2,4-二羟基甲苯的主要用途有哪些

鉴定rna加入氨水、硝酸银作用

用硝酸银鉴定嘌呤碱基属于核酸的定性分析

【目的】

1 ．掌握测定核酸 的组成从而 定性分析 DNA 或 RNA 的方法。 2 ．熟悉测定核酸的组成从而定性分析 DNA 或 RNA 的 原理。

【原理】

RNA 和 DNA 均可被硫酸水解生成含氮碱（嘌呤碱与嘧啶碱）、戊糖（ RNA 中的核糖与 DNA 中的脱氧核糖）和磷酸。水解产物可用下列方法鉴定。 1 ．嘌呤碱的鉴定原理

嘌呤碱在弱碱性环境中能与硝酸银作用形成嘌呤银化合物。初为乳白色，稍放久为浅灰褐色絮状物。

2 ．核糖的鉴定原理

核糖经浓盐酸或浓硫酸作用，脱水生成糠醛，后者能与 3 ， 5- 二羟甲苯缩合形成鲜绿色化合物。该反应需三氯化铁作为催化剂。

3 ．脱氧核糖的鉴定原理

脱氧核糖在浓酸中脱水生成 ω- 羟基 γ- 酮基戊醛，后者与二苯胺作用生成蓝色化合物。

4 ．磷酸的鉴定原理

定磷试剂中的钼酸铵在酸性环境中以钼酸形式与样品中的磷酸反应生成磷钼酸。后者在还原剂氨基萘酚磺酸作用下形成蓝色的钼蓝。

【器材】

1 ． 试管与滴管

2 ． PH 试纸

3 ． 沸水浴

4 ． 带有长玻璃管的胶塞

【试剂】

1 ． 5% 硫酸

2 ． 5% 硝酸银溶液

3 ．浓氨水

4 ． 3,5- 二羟甲苯试剂

取 FeCl 3 ·6H 2 O 1.0g 溶于 6ml 水中，加浓盐酸 100ml ，混匀，此为 A 液。另配制 6%3,5- 二羟甲苯乙醇溶液为 B 液。临用时用 A 液 100ml 加 B 液

3.5ml 混合即可。

5 ．二苯胺试剂

取二苯胺 1.0g 溶于 100ml 冰乙酸中，加浓硫酸 2.75ml 。此二苯胺试剂遇光易变绿色，故临用前配制，贮于棕色瓶中，置冰箱保存。

6 ．钼酸试剂

取钼酸铵 2.5g 溶于 20ml 水中，加浓硫酸（ A·R ） 8.5ml, 冷却后再加水至 100ml ，放冷处可保存 4 周左右。

7 ．氨基萘酚磺酸溶液

取 15% 亚硫酸氢钠溶液 195ml 与 20% 亚硫酸钠溶液 5ml 混合，加氨基萘酚磺酸 0.5g ，在热水浴中搅拌使固体溶解（如不全溶，可滴加 20% 亚硫酸钠数滴，至多不超过 1ml 即可）。此溶液置冷处可保存 2-3 周，如颜色变黄需重新配置，临用前将上述溶液以蒸馏水稀释 10 倍应用。

8 ．核酸样品

称取粗制核酸样品 10mg/ 每组。或者，取本教材实验九从动物组织中提取出的核酸作为本次实验的样品。

【操作】

1 ．核酸的水解

向加入 10mg 核酸样品的试管（或者，向有核酸沉淀的离心管）中加入 5% 硫酸 4ml ，用玻璃棒搅匀，再用带长玻璃管的塞子塞紧管口，于沸水浴中加热 15min ，既得核酸的水解液。

2 ．核酸的鉴定

（ 1 ）嘌呤碱的鉴定：取小试管 2 支，分别标明测定与对照，按下表依次加入试剂，混匀，放置 15min ，观察嘌呤银沉淀的生成，并记录颜色。

注：加氨水（约 2 ～ 3 滴）以中和酸，呈碱性即可，需用 PH 试纸测试。若加氨水过多，则生成银氨络离子 [ Ag(NH 3 ) 4 ] + ，使银离子减少，嘌呤银沉淀减少。

（ 2 ）核糖的鉴定：取试管 2 支，分别标明测定与对照，按下表操作：

将两管同时放入沸水浴加热 15min ，观察颜色变化并记录。（煮 3 ～ 5min ，即可先观察）

（ 3 ）脱氧核糖的鉴定：取试管 2 支。分别标明测定与对照。按下表操作 :

将两管同时放入沸水浴中加热 10min ，观察颜色变化并记录。

（ 4 ）磷酸的鉴定：取试管 2 支，分别标明测定与对照，按下表操作：

于室温放置 10min 后，观察颜色变化并记录。

【注意事项】

1 ．为了安全，核酸水解时，避免将 长玻璃管的管口对准人 。

2 ．嘌呤碱的鉴定中氨水不能加的过多。

因为当RNA与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，后者与3，5-二羟基甲苯(地衣酚orcinol)反应，在Fe3+或Cu2+催化下，生成鲜绿色复合物。二苯胺是DNA经酸处理，使从嘌呤核苷酸中游离出的脱氧核糖在乙醛存在下和二苯胺反应，然后测定反应液的蓝色。

核酸的地衣酚法特异性差，凡戊糖均有此反应，DNA和其他杂质也能与地衣酚反应产生类似颜色。因此，测定PNA时可先测得DNA含量再计算RNA含量。二苯胺由于它不与RNA反应，所以可用来定量测定全核酸中的DNA含量。

目的：

1.掌握稀碱（NaOH）法分离酵母RNA的原理与方法

2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。

二、原理：酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA。提取的RNA有不同程度的降解。由此即得到RNA的粗制品。

三、器材

四、试剂和材料

将2mL 10％三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入 到400 mL浓盐酸中。

9．苔黑酚乙醇溶液 10 mL ：溶解6g苔黑酚于100 mL 95％乙醇中（可在冰箱中保存1个月）。

10．酵母粉 200 g

11.地衣酚（3,5—二羟甲苯试剂）：取比重1.19HCl 100ml，加入FeCl3·6H20 100mg及二羟甲苯100mg，混匀溶解后，置于棕色瓶中，此试剂必须在临用前新鲜配制。

五、操作

1.将15g酵母悬浮于90 mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液 中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150毫升锥形瓶 中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心（3000 r／min）15分钟，将上清液缓缓倾入30 mL酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离心（3000 r／min）3分钟。弃去清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。

2.核糖的鉴定：取试管两只，分别标明测定管与对照管，然后依次加入下列各试剂。

管号 RNA水解液 5％H2SO4 3，5-二羟甲苯

测定管 4滴 不加 6滴

对照管 不加 4滴 6滴

将两试管放入沸水浴内加热10分钟，比较两管之颜色。

实验结果

测定管由黄色变成绿色为阳性反应，对照管没有明显颜色反应。

注意事项

1.样品倒入玻璃离心管不能太满；

2.离心前玻璃离心管（套上塑料管套）放在天平上平衡好；

英文名： 4-AMINO-2-HYDROXYTOLUENE

分子式： C7-H9-N-O

可燃燃烧产生有毒氮氧化物烟雾

毒性： 中毒

健康危害： 口服-大鼠 LD50: 3600 毫克/公斤

中文名

对羟基苯甲醛[2]

外文名

p-Hydroxybenzaldehyde

化学式

C7H6O2[2]

分子量

122.121[2]

二丁基羟基甲苯，又名2,6-二叔丁基对甲酚，简称BHT，分子式为C15H24O，相对分子质量为220.36。二丁基羟基甲苯为白色结晶或结晶性粉末，基本无臭，无味，熔点69.5~71.5℃，沸点265℃，对热相当稳定。二丁基羟基甲苯的抗氧化作用是由于其自身发生自动氧化而实现的。

了解并掌握地衣酚法测定RNA含量的基本原理和具体方法。

二、原理：

RNA含量测定，除可用紫外吸收法及定磷法外，常用地衣酚法测定。其反应原理是：当RNA与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，后者与3，5-二羟基甲苯（地衣酚orcinol）反应，在Fe 3+或Cu 2+催化下，生成鲜绿色复合物。反应产物在670nm处有最大吸收。RNA浓度在20—250μg·ml-1范围内，光吸收与RNA浓度成正比。地衣酚法特异性差，凡戊糖均有此反应，DNA和其他杂质也能与地衣酚反应产生类似颜色。因此，测定PNA时可先测得DNA含量再计算RNA含量。

三、器材与试剂：

1．器材：

①分析天平。

②沸水浴锅。

③试管。

④吸量管。

⑤分光光度计 。

2．试剂

①RNA标准溶液（须经定磷确定其纯度）：取酵母RNA配成100微克/毫升的溶液。

②样品待测液：配成每毫升溶液含RNA干燥制品50—100微克。

③地衣酚试剂：先配0.1%三氯化铁的浓盐酸（分析纯）溶液，实验前用此溶液作为溶剂配成0.1%地衣酚溶液。

四、操作步骤：

1．标准曲线的制作

取12支干净烘干试管，按下表编号及加入试剂。平等作两份。加毕置沸水浴加热25min，取出冷却，以零号管作对照，于670nm波长处测定光吸收值。取两管平均值，以RNA浓度为横坐标，光吸收为纵坐标作图，绘制标准曲线。

2．样品的测定

取两支试管，各加入2.0ml样品液，再加2.0ml地衣酚-Cu 2+试剂。如前述进行测定。

五、结果与讨论：

1．绘制出标准曲线

2．RNA含量的计算

根据测得的光吸收值，从标准曲线上查出相当该光吸收的RNA含量，按下式计算出制品中RNA的百分含量：

注意事项

（1）样品中蛋白质含量较高时，应先用5%三氯乙酸溶液沉淀蛋白质后再测定。

（2）本法特异性较差，凡属戊糖均有反应。微量DNA无影响，较多DNA存在时，亦有干扰作用。如在试剂中加入适量CuCl2·2H2O可减少DNA的干扰，甚至某些已糖在持续加热后生成的羟甲基糖醛也能与地衣酚反应，产生显色复合物。此外，利用RNA和DNA显色复合物的最大光吸收不同，且在不同时间显示最大色度加以区分。反应2min后，DNA在600nm呈现最大光吸收，而RNA则在反应15min后，在670nm下呈现最大光吸收

BHT稳定性高，抗氧化能力强，在食品中的应用与BHA基本相同，但其抗氧化能力不如BHA。BHT遇热抗氧化效果不受影响，不像PG那样遇铁离子发生橙色反应。

BHT能有效地延缓植物油的氧化酸败，改善油煎快餐食品的贮藏期。在起酥油中有效，BHT无最适宜浓度，随BHT浓度增高，油脂的稳定性也提高。但在较高浓度时，油脂的稳定性提高速率变小，且浓度达0.02%以上时，会引入酚气味。BHT价格低廉，为BHA的1/5~1/8，可用作主要抗氧化剂。目前它是我国生产量最大的抗氧化剂之一 。