在DNA的沉淀实验中,为什么要把乙醇预冷
核酸酶在体外适宜的条件也可以降解DNA,因此提核酸要在低温下进行,尽量减少DNA的降解。所以要将乙醇预冷。
用无水乙醇沉淀DNA原因
用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,
乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。
因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。
但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。
用无水乙醇沉淀DNA.这是实验中最常用的沉淀DNA的方法.乙醇的优点是可以任意比和水相混溶.乙醇与核酸不会起任何化学反应.对DNA很安全.因此是理想的沉淀剂.
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在.当加入乙醇时.乙醇会夺去DNA周围的水分子.使DNA失水而易于聚合.一般实验中.是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合.其乙醇的最终含量占67%左右.因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵).但是加95%的乙醇使总体积增大.而DNA在溶液中有一定程度的溶解.因而DNA损失也增大.尤其用多次乙醇沉淀时.就会影响收得率.折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵.最后的沉淀步骤要使用无水乙醇.也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15-30分钟即可.
1、冰乙醇是冰醋酸(乙酸),也叫醋酸(36%--38%)、冰醋酸(98%),化学式CH3COOH,是一种有机一元酸,为食醋主要成分。纯的无水乙酸(冰醋酸)是无色的吸湿性固体,凝固点为16.6℃(62℉),凝固后为无色晶体,其水溶液中呈弱酸性且蚀性强,蒸汽对眼和鼻有刺激性作用。
2、吸入后对鼻、喉和呼吸道有刺激性,皮肤接触,轻者出现红斑,重者引起化学灼伤。
如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。