六种苯酚类化合物的高效液相色谱法测定
方法提要
在酸性条件下，用GDX-502固相萃取柱吸附水中酚类化合物，乙腈解析柱中有机酚，高效液相色谱-紫外检测器检测。
方法适用于饮用水、地下水及湖库水中苯酚、对硝基酚、间甲酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚、五氯酚6种酚类的测定。对水中6种酚通常可检测到10～50ng/L水平。
仪器
高效液相色谱仪带紫外检测器，恒流梯度泵系统。
色谱柱WatersSymmetryC8，4.6mm×250mm，粒径5μm或性质相似的色谱柱。
GDX-502固相萃取小柱将使用过的SPE小柱填充物去掉并清洗干净，湿法加入约为0.5g纯化溶胀后的GDX-502树脂，打开活塞放出甲醇，直到液面刚好达到树脂床顶部。用10mL乙腈淋洗树脂，再用10mL水淋洗树脂，每次淋洗保持液面不低于树脂床。
针头过滤器孔径0.45μm，直径13mm，有机系。
固相萃取装置12管固相萃取装置。
真空泵。
采样瓶1L具磨口玻璃塞的棕色玻璃细口瓶。
氮吹仪。
微量注射器10μL、50μL、100μL、1000μL等气密性微量注射器。
K.D浓缩瓶25mL，带1mL定量管，须标定容积后使用。
试剂
空白试剂水去离子水蒸馏再经Millipore处理。
高效液相色谱流动相为水(含1%乙酸)和乙腈的混合溶液。
碳酸氢钠溶液c(NaHCO3)=0.05mol/L。
硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)。
乙腈，甲醇HPLC级。
丙酮(C3H6O)农残级。
乙酸。
盐酸。
标准储备溶液苯酚、对硝基酚、间甲酚、2，4-二氯酚、2，4，6-三氯酚、五氯酚六种的混标，购自国家标准物质研究中心。保存在-18℃冰箱中。
GDX-502树脂使用前用丙酮浸泡数日，数次更换新溶剂到丙酮无色。再用乙腈回流提取6h以上。纯化后的树脂密封保存在甲醇中备用。
替代物标准2-氟苯酚和2，4，6-三溴苯酚混标。
样品的采集与保存
1)水样采集。必须采集在玻璃容器中，在采样点采样及盖好瓶塞时，样品瓶要完全注满，不留空气。若水中有残余氯存在，要在每升水中加入80mg硫代硫酸钠除氯。
2)水样保存。避光、4℃下中保存。采样后7d内完成提取。40d内完成分析。
分析步骤
1)水样预处理。用孔径0.45μm的玻璃纤维滤膜，去除水中机械杂质。根据水中酚类化合物含量，取水样50～1000mL，加入2-氟苯酚和2，4，6-三溴苯酚等替代物标准，用6mol/LHCl调至pH2。水样以10mL/min的流速流经已活化的GDX-502固相萃取柱。当水样完全流过柱子后，用0.05mol/L碳酸氢钠溶液10mL淋洗柱子。用N2或空气将柱中水分充分抽干。用4mL每次1mL乙腈淋洗小柱，前两次淋洗液需在柱中平衡10min，后两次平衡2min，合并淋洗液，最终用乙腈定容为1.00mL。0.45μm有机相滤膜过滤，HPLC分析。
2)校准曲线。
3)高效液相色谱分析条件。
紫外检测器:双波长检测，检测波长280nm和290nm。柱温35℃。
流动相组成:A泵，99%水+(1+99)乙酸B泵，100%乙腈。
流动相流量:1mL/min，恒流。梯度洗脱，洗脱程序，见表82.41。
表82.41 洗脱程序
4)色谱图的考察。见图82.13。
定性与定量分析
1)定性分析。以样品保留时间和标样保留时间相比较来定性。根据标准色谱图各组分的保留时间，确定出被测样品中目标物数目和名称。对有检出的样品需用其他方法确证，如GC-MS等技术。
图82.13 六种标准酚类样品在不同检测波长下的液相色谱图(2μg/mL)
2) 定量分析。每个工作日必须测定一种或几种浓度的标准溶液来检验校准曲线或响应因子。如若某一化合物的响应值与预期值间的偏差大于 10%，则必须用新的标准对该化合物绘制新的校准曲线或求出新的响应因子。使用紫外检测器时，6 种酚类的最大吸收波长不同，为提高分析灵敏度，苯酚、间甲酚采用 280nm 波长定量对硝基酚、2，4 -二氯酚、2，4，6-三氯酚、五氯酚采用 290nm 波长定量。计算公式参见式 (82.16) 。
方法性能指标
1) 精密度、检出限和线性范围。按实验方法，配制浓度为 0.5μg / mL 酚类混合标准样品，按选定的工作条件分析，重复检测 7 次，计算方法的精密度。检出限的测量是以相对于基线噪音 3 倍时组分峰高所对应的浓度。各组分的精密度、检测下限和线性范围见表82.42。
表82.42 方法精密度、检出限及线性范围
2) 准确度。分别将 50μL 浓度为 2μg / mL 的混合标准样品加入 0.25L 和 1.0L 试剂空白水中，用 502 树脂固相萃取柱吸附富集，洗脱后定容 1.0mL，HPLC 测定，计算加标回收率。结果见表82.43。
表82.43 方法的准确度
3) 基体加标回收率。从北京不同地区取护城河水过滤后，分别取 1L 水加入表82.44中不同量的标准样品，及未加入标准样品的 1L 水，经水样预处理，在 HPLC 上检测，得到加标回收率。
表82.44 地表污水加标回收率
注: 2-氟苯酚、2，4，6-三溴苯酚为替代物，回收率均符合控制限要求。
热的苯酚浓溶液冷却后的现象 热的苯酚浓溶液冷却后，只呈现浑浊，没有晶体析出，这是什么原因呢？原来苯酚的熔点很低（常压下为43℃），含水的苯酚熔点更低，当苯酚含10％以上水时，在常温下则呈液态。所以，我们实验中得到的浑浊液，实际上是液态苯酚和苯酚水溶液的混合液。由于温度低于70℃，因此，液态苯酚与水不能完全互溶而呈浑浊状。又因为在这种浑浊状的混合液中没有固态苯酚小颗粒，所以久置后也不会有晶体析出。故苯酚钠溶液通入二氧化碳后生成的苯酚呈液态与水分层，用分液的方法分离。 二、苯酚钠水溶液中滴加盐酸或通入二氧化碳气体充分反应后的现象 热的苯酚浓溶液冷却后，浑浊状的油层是沉积在底部的，这说明液态苯酚和少量苯酚水溶液所形成的油层密度较大；但当盐酸加入苯酚钠水溶液或二氧化碳气体通入苯酚钠水溶液中时，析出的较多苯酚所形成的浑浊状油层却浮于液面，这是为什么呢？这自然是水溶液层含氯化钠（NaCl）或碳酸氢钠（NaHCO3）致密度较大的缘故，因此有含水液态苯酚上浮且与水溶液分层的现象。 所以你的老师是对
苯酚的用处很多，一般常作用于药物资料、灭菌、消毒等职业中。在日常日子并不常见的苯酚会是危险品吗？公司先来了解一下苯酚是什么。
苯酚是一种有毒的、有特殊气味的无色针状固体，呈晶体状，是很重要的化工原料，可用于出产灭菌剂、树脂、防腐剂和药物，也能够用于处理消毒外科器械和排泄物。熔点是43摄氏度，微溶于水，易溶于有机溶剂，有腐蚀性。
苯酚是归于危险品，是第六类危险品有毒物质，危险品编号为UN 2821 6.1/PG 2。苯酚有很强的毒性一起又具有可燃性和强腐蚀性，可致人体灼伤，化学反应生动，可吸收空气中水分并液化，是极端危险品的一种化工原料，还会对环境有严峻的危害性，可对水体和大气形成污染。所以，不管在工作出产仍是在日子中都要分外小心。
已然苯酚如此危险，那么，苯酚在物流运输中又是怎么操作的呢？
在常温下苯酚是呈固态，但是运输和仓储的时分则需要将苯酚以液体的形状。苯酚的凝固点是在41摄氏度，为了使苯酚坚持液体就要将温度超越它的凝固点，所以要求相关操作设备可加热、可隔热等。
苯酚运输要求：
1、苯酚是有毒物质，需要有第六类运输资证的危险品物流公司运输，运用危险品运输专用车，危险品运输专用车配备有防静电设备即接地链，开车前查看好，防止静电导致焚烧。运输途中防止暴晒，半途远离火源、高温区等。
2、一般苯酚运输是运用槽罐车运输， 槽罐车的排气管要有阻火设备，防止火花导致火灾。一般容器资料是运用不锈钢系统，为了坚持苯酚不上色，由于酚的氧化产品是很简单是苯酚上色的，苯酚以液态的形式，运输时参加丙酮（至多70%）。
苯酚仓储要求：
1、苯酚归于危险品，仓储寄存有必要是有资证的危险品专用仓库，不能和其它危险品混存，通风良好、阴凉的环境。危险品仓库内装有相关的温度湿度监控设备，温度低于30度，湿度低于百分之70。
2、苯酚是有毒有腐蚀性无知，所以工作人员有必要穿戴防护设备，防护眼镜、防毒服、防化学手套等，储区应备有适宜的资料收容泄漏物。应严厉执行极毒物品“五双”管理准则。
总归，牢记苯酚是归于危险品，危险品中的第六类，没有危险品运输仓储资证是不能运输和寄存的，有苯酚运输需求的建议找个正规的危运企业，有苯酚仓储需求的则要找个有第六类仓储资证的危化品仓库，究竟现在危险品管控很严厉。你们能够找世昌运输公司，一起具有苯酚运输和仓储资证的危险品物流公司，可为客户提供危险品运输仓储配送服务。
晚上好，苯酚无论在冷水还是热水中都有溶解度，微溶于冷水易溶于60度以上的热水，它的水溶液既不是悬浊液也不是乳浊液为无色澄清液体（溶解性能类似硼酸的溶解系数，饱和时多余添加量为不溶性固体沉淀）。苯酚本身不属于表面活性剂的范畴，如果要让它与水形成乳浊液形式需要使用o/w型非离子表活来制备，请参考。它可以与水形成乳浊液，无法形成悬浊液——「悬浊液」的含义是非溶解型固体溶质在溶剂中呈悬浮支持状态，比如我们常见的喷墨打印机水性颜料墨水就是悬浊液。苯酚水溶液是无色透明的就不叫「浊」了。
