带最宽的是什么色素？它在层析液中的溶解度比什么色素大一些？ 最宽的色素带是叶绿素a，它的溶解度比叶绿素b大一些。 （12）滤纸条上相互间距最大的是哪两种色素？ 胡萝卜素和叶黄素。 （13)色素带最窄的是第几条色素带？为何？ 第一条色素带，因为胡萝卜素在叶绿体的四种色素中含量最少。 实验七 观察质壁分离和复原 1、条件：细胞内外溶液浓度差，活细胞，大液泡 2、材料：紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞（具紫色大液泡），质量浓度0.3g/mL的蔗糖溶液，清水等。 3、步骤：制作洋葱鳞片叶外表皮细胞临时装片→观察→盖玻片一侧滴蔗糖溶液,另一侧用吸水纸吸引→观察(液泡由大到小,颜色由浅变深,原生质层与细胞壁分离)→盖玻片一侧滴清水, 另一侧用吸水纸吸引→观察(质壁分离复原) 4、结论: 细胞外溶液浓度 ＞ 细胞内溶液浓度，细胞失水 质壁分离 细胞外溶液浓度 ＜ 细胞内溶液浓度，细胞吸水 质壁分离复原 知识概要：制片 观察 加液 观察 加水 观察 考点提示： （1）洋葱为何要选紫色的？若紫色过淡怎么办？ 紫色的洋葱有紫色的大液泡，便于观察液泡的大小变化；让阳光照射。 （2）洋葱表皮应撕还是削？为何？ 表皮应撕不能削，因为削的表皮往往太厚。 （3）植物细胞为何会出现质壁分离？ 动物细胞会吗？ 当细胞失去水分时，其原生质层的伸缩性大于细胞壁的伸缩性；动物细胞不会发生质壁分离，因为动物细胞没有细胞壁。 （4）质壁分离时，液泡大小和颜色的变化？复原时呢？ 细胞发生质壁分离时，液泡变小，紫色加深；当细胞质壁分离复原时，液泡变大，紫色变浅。 （5）若发生质壁分离后的细胞，不能发生质壁分离复原，其原因是什么？ 细胞已经亡（可能是外界溶液浓度过大，细胞失水过多或质壁分离时间过长） （6）高倍镜使用前，装片如何移动？ 若要把视野中上方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向上移动。若要把视野中左方的物像移到视野的正中心，则要将装片继续向左方移动，因为显微镜视野 中看到的是倒像。 （7）换高倍物镜后，怎样使物像清晰？视野明暗度会怎样变化？如何调亮？换高倍物镜后，应调节细准焦螺旋使物像变得清晰；视野会变暗，可调大光圈或改用反光镜的凹面镜来使视野变亮。 （8）所用目镜、物镜的长度与放大倍数的关系？ 目镜越长，放大倍数越小；物镜越长，放大倍数越大。 （9）物像清晰后，物镜与载玻片之间的距离和放大倍数的关系？ 物镜与载玻片之间的距离越小，放大倍数越大。 （10)总放大倍数的计算方法？放大倍数具体指面积的放大倍数还是长度的放大倍数？ 总放大倍数等于目镜放大倍数与物镜放大倍数的乘积；放大倍数是指细小物体长度或宽度的放大倍数。 （11）放大倍数与视野中细胞大小、多少、视野明暗的关系？ 放大倍数越大，视野中细胞越大、数目越少、视野越暗。 （12） 更换目镜，若异物消失，则异物在目镜上；更换物镜，若异物消失，则异物在物镜上、移动载玻片，若异物移动，则异物在载玻片上。 （13）怎样利用质壁分离现象来测定植物细胞液的浓度？ ①配制一系列浓度从小到大的蔗糖溶液 ②分别用以上不同浓度的溶液制成某植物细胞的临时装片 ③用显微镜观察某植物细胞是否发生质壁分离。某植物细胞液的浓度就介于不能引起质壁分离的浓度和能引起质壁分离的浓度之间。 实验八 DNA的粗提取与鉴定 考点提示： （1)鸡血能用猪血代替吗？为什么？ 不能，因为哺乳动物的红细胞中没有细胞核，不能提取DNA。 （2）鸡血中为何要加柠檬酸钠？为何要弃去鸡血细胞的上清液？ 防止血液凝固；因为上清液是血浆，不含细胞和DNA。 （3）胀破细胞的方法？能用生理盐水吗？ 向血细胞中加入蒸馏水，使细胞大量吸水而胀破；不能用生理盐水，因为血细胞在蒸馏水中不能吸收水分。 （4）该实验中最好应用玻璃烧杯还是塑料烧杯？为什么？ 最好用塑料烧杯，因为玻璃烧杯容易吸附DNA。 （5）前后三次过滤时，所用纱布的层数分别是多少？为什么？ 第一次用一层纱布，有利于核物质透过纱布进入滤液；第二次用多层纱布，能防止DNA丝状物透过纱布进入滤液；第三次用两层纱布，既有利于DNA透过纱布，又能防止其它杂质透过纱布。 （6）若实验中所得黏稠物太少，其原因是什么？ 第一次加蒸馏水过少，细胞未充分胀破；第二次加蒸馏水过多或过少；第一次过滤用了多层纱布；第二次过滤用了一层纱布；使用了玻璃烧杯。 （7）两次加入蒸馏水的目的分别是什么？ 第一次是为了使血细胞吸水胀破；第二次是为了降低氯化钠的浓度，有利于DNA有析出。 （8）实验中搅拌溶液时，为何总要沿一个方向搅拌？ 防止DNA分子受到损伤。 （9）两次析出DNA的方法分别是什么？原理分别是什么？ 第一次是加蒸馏水，降低氯化钠的浓度，促使DNA析出；第二次是加入冷酒精，因为DNA不溶于酒精溶液。 （10)三次溶解DNA的液体分别是什么？原理分别是什么？ 第一次、第二次都是用浓度为2mol/L的氯化钠溶液，第三次用的是0。015mol/L的氯化钠溶液。其原理是DNA在氯化钠中的溶解度，是随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为0。14mol/L时，DNA的溶解度最低。2mol/L的氯化钠溶液和0。015mol/L的氯化钠溶液对DNA的溶解度都比较高。 （11)鉴定DNA时为何要用两支试管？其现象分别是什么？ 其中不加DNA的试管起对照作用。该试管溶液不变色，另一支加有DNA的试管溶液变蓝色。 实验九 探究酵母菌的呼吸方式 1、原理: 酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸,产生二氧化碳和水： C6H12O6 ＋ 6O2 ＋ 6H2O 6CO2 ＋ 12H2O ＋ 能量 在无氧条件下进行无氧呼吸,产生酒精和少量二氧化碳： C6H12O6 2C2H5OH ＋ 2CO2 ＋ 少量能量 2、装置：（见课本） 3、检测：（1）检测CO2的产生：使澄清石灰水变浑浊，或使溴麝香草酚蓝水溶液由蓝变绿再变黄。 （2）检测酒精的产生：橙色的重铬酸钾溶液，在酸性条件下与酒精发生反应，变成灰绿色。 实验十 观察细胞的减数分裂 1、目的要求：通过观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片，识别减数分裂不同阶段的染色体的形态、位置和数目，加深对减数分裂过程的理解。 2、材料用具：蝗虫精母细胞减数分裂固定装片，显微镜。 3、方法步骤： （1）在低倍镜下观察蝗虫精母细胞减数分裂固定装片，识别初级精母细胞、次级精母细胞和精细胞。 （2）先在低倍镜下依次找到减数第一次分裂中期、后期和减数第二次分裂中期、后期的细胞，再在高倍镜下仔细观察染色体的形态、位置和数目。 4、讨论：（1）如何判断视野中的一个细胞是处于减数第一次分裂还是减数第二次分裂？ （2）减数第一次分裂与减数第二次分裂相比，中期细胞中的染色体的不同点是什么？末期呢？ 实验十一 低温诱导染色体加倍 1、原理：用低温处理植物分生组织细胞，能够抑制纺锤体的形成，以致影响染色体被拉向两极，细胞也不能分裂成两个子细胞，于是，植物细胞染色体数目发生变化。 2、方法步骤： （1）洋葱长出约1cm左右的不定根时，放入冰箱的低温室内（4℃），诱导培养36h。 （2）剪取诱导处理的根尖约0.5~1cm，放入卡诺氏液中浸泡0.5~1 h，以固定细胞的形态，然后用体积分数为95%的酒精冲洗2次。 （3）制作装片：解离→漂洗→染色→制片 （4）观察，比较:视野中既有正常的二倍体细胞,也有染色体数目发生改变的细胞. 3、讨论：秋水仙素与低温都能诱导染色体数目加倍，这两种方法在原理上有什么相似之处？ 实验十二 调查常见的人类遗传病 1、 要求：调查的群体应足够大；选取群体中发病率较高的单基因遗传病。如红绿色盲、白化病、高度近视(600度以上)等. 2、 方法: 分组调查,汇总数据,统一计算. 3、计算公式：某种遗传病的发病率= *100% 4、讨论: 所调查的遗传病的遗传方式, 发病率是否与有关资料相符, 分析原因. 实验十三 探究植物生长调节剂对扦插枝条生根的作用 1、常用的生长素类似物:NAA(萘乙酸), 2,4-D, IPA(苯乙酸). IBA(吲哚丁酸)等 2、方法： ①浸泡法：把插条的基部浸泡在配置好的溶液中，深约3cm，处理几小时或一天。处理完毕就可以扦插了。这种处理方法要求溶液的浓度较低，并且最好是在遮荫和空气湿度较高的地方进行处理。 ②沾蘸法：把插条的基部在浓度较高的药液中蘸一下（约5s），深约1.5cm即可。 3、预实验：先设计一组浓度梯度较大的实验进行探索,在此基础上设计细致的实验. 4、实验设计的几项原则: ①单一变量原则(只有溶液的浓度不同)；②等量原则(控制无关变量,即除溶液的浓度不同外,其他条件都相同)；③重复原则(每一浓度处理3~5段枝条) ；④对照原则（相互对照、空白对照）；⑤科学性原则 实验十四 探究培养液中酵母菌数量的动态变化 1、培养酵母菌（温度、氧气、培养液）：可用液体培养基培养 2、计数：血球计数板(2mm×2mm方格,培养液厚0.1mm) 3、推导计算 4、讨论：根据7天所统计的酵母菌种群数量画出酵母菌种群数量的增长曲线；推测影响影响酵母菌种群数量变化的因素。 实验十五 土壤中动物类群丰富度的研究 1、丰富度的统计方法通常有两种：记名计算法和目测估计法 记名计算法：指在一定面积的样地中，直接数出各种群的个体数目，这一般用于个体较大，种群数量有限的群落。 目测估计法：按预先确定的多度等级来估计单位面积上个体数量的多少。等级的划分和表示方法有：“非常多、多、较多、较少、少、很少”等等。 2、设计数据收集和统计表，分析所搜集的数据。 实验十六 种群密度的取样调查 考点提示： （1）什么是种群密度的取样调查法？ 在被调查种群的生存环境内，随机选取若干个样方，以所有样方种群密度的平均值作为该种群的种群密度。 （2）为了便于调查工作的进行，在选择调查对象时，一般应选单子叶植物，还是双子叶植物？为什么？ 一般应选双子叶植物，因为双子叶植物的数量便于统计。 （3）在样方中统计植物数目时，若有植物正好长在边线上，应如何统计？ 只计算该样方相邻的两条边上的植物的数目。 （4）在某地域中，第一次捕获某种动物M只，标志后放回原处。第二次捕获N只，其中含标志个体Y只，求该地域中该种动物的总数。 MN/Y （5）应用上述标志回捕法的条件有哪些？①标志个体在整个调查种群中均匀分布，标志个体和未标志个体都有同样被捕的机会。②调查期中，没有迁入或迁出。③没有新的出生或亡。 实验十七 探究水族箱（或鱼缸）中群落的演替 要求：（1）水族箱必须是密封的，且是透明的，放置于室内通风、光线良好的地方，但要避免阳光直接照射。 （2）组成成分：非生物成分、生产者、消费者和分解者 （3）各生物成分的数量不宜过多，以免破坏食物链 设计实验步骤常用“四步法”。 第一步：共性处理实验材料，均等分组并编号。选择实验材料时要注意应用一些表示等量的描述性语言，如：“生长一致的”，“日龄相同的，体重一致的”等等。分成多少组要视题目中所给的信息而定，（一般情况分两组）。编号最好用A、B、C或甲、乙、丙，而不用1、2、3 避免与实验步骤相混淆。 第二步：遵循单因子变量原则，对照处理各组材料。方法为一组为对照组（往往为处于正常生理状态的），其余为实验组，对照组与实验组只能有一个实验条件不同（单因子变量），其他条件要注意强调出相同来，这是重要的得分点或失分点。至于变量是什么要根据具体题目来确定。 第三步：相同条件培养（饲养、保温）相同时间。 第四步：观察记录实验结果。 实验结果的预测（预期）；首先要根据题目判断该题是验证性实验还是探究性实验，如果是验证性实验，则结果只有一个，即题目中要证明的内容。如果是探究性实验，则结果一般有三种：①实验组等于对照组，说明研究的条件对实验无影响。②实验组大于对照组,说明研究的条件对实验有影响,且影响是正相关。③实验组小于对照组,说明研究的条件对实验有影响,且影响是负相关。 1.观察DNA、RNA在细胞中的分布2.检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质3.用显微镜观察多种多样的细胞4.观察线粒体和叶绿体5.通过模拟实验探究膜的透性6.观察植物细胞的质壁分离及复原7.探究影响酶活性的因素8.叶绿体色素的提取和分离9.探究酵母菌的呼吸方式10.观察细胞的有丝分裂11.模拟探究细胞表面积与体积的关系12.观察细胞的减数分裂13.低温诱导染色体加倍14.调查常见人类遗传病15.探究植物生长调节剂和扦插枝条生根的作用16.模拟尿糖的检测17.探究培养液中酵母菌数量的动态变化18.土壤中动物类群丰富度的研究19.探究水族箱（或鱼缸）种群落的演替

这就是五变参数：

蛋白质含量，离子强度，溶液pH值，乙醇浓度，溶液温度。

1。蛋白质含量，愈高，共沉多；反之，分离愈彻底。当然有度。溶液太稀了，成本高。

2。离子强度：这与介电强度有关。

3。怠掸糙赶孬非茬石长将溶液pH值：调到目标蛋白等电点周围。

4。乙醇浓度：一般来说乙醇浓度多少，与目标蛋白的分子量有关：比如8%，可沉淀纤维蛋白原，20%可沉淀球蛋白，40%可沉淀白蛋白等等，当然，乙醇浓度与溶液pH值配合使用。加入乙醇不能过快，防止局部过浓。要边加边摇动。

否则，共沉多！或者局部变性。

5。溶液温度：必须低温，乙醇反应是个放热反应，如果温度高，可引起蛋白质变性，不可逆的变形。

这五变参数，要综合，动态的调整，可达到精确分离蛋白质的作用。

温度越高乙醇挥发越快。因为分子运动与温度有关，温度越高分子运动越剧烈，所以挥发的会更快。

乙醇液体密度是0.789g/cm³，乙醇气体密度为1.59kg/m³， 相对密度（d15.56）0.816，式量（相对分子质量）为46.07g/mol。沸点是78.4℃，熔点是-114.3℃。

纯乙醇是无色透明的液体，有特殊香味，易挥发。

乙醇的物理性质主要与其低碳直链醇的性质有关。分子中的羟基可以形成氢键，因此乙醇黏性大，也不及相近相对分子质量的有机化合物极性大。

扩展资料：

乙醇使用注意事项

泄漏：迅速撤离泄漏污染区人员至安全区，并进行隔离，严格限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴自给正压式呼吸器，穿消防防护服。尽可能切断泄漏源，防止进入下水道、排洪沟等限制性空间。

小量泄漏：用砂土或其它不燃材料吸附或吸收。也可用大量水冲洗，洗水稀释后放入废水系统。

大量泄漏：构筑围堤或挖坑收容；用泡沫覆盖，降低蒸气灾害。用防爆泵转移至槽车或专用收集器内，回收或运至废物处理场所处置。

灭火方法：抗溶性泡沫、干粉、二氧化碳、砂土。

灭火注意事项：尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持容器冷却，直至灭火结束。

实验室使用及灭火

1、应使用火柴点燃，不能用两个酒精灯对点，否则容易使酒精灯内的酒精燃烧。

2、使用完毕后，应用灯帽将火盖灭。严禁用嘴吹。

3、如不慎将酒精洒出并引燃，则应用湿抹布或用沙子将其盖灭。

参考资料来源：百度百科-乙醇

铼通常采取光度法、极谱法和ICP-MS法等进行测定。

光度法测铼的试剂很多，特别是三苯甲烷、噻嗪、吖啶类染料以及肟类、含硫基的有机试剂等均能与Re7+或Re4+形成有色配合物，大部分可被有机溶剂所萃取，一定量的钼不干扰测定。经萃取分离后的有机相有很深的颜色并与浓度成正比，可直接进行铼的光度法测定。

有关试剂的测试条件及灵敏度列于表62.19中。

表62.19 一些光度法测定铼的灵敏度比较

续表

肟类有机显色剂需预先将ReO-4与其他元素分离，再以氯化亚锡还原为Re(Ⅳ)，然后显色测定。

62.5.3.1 萃取分离-硫氰酸盐光度法

方法提要

试样经氧化镁烧结分解，水浸取，大量Fe、Mo、W、Nb、V、Ca、Mg、Al、Bi、Mn、Ag、Zn、Ni、Co、Cr、Sn、Cu、Te等不进入溶液或不干扰铼的测定。在酒石酸存在下，调节pH8～9，用氯化四苯胂-三氯甲基烷萃取分离高铼酸，可进一步分离V、W、Mo、Nb、Cu、Cr等干扰离子。

将三氯甲烷分出后置水浴上蒸干，以6mol/LHCl溶解高铼酸盐，以二氯化锡还原，硫氰酸盐显色，乙酸丁酯萃取，有机相于分光光度计430nm波长处，测量吸光度测定铼量。本方法适用于稀有和有色金属等一般矿石和岩石中铼含量的测定，也适用于钨矿石中铼量的测定。测定范围w(Re):(1～300)×10-6。

仪器

分光光度计。

试剂

氧化镁。

酒石酸。

盐酸

过氧化氢。

氢氧化铵。

三氯甲烷。

乙酸丁酯。

碳酸氢钠溶液(100g/L)。

氯化四苯胂(TPAC)溶液(20g/L)。

氯化钠溶液(100g/L)。

硫氰酸钾溶液(250g/L)。

二氯化锡溶液(350g/L)在(1+1)HCl中投入一定量颗锡粒，贮于棕色瓶中。

铼标准储备溶液ρ(Re)=50.0μg/mL称取10.00mg高纯金属铼于100mL烧杯中，加20mL(1+1)氢氧化铵，5mLH2O2，置水浴上溶解并蒸干，加少量水温热溶解，移入200mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

铼标准溶液ρ(Re)=5.0μg/mL用水稀释铼标准储备溶液制得。

酚酞指示剂(10g/L)乙醇溶液。

校准曲线

曲线A:分取0mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL铼标准溶液。曲线B:分取0mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL铼标准溶液，分别置于一组25mL带塞比色管中，补加水至8mL，加8mLHCl、混匀。加入1.5mLKSCN溶液，1.5mLSnCl2溶液(每加一次试剂都混匀)，放置20min后，加入6.0mL(曲线A)或10.0mL(曲线B)乙酸丁酯，振摇15min，放置分层后，取有机显色液于分光光度计上，在波长430nm处，用3cm(曲线A)或2cm(曲线B)比色皿，以乙酸丁酯作参比测量吸光度，绘制校准曲线。

分析步骤

根据铼的含量，称取0.1～2g(精确至0.0001g)试样。铼量小于5×10-6，称取2g5×10-6～30×10-6，称取1g30×10-6～60×10-6，称取0.5g大于60×10-6，则称取0.1～0.3g。也可用萃取剂体积进行调节。将试样置于预先盛有2gMgO的20mL瓷坩埚中(称取1g试样增加2gMgO)，搅拌均匀，再覆盖约0.5gMgO，置于高温炉中由低温逐渐升温至(630±20)℃保持2h，取出冷却。

将烧结物倒入已盛有4～5滴H2O2的100mL烧杯中，以热水洗坩埚数次，洗液倒入烧杯用水冲稀至50mL体积左右(浸出体积不宜太小，煮沸后体积约有30mL即可)，盖上表面皿，置电炉上煮沸10min，再移在低温控温电热板上保温2h，使溶液清澈后取下冷却。沉淀用中速滤纸过滤，滤液以100mL烧杯承接，沉淀用水洗5～6次。

滤液置控温电热板上蒸发至约10mL，加入1g酒石酸，取下，加1滴酚酞指示剂，用(1+1)氢氧化铵中和至溶液变红，用少量水移入已盛有2mLNaHCO3溶液的60mL分液漏斗中，体积控制为20mL，加入1mLTPAC溶液，10mL三氯甲烷，萃取2min，静置分层，用干滤纸条擦净漏斗颈部存在的水珠，小心地将三氯甲烷放入20mL干烧杯中。向水相中再加5mL三氯甲烷，萃取2min，同法将三氯甲烷合并入20mL烧杯中，加入0.1mLNaCl溶液，置沸水浴上蒸干。加入6mL(1+1)HCl，继续置沸水浴上加热5min，取下冷却。用10mL(1+1)HCl将烧杯内溶液移入25mL带塞比色管中，混匀。以下按校准曲线进行测定。

铼含量的计算参见式(62.2)。

62.5.3.2 环己酮萃取分离-α-糠偶酰二肟光度法

方法提要

试样经氧化镁烧结，热水浸取，大部分元素得到分离。微克量的钼、铋、砷、铅、镍等干扰元素，可用环己酮在碱性溶液中萃取分离。微量高铼酸在4.2～5mol/LH2SO4介质中被氯化亚锡还原为四价，四价铼可催化α-糠偶酰二肟的酸解，产生α-糠偶酰二酮。在320nm处有一新吸收峰(加入柠檬酸可促进催化反应)，可检出0.005～0.06μg/mLRe。本方法适用于稀有和有色金属等一般矿石和岩石中铼含量的测定，测定范围w(Re):(0.01～100)×10-6。

仪器

分光光度计。

试剂

氧化镁。

过氧化氢。

硫酸c(1/2H2SO4)=12.5mol/L。

环己酮。

三氯甲烷。

氢氧化钠溶液(200g/L)。

硫酸钠溶液(100g/L)。

柠檬酸溶液(192g/L)。

α-糠偶酰二肟溶液0.4gα-糠偶酰二肟溶于100mL乙醇。

氯化亚锡溶液称取0.7gSnCl2·2H2O于200mL烧杯中，加约30mL水，边搅拌边缓慢加入42mLH2SO4，待氯化亚锡全部溶解后移入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

铼标准储备溶液ρ(Re)=50.0μg/mL称取25.00mg金属铼置于50mL烧杯中，加入5mLHNO3，5mL(1+1)H2SO4，在控温电热板上加热溶解，蒸发至2～3mL，用水吹洗杯壁，再蒸发至硝酸全部除尽。用水移入500mL容量瓶中并稀释至刻度，混匀。

铼标准溶液ρ(Re)=1.0μg/mL用水稀释铼标准储备溶液制备。

校准曲线

分取0.00mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL铼标准溶液置于一组50mL分液漏斗中，加入5mLNaOH溶液、5mLNa2SO4溶液、10mL环己酮，萃取1min，静置分层后弃去水相。往有机相中加10mL水和10mL三氯甲烷，反萃取1min，分层后弃去有机相。水相放入50mL烧杯中，加0.5mL12.5mol/LH2SO4、数滴过氧化氢，置水浴上蒸发至1～2mL，反复加过氧化氢至黄色褪去，用水吹洗杯壁，蒸发至水分及过氧化氢完全逸出。

取下冷却，加2.5mL水、1mL柠檬酸溶液，用少量水将溶液移入10mL比色管中，加2mL2.5mol/LH2SO4，冷却，加2.5mLα-糠偶酰二肟溶液、1.5mLSnCl2溶液，用水稀释至刻度，混匀，放置过夜(温度应不低于20℃)，次日于分光光度计上，在波长380nm处测量吸光度，绘制校准曲线。

分析步骤

称取0.5～1g(精确至0.0001g)试样，置于已盛有3gMgO的瓷坩埚中，搅匀，再覆盖约1g，置高温炉中由低温升至700℃保持2h，取出冷却。用热水浸取，加数滴过氧化氢，煮沸30min，用中速滤纸过滤于100mL容量瓶中，用水洗烧杯及沉淀数次，并稀释至刻度，混匀。

分取20.00mL上述溶液于100mL烧杯中，在控温电热板上蒸发至近干，取下，加入5mLNaOH溶液，5mLNa2SO4溶液，移入50mL分液漏斗中，总体积为10mL左右。向分液漏斗中加10.0mL环己酮，萃取1min，以下按校准曲线进行测定。

铼含量的计算参见式(62.1)。

注意事项

烧结过程中，应经常开启炉门，以便充分氧化。

62.5.3.3 苯萃取-丁基罗丹明B光度法

方法提要

试样经氧化镁烧结，热水浸取。在2～3mol/LH3PO4介质中，高铼酸与丁基罗丹明B形成橙红色配合物，可用苯萃取铼的有色配合物，最大吸收峰在565nm波长处，摩尔吸光系数为4×104，借以进行光度法测定。本方法适用于稀有和有色金属等一般矿石和岩石中铼量的测定。测定范围w(Re):(1～300)×10-6。

仪器

分光光度计。

试剂

氧化镁。

磷酸。

氢氧化铵。

苯。

丁基罗丹明B溶液0.1g丁基罗丹明B溶于100mL水中。

铼标准溶液ρ(Re)=5.0μg/mL配制见62.5.3.1萃取分离-硫氰酸盐光度法。

校准曲线

分取0mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL铼标准溶液于一组25mL比色管中，加4mL(1+1)H3PO4，加水稀释至10mL，加入1mL丁基罗丹明B溶液，混匀。准确加入5.0mL苯，萃取1min，静置分层后，在分光光度计上，于560nm波长处，用1cm比色皿测量吸光度，绘制校准曲线。

分析步骤

根据试样中铼的含量，称取0.5～1g(精确至0.0002g)试样置于事先盛有3gMgO的瓷坩埚中，充分搅匀，表面再盖一层，放入高温炉中，逐渐升高温度650～700℃，保持2h，取出冷却。将烧结物移入150mL烧杯中，用40～50mL水浸取，加热煮沸10min，稍冷后进行过滤，用水洗烧杯及滤纸各3次，将滤液加热浓缩至10mL左右，取下稍冷，加4mL(1+1)H3PO4，继续加热蒸发至体积小于10mL，移入25mL比色管中，用水洗烧杯2次，加水稀释至10mL。以下按校准曲线进行测定。

铼含量的计算参见式(62.2)。

注意事项

1)氧化镁纯度对空白影响很大，使用前应进行实验选择。烧结过程中，应稍开启炉门，以充分氧化。

2)显色时的磷酸浓度:铼含量低时，以0.3～1mol/L为宜，大于此酸度，色泽显著降低，小于此酸度，空白稍带颜色，最好控制在0.5～1mol/L。铼含量高时，可提高适当酸度。

3)汞、硝酸根、碘离子，高价锰以及其他氧化剂能与丁基罗丹明B显色，应除去。

4)大于0.1mg的钨、钒和铬影响测定可分别采用酒石酸、抗坏血酸消除汞、硝酸根、碘离子。

62.5.3.4 催化光度法

方法提要

高铼酸盐可催化氯化亚锡还原碲酸钠成单质碲，在一定时间内所还原的碲量与铼量的浓度成正比，加入保护胶，碲呈棕黑色胶体存在于溶液中，于波长530～570nm，可用作光度法测定。

岩石矿物分析第三分册有色、稀有、分散、稀土、贵金属矿石及铀钍矿石分析

此反应若无高铼酸或其盐类存在时，在相当长的时间内是不会进行的。采用标准加入法，本法可测定0.001～0.1μg/mL铼。

仪器

分光光度计。

试剂

氧化镁。

三氯甲烷。

氢氧化钠溶液(200g/L)。

8-羟基喹啉溶液(25g/L)称取5g8-羟基喹啉于26mL(36+64)乙酸及适量水中，加热使之溶解，用水稀释至200mL。

氯化亚锡溶液(375g/L)称取37.5gSnCl2·2H2O溶于100mLHCl中。

混合液氯化亚锡溶液-500g/L酒石酸-浓盐酸-40g/L聚二烯醇(1+2+2+5)。

碲酸钠(5g/L)称取0.5gNa2TeO4加入5mLHCl及少量水溶解后稀释至100mL。

铼标准溶液ρ(Re)=50.0μg/mL配制见62.5.3.1萃取分离-硫氰酸盐光度法。然后配制铼含量为10.0μg/mL、1.0μg/mL、0.10μg/mL、0.050μg/mL、0.010μg/mL、0.005μg/mL、0.001μg/mL的系列。

酚酞指示剂(10g/L)乙醇溶液。

分析步骤

称取0.2～2g(精确至0.0001g)试样，置于预先铺有0.5～3.0gMgO的瓷坩埚中，充分搅匀，放入高温炉中逐渐升温到650℃，并在此温度下保持2h。取出冷却，用30～40mL热水将内容物移入150mL烧杯中，并洗净坩埚，加盖表面皿，在低温电热板上煮沸15～20min并保温至溶液清澈。取下稍冷，用中速滤纸过滤，用水洗烧杯及沉淀各3～4次，沉淀弃去。滤液收集在100mL烧杯中，在电热板上蒸发至5mL左右，将溶液移入50mL分液漏斗中(如有白色沉淀，可用小张滤纸或玻璃棉过滤除去)，加入1滴酚酞，如溶液呈红色，则用(5+95)HCl调至红色恰好褪去，再加入2滴氢氧化钠溶液、1mL8-羟基喹啉溶液，混匀后放置5min。加入8mL三氯甲烷，剧烈振荡0.5min，待静置分层后，放出三氯甲烷。补加2滴氢氧化钠及0.5mL8-羟基喹啉，再加入8mL三氯甲烷，如此进行第二次和第三次萃取，然后再用5mL三氯甲烷萃取2次以除尽残留的8-羟基喹啉。各次有机相均弃去。将水相移入100mL烧杯中，分液漏斗用少量水洗2～3次，将合并的水溶液置低温电热板上蒸发至3～5mL，移入10mL容量瓶中，稀释至刻度，混匀(母液)。

吸取2.0mL母液4份，分别放入10mL比色管中，为A、B、C、D，另再取空白1份为E。再向B、C、D中分别加入相当于试液含铼量的0.7倍、1.4倍、2.1倍的铼标准溶液。向5支比色管中加水使溶液体积各为4.0mL，加入1mL混合液，混匀。放置使5支比色管中溶液的温度一致，分别加入1mL碲酸钠溶液并立即混匀。放置，待溶液出现适当的棕色即可于430～470nm处测量吸光度。测量时应严格控制每支比色管从加入碲酸钠起到比色读数的那一段时间间隔相一致。如室温较低，可置于45℃水浴上显色。

按下式计算试样中铼的含量:

岩石矿物分析第三分册有色、稀有、分散、稀土、贵金属矿石及铀钍矿石分析

式中:w(Re)为试样铼的质量分数，μg/gmRe为试样中的铼量，μgm为称取试样的质量，ga、2a、3a为分别向比色管B、C、D中加入铼标准的质量，μgA、A1、A2、A3、A0分别为比色管A、B、C、D、E溶液的比色读数。

加入铼标准的量(a)应与试样中铼量比例适当，此值可由该矿区的钼、铼比求得，也可吸取1mL母液作单份比色测定，求得铼的大致含量。

注意事项

铜、汞、锗、锡、铅、锑、铋、砷、钌、锇在100μg内无影响，钼及钨的干扰用酒石酸消除钼对碲的还原亦有微弱的催化作用，可用硫化物分离后测定或用8-羟基喹啉-氯仿萃取分离钼。硝酸抑制反应，其他酸影响颜色强度，故采用标准加入法。

62.5.3.5 亚硫酸钠底液极谱法

方法提要

试样经氧化镁烧结，水提取，铼呈铼酸盐溶解于溶液中，而留在沉淀中的大部分共生元素分离。在6～10g/LNa2SO3溶液中，铼呈现良好的极谱波，半波电位为-1.59V(对饱和甘汞电极)。铼含量在0.2～4.0μg/mL之间，波高与浓度呈线性关系。

铬大于铼5倍时影响测定。本方法可以测定0.0001%以上的铼。

仪器

示波极谱仪。

试剂

氧化镁。

亚硫酸钠溶液(200g/L)。

铼标准储备溶液ρ(Re)=100.0μg/mL称取0.1000g高纯金属铼置于烧杯中，加入5mLHNO3，置于水浴中加热溶解，然后用5mLHCl逐HNO3，重复3次。蒸发至3mL左右，移入1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。用时逐级稀释至所需要的浓度。

校准曲线

取6份烧结过的氧化镁(与试样同时进行)，用20mL热水转入100mL烧杯中，分别加入含铼0μg、10μg、20μg、…、200μg的铼标准溶液，煮沸10min，冷却后移入已盛有20mLNa2SO3溶液的一组50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，放置澄清。分取部分上层清液，置于电解池中，起始电位为-1.3V，用示波极谱进行测定。绘制标准曲线。

分析步骤

称取0.1～2g(精确至0.0001g)试样，置于瓷坩埚中，加入2g粉状氧化镁，充分搅匀，再覆盖一层。置于高温炉中，逐渐升温到700℃烧结2h。取出冷却后，用20mL热水将烧结物移入100mL烧杯中，煮沸10min，以下操作同校准曲线。

铼含量的计算参见式(62.2)。

注意事项

在硫酸-硫酸钠底液中，有硫酸羟胺存在下，铼-碲催化体系既可以用来测定碲，同时可以测定微量铼。此外，在盐酸-二乙基二硫代氨基甲酸钠、硫酸-甲基醛-铜-碲、盐酸-硫氰酸钾-α-糠偶醛二肟等介质中，铼也能产生灵敏的催化波。有的体系灵敏度较高，检测下限能达到0.00xμg/mLRe。

62.5.3.6 硫酸-EDTA-聚乙烯醇-二苯胍底液催化极谱法

方法提要

试样经氧化镁烧结后，水提取，过滤。在硫酸-EDTA-聚乙烯醇底液中，加入适量二苯胍，可使铼的催化波大为提高，检出量可达0.001μg/mL。于电位-0.50V～-0.8V处，作导数极谱图。本方法适用于稀有和有色金属等一般矿石和岩石中铼含量的测定。测定范围w(Re):(0.01～100)×106。

试剂

氧化镁。

硫酸。

聚乙烯醇溶液(1g/L)。

二苯胍溶液(1g/L)加1滴(1+1)H2SO4。

碲溶液ρ(Te)=10.0μg/mL称取0.2500g金属碲于50mL烧杯中，加10mLHNO3，在水浴上加热溶解，然后加5mLH2SO4，蒸发至3mL，冷却，用水移入250mL容量瓶并稀释至刻度，混匀。再用水稀释至要求浓度。

混合底液称取3g盐酸羟胺，0.6gEDTA，用水溶解后，加40mL(1+1)H2SO4，然后依次加入7.5mL碲溶液、4mL聚乙烯醇溶液、15g抗坏血酸、2mL二苯胍溶液，用水稀释至100mL，混匀。现用现配。

铼标准溶液ρ(Re)=0.50μg/mL配制方法见62.5.3.2环己酮萃取分离-α-糠偶酰二肟光度法。

仪器

极谱仪(带导数部分)。

校准曲线

取0.00mL、0.20mL、0.60mL、1.00mL、4.00mL、8.00mL、12.00mL、16.00mL铼标准溶液或0mL、0.20mL、0.60mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL铼标准溶液，分别置于一组50mL烧杯中，置控温电热板上，加热蒸干，加入10.0mL混合底液微热溶解盐类，放置20min后，于极谱仪上，电位-0.5V～-0.8V处，作导数极谱图。绘制校准曲线。

分析步骤

根据试样中铼的含量，称取0.1～1g(精确至0.0001g)试样，置于已盛有2～3gMgO的瓷坩埚中，搅匀后再覆盖一层，置于高温炉中，逐渐升温至700℃，保持2h，取出冷却，置100mL烧杯中，加入30mL热水，加热煮沸5～10min。将溶液过滤于100mL烧杯中，用水洗烧杯和沉淀数次。滤液置控温电热板上加热蒸干，加入10.0mL混合底液微热溶解盐类，以下按校准曲线进行测定。

铼含量的计算参见式(62.2)。

注意事项

1)在烧结过程中，应稍开启炉门，以便充分氧化。

2)铼的催化波在4h内稳定性良好。碲量的多少影响铼催化波的波高，因此底液必须加准，10mL底液中含7.5μg碲为最佳量。二苯胍的加入能促使铼的催化波增高，加入量也应适当，过量反而使波高下降。

62.5.3.7 硫氰酸钾-α-糠偶酰二肟-盐酸底液催化极谱法

方法提要

试样经氧化镁烧结，热水浸取。在0.48mol/LHCl-3g/LSnCl2-0.5g/LKSCN-0.2g/Lα-糠偶酰二肟-!=0.008%丙酮体系中，铼在-0.93V处产生一灵敏的催化波，在0.1～0.8μg/mL铼浓度范围内，峰电流与浓度呈线性关系。本方法适用于稀有、有色金属等一般矿石和岩石中铼含量的测定。测定范围w(Re):(1～100)×10-6。

仪器

示波极谱仪。

试剂

氧化镁。

丙酮。

盐酸。

二氯化锡溶液(150g/L)溶于(1+4)HCl。

硫氰酸钾溶液(25g/L)。

α-糠偶酰二肟溶液0.5gα-糠偶酰二肟溶于100mL(5+95)乙醇溶液。

铼标准溶液ρ(Re)=10.0μg/mL称取0.1000g(精确至0.0001g)高纯金属铼于100mL烧杯中，加5mLHNO3，置水浴上溶解，加5～8mLHCl，赶去剩余的硝酸，重复3次，最后剩3mL左右，取下，用水移入1000mL容量瓶中并稀释至刻度，混匀。吸取20.00mL于200mL容量瓶中，用水稀释到刻度，混匀。

校准曲线

分取0mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、3.00mL、5.00mL铼标准溶液，分别置于一组25mL容量瓶中，用水稀释至10mL左右，加入2mL(1+1)HCl、0.5mLSnCl2溶液、0.5mLKSCN溶液、1mLα-糠偶酰二肟溶液、4滴丙酮，用水稀释至刻度，混匀。将溶液倒入电解池中，用示波极谱仪导数部分，-0.93V处测量峰电流，绘制校准曲线。

分析步骤

称取0.5～2g(精确至0.0001g)试样，置于预先盛有3～5gMgO的瓷坩埚中，充分搅匀，表面再覆盖一层，置高温炉中，从低温逐渐升至700℃并保持2h，取出冷却。将烧结物移入100mL烧杯中，用40mL热水浸取并煮沸3～5min，冷却。移入50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，放置澄清。

分取5.0～10.0mL清液于25mL容量瓶中，加入2mL(1+1)HCl，以下按校准曲线进行测定。

铼含量的计算参见式(62.1)。

注意事项

1)在烧结过程中，应稍开启炉门，以便充分氧化。

2)每加一种试剂均须混匀，低价铼只有在低酸度介质中与α-糠偶酰二肟、硫氰酸盐形成电活性配合物，可允许一定量EDTA、酒石酸、草酸等存在。

62.5.3.8 电感耦合等离子体质谱法

方法提要

采用氧化镁半熔法、过氧化钠熔融-丙酮萃取法或硝酸分解法处理试样，等离子体质谱法测定铼。一般ICP-MS的仪器检出限为0.001ng/mL，根据各种前处理方法的稀释倍数，并考虑到基体、空白等因素，对试样的测定限为w(Re):(0.2～2)×10-6。

仪器

等离子体质谱仪。

试剂

氧化镁。

过氧化钠。

丙酮。

硝酸。

过氧化氢。

氢氧化钠溶液(250g/L)。

铼标准储备溶液ρ(Re)=100.0μg/mL称取0.14406g高纯铼酸铵(NH4ReO4)置于烧杯内，溶于水中，移入1000mL容量瓶内，用水稀释至刻度，摇匀。

铼标准溶液ρ(Re)=20.0ng/mL由铼标准溶液稀释配制。

铱内标溶液ρ(Ir)=20.0ng/mL。

分析步骤

(1)试样处理

a.氧化镁半熔法。称取0.5g(精确至0.0001g)试样置于瓷坩埚中，加入1.5gMgO，搅拌均匀，再覆盖0.5g，放入高温炉，逐渐升温至700℃，焙烧时炉门开一缝，使加入空气以促进铼的氧化。保持1h后，取出冷却，将坩埚内半熔物转入150mL烧杯中，用50mL热水浸取。煮沸1h，冷却。转入50mL容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，放置。取上清液干过滤后上机测定。

b.过氧化钠熔融-丙酮萃取法。称取0.5g(精确至0.0001g)试样，置于高铝坩埚中，加入3gNa2O2，搅匀，再覆盖一层，置于高温炉中，在700℃熔融10min，取出冷却，将坩埚置于烧杯中，加30mL热水提取，洗出坩埚，冷却后将碱性试样溶液和沉淀一并转入120mLTeflon分液漏斗中，补加氢氧化钠溶液至浓度约为5mol/L。加入10mL丙酮萃取Re，振荡1min，静止分层(如沉淀太多，需多加氢氧化钠溶液，转入50mL离心管离心，将上清液转入分液漏斗进行分相)。弃去下层水相和沉淀，加2mLNaOH溶液到分液漏斗中。振荡1min，进一步洗去丙酮相中的杂质，弃去下层水相。将丙酮相转入50mL离心管中，离心10min，用滴管取出上部丙酮到已加有2mL水的100mLTeflon烧杯中(这一次离心是为了保证丙酮相不会夹杂碱液，防止以后溶液含盐量过高而导致雾化器堵塞)。在电热板上加热，开始保持约50℃，待丙酮蒸发完后，升高电热板温度到120℃，继续加热溶液至干。用0.5mLHNO3中和溶解残渣。有时HNO3提取液呈黄色，可能是丙酮的降解产物，反复加热近干并滴加H2O2和HNO3，可使溶液清亮无色，最终转入10mL比色管，用水稀释至刻度，摇匀，待上机测定。

c.硝酸分解法(适用于硫化矿物)。称取10～50mg试样，置于小烧杯中，加入5～10mLHNO3，盖上表面皿，于低温电热板加热至沸腾。继续加热至试样逐渐形成白色钼酸沉淀。去盖，继续加热至仅余约0.5mL溶液，加少量水加热，转入10mL比色管，用水稀释至刻度，摇匀。放置澄清后取上清液上机沉淀。

(2)上机测定

选用常规的ICP-MS工作参数继续测定。

测定同位素为185Re，内标为193Ir。以高纯水为低点、铼标准溶液为高点进行仪器校准，然后测定试样溶液。内标溶液在测定空白溶液、标准溶液和试样溶液时由三通导入ICP仪器。

注意事项

1)半熔法在焙烧过程中铼可能有少量挥发损失，结果略偏低，含量很低时可能偏低约10%。

2)半熔法处理试样不可选用187Re作为测定同位素，因为含铼试样中往往含有由铼衰变产生的放射性187Os，会对187Re的测定形成干扰。另两种处理方法因锇已被分离，不存在此问题。

3)用丙酮萃取铼的问题。丙酮与水混溶，当氢氧化钠浓度大于2mol/L时，丙酮与碱溶液分成两相。5mol/LNaOH时分相界面清晰。在碱性介质中大部分金属氢氧化物沉淀而得到分离。试样基体中的Mo、Fe、Ni、Cu、As等元素基本不被萃取。在当前所有Re的溶剂萃取方法中丙酮萃取方法较为简单快速并具有广泛的适用性。只需做一次萃取，不用反萃步骤，就可以把铼从辉钼矿、橄榄岩、玄武岩、黑色页岩、油页岩、黄铁矿、黄铜矿、铬铁矿、毒砂等基体中快速分离。

参 考 文 献

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核酸酶在体外适宜的条件也可以降解DNA，因此提核酸要在低温下进行，尽量减少DNA的降解。所以要将乙醇预冷。

用无水乙醇沉淀DNA原因

用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，

乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。

DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。

因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。

但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15－30分钟即可。