怎么配苯酚溶液?
5%的苯酚溶液
苯酚100g,铝片0.1g,碳酸氢钠0.05g,加热蒸馏,收集182℃蒸馏液,然后称取5g,定容100mL。
苯酚的沸点是182度。用一般的蒸馏装置就可以,水冷凝。收集蒸馏液,如果是苯酚是液体,那用烧杯直接称取液体5g,加水,然后倒入100ml容量瓶,用水洗涤烧杯,补满就行了
配制方法:质量分数p=0.2% 的苯酚溶液
【1】确定配制体积为500ml时,在500ml烧杯中称量苯酚1.0g,加蒸馏水499ml,溶解混合均匀即可。
【2】然后转移到500ml 棕色试剂瓶中,贴标签。
(1)将较大量的苯酚溶在水中,得到苯酚悬浊液,过滤得苯酚溶液.这种方案纯度较高.
(2)将较大量的苯酚溶在热水中,冷却至室温,得到苯酚悬浊液,过滤得苯酚溶液.这种方案速度较快且更能保证饱和但是因加热的过程在空气中进行,易加快苯酚氧化速度而使制得的苯酚溶液中混有较大量的苯醌等氧化产物.
1. 使用原料:大多数市售液化苯酚是清亮无色的,无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色,应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚,结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物,这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此,苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要,我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
2. 操作注意:苯酚腐蚀性极强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行,与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。
3. 苯酚平衡:因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相,因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上,苯酚平衡操作方法如下:
① 液化苯酚应贮存于-20℃,此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温,然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
② 加入羟基喹啉(8-Quinolinol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂,同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。
③ 加入等体积的1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
④ 重复操作步骤③。
⑤ 加入等体积的0.1M Tris-HCl(pH8.0),使用磁力搅拌器搅拌15分钟,静置使其充分分层后,除去上层水相。
⑥ 重复操作步骤⑤,稍微残留部分上层水相。
⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
②取适量苯酚溶于适量氢氧化钠溶液,再向生成的苯酚溶液中加入醋酸溶液,可以看到有苯酚重新析出,说明苯酚酸性比醋酸弱,而醋酸是弱酸,则苯酚一定是弱酸。
苯酚红在三种常见的溶剂中,溶解性都不高:
1g苯酚红溶于约1300ml水、约350ml乙醇、500ml丙酮。
用这三种溶剂直接溶解,不可能达到0.5%的浓度。苯酚红做酸碱指示剂的时候,一般配成0.1%。
浓度超过0.28%的苯酚红溶液,是加入强碱助溶的。此时苯酚红不用做酸碱指示剂。
0.5%的苯酚红配置方法如下:
1、取少量苯酚红在研钵中研碎后,准确称取苯酚红1.000g。
2、在烧杯中加入0.1mol/L的氢氧化钠溶液30ml。
3、加入苯酚红,搅拌至完全溶解。
4、将溶液转移至200ml容量瓶,用 去离子水 洗涤烧杯三次,洗涤水一并转移至容量瓶中。
5、定容,摇匀备用。
注意事项:
1、苯酚红研碎后有利于溶解。
2、如果实验室内没有配置好的氢氧化钠溶液,也可以称取0.12g氢氧化钠+30ml水在烧杯内溶解后,再加入苯酚红。