水溶性载体材料有哪些
(1)聚乙二醇类。一般选用分子量1000~20000的peg类作固体分散体的载体材料,最常用的是peg4000或peg6000,它们的熔点低(50~63℃),毒性较小,能够显著增加药物的溶出速率,提高药物的生物利用度。油类药物宜采用分子量更高的peg12000或peg6000与peg20000的混合物作载体。另外s-40可使某些在peg6000中溶解不良的药物明显增加溶解度,提高溶出速率和生物利用度。
(2)聚维酮类。易溶于水、乙醇和氯仿,但成品对湿的稳定性较差,贮存过程中易吸湿而析出药物结晶。由于熔点高(150℃变色),宜采用溶剂法(共沉淀法)制备固体分散体,不宜用熔融法,pvp共沉淀法主要使药物形成非结晶性无定形物。pvp的平均分子量愈小,形成的共沉淀物溶出速率愈高。
(3)表面活性剂类。大多采用聚氧乙烯/聚氧丙烯嵌段共聚物。常用的有poloxamer188,为白色蜡状固体或片状固体,能溶于水,采用熔融法或溶剂法制备的固体分散体,其增加药物溶出的作用明显大于peg类载体。
(4)尿素。极易溶解于水,稳定性好。由于本品具有利尿和抑菌作用,主要应用于利尿药类或增加排尿量的难溶性药物作固体分散体的载体,如氢氯噻嗪。医学|教育|网搜集整理
(5)有机酸类。该类载体材料的分子量较小,易溶于水而不溶于有机溶剂。如枸橼酸、酒石酸、琥珀酸、胆酸及去氧胆酸等载体,多形成低共熔混合物。本类载体不适于对酸敏感的药物。
(6)糖类、醇类与其他聚乙二醇类复合载体。常用作载体的糖类有:右旋糖酐、半乳糖、葡萄糖和蔗糖等;醇类有:甘露醇、山梨醇、木糖醇等。它们的特点是水溶性强,毒性小,适用于剂量小、熔点高的药物。此外,糖类多与peg类聚合物联合使用。
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A.中性去垢剂 又称非离子表面活性剂,对蛋白质的变性作用影响较少,宜于蛋白质或酶提取之用。一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类,如PEG200;多元醇类表面活性剂,如山梨醇、司盘类和吐温类;聚氧乙烯脂肪醇醚,如苄泽类、平平加类;聚氧乙烯烷基苯酚醚,如Igepal CO、乳化剂OP、Triton、Pluronic(用作消泡剂、润湿剂、增溶剂)、泡敌。中性去垢剂作用后可通过Sephadex LH-50柱除去;也可直接上DEAE-Sephadex柱层析分离目的蛋白,不必先除去去垢剂。
B.阴离子去垢剂 常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。前者可促进核蛋白的溶解,将核酸释放出来,并对核酸酶有一定抑制作用,常用于核酸的提取。
C.阳离子去垢剂 如洁尔灭、新洁尔灭、CTAB、CPC、ZEPH、克菌定、消毒净(TMPB)、杜灭芬等,消毒灭菌类居多。
D.天然表面活性剂 又称为生物表面活性剂,包括种类较为广泛,如各种树胶(阿拉伯胶、杏胶、桃胶、果胶)、明胶、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、胆甾醇、胆酸类、多糖类(如环糊精)等。
E.两性表面活性剂 在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质,起泡性好,去污力也强;在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征,其杀菌性很强。
SDS是十二烷基硫酸钠,
RIPA裂解液组成: 50 mM Tris-HCl (pH 7.4,三羟甲基氨基甲烷-盐酸), 150 mM NaCl, 1% NP-40,0.1% SDS(不同公司的配比不同,有用Tris-hcl PH=8.0的,加0.5%的去氧胆酸钠)
NP-40(Tergitol-type )是很温和的去垢剂,主要用于全细胞蛋白的提取,全称乙基苯基聚乙二醇-40.
tris-triton组成:10 mM Tris,100 mM NaCl,1 mM EDTA,1 mM EGTA,1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚),10%的甘油,0.1% SDS,0.5% deoxycholate(脱氧胆酸盐).
dǎo biàn shuān
2 中药部颁标准2.1 拼音名Daobian Shuan
2.2 处方猪胆膏 适量(相当于总胆酸 200g) 醋酸洗必泰 0. 15g
2.3 制法以上二味,另取甘油 100g水浴加热至80℃,加入醋酸洗必泰,搅拌溶解后,加入猪 胆膏,不断搅拌至无粒状物,备用。取 700g聚乙二醇4000、 500g聚乙二醇6000,水浴加热溶解 后,缓缓加入甘油、猪胆膏混合液中,于80~100℃保温,搅拌混匀后,倾注于模具中,冷却, 取出,制成1000粒,即得。
2.4 性状本品为浅棕色的栓剂。
2.5 鉴别
取本品1粒,加热水15ml使溶解,滤过,滤液供以下试验:
(1)取滤液5ml,加糠醛3~5滴,摇匀。沿管壁滴加硫酸1ml,两液接界处显紫红色。
(2)取滤液2ml,加稀盐酸数滴,即生成白色凝乳状沉淀。
(3)取滤液5ml,加醋酸铅试液数滴,即生成白色沉淀。
2.6 检查应符合栓剂项下有关的各项规定(附录 Ⅰ W)。
2.7 含量测定取本品10粒,置250ml容量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取 25ml置烧瓶中,加水5ml,加氢氧化钠4. 5g,振摇使溶解,候冷,加乙醇1ml,加热回流12小时, 加水30ml,滤过,滤液移入分液漏斗中,容器与滤器用热水20ml洗涤,洗液并入分液漏斗中,滴 加硫酸使成酸性,放冷,用乙醚振摇提取4次(50、50、30、30ml),合并乙醚液,用水洗涤2次, 每次10ml,将水洗液合并,再用少量乙醚提取,提取液并人上述醚液中,用少许无水硫酸钠脱水 干燥后,滤人称定重量的容器内,滤器用少量乙醚洗涤,醚液并入滤液中,低温挥去乙醚,在 105℃干燥至恒重,计算,即得。 本品每粒含总胆酸应为标示量的85.0~l15.0%。
2.8 功能与主治润肠通便。用于肠燥便秘。
2.9 用法与用量直肠给药,便秘时使用,一次1粒,或遵医嘱。塞入 *** 内约3cm深处为宜。
2.10 规格每粒含总胆酸200mg
2.11 贮藏密封,遮光,在30℃以下保存。 附:猪胆膏的制备与质量标准 猪胆膏 本品为鲜猪胆汁制成的浸膏,含总胆酸量以干燥品计,不得少于55%。
2.12 制法取新鲜猪胆汁,浓缩至半量,用适量乙醇沉淀二次,第一次使含醇量达70%,第二 次达75%,滤过,滤液回收乙醇,浓缩成膏状,置105℃干燥至水分低于30%,即得。
2.13 性状本品为棕黄色的膏状物;气腥,味苦。 本品有引湿性;在水或乙醇中易溶,在乙醚中不溶。
2.14 检查干燥失重 取本品,在105℃干燥6小时,减失重量不得过30.0%(附录 Ⅸ G)。
2.15 含量测定取经干燥失重的样品约0. 5g,精密称定,加15%氢氧化钠溶液30ml与乙醇 1ml,照导便栓含量测定项下自“加热回流12小时”起,依法测定,即得。
2.16 用途供生产导便拴用。 四川省药品检验所 起草
古籍中的导便栓 《本草便读》:[兽部兽类]猪脊髓
(1) Tris 吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。
(2) 氨基乙酸:吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。避免吸入尘埃。
(3) X-半乳糖 (X-gal):对眼睛和皮肤有毒性。使用粉剂时遵循常规注意事项。应注意的是,X-gal 溶液是在一种有机溶剂(DMF)中制备的。
(4)β-半乳糖苷酶:有刺激性,可产生过敏反应。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。
(5)苯二胺 :吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(6)苯酚:有剧毒性和高度腐蚀性,可致严重烧伤。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好合适的手套和护目镜,穿好防护服,在通风橱内操作。若有皮肤接触药物,可用大量清水冲洗,并用肥皂和水清洗,不要用乙醇洗。
(7)苯甲基磺酰氟化物(PMSF):为一有剧毒的胆碱酯酶抑制剂。对上呼吸道的黏膜、眼睛和皮肤有极大损害。戴好合适的手套和护目镜,在通风橱内操作。万一眼睛或皮肤接触到此药品,立即用大量的水冲洗,丢弃被污染的衣物。
(8)苯甲酸:有刺激性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜,不要吸入。
(9)苯甲酸苄酯:有刺激性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。避免接触眼睛。戴好合适的手套和护目镜。
(10)苯乙醇:有刺激性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜,远离火源、火花和明火。
11)丙烯酰胺(未聚合的):为一种潜在的神经毒素,可通过皮肤吸收(有累积效应)。避免吸入尘埃。称量丙烯酰胺和亚甲基双酰胺粉末时,戴好手套和面罩,在化学通风橱内操作。聚合的丙烯酰胺是无毒的,但是使用时也应小心,因为其中可能喊有少量未聚合的丙烯酰胺。
(12)蛋白酶K:有刺激性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。
(13)碘化丙锭:吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。刺激眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。可诱导突变并可能致癌。戴好手套和护目镜,穿好防护服,在通风橱内小心操作。
(14)碘乙酰胺:能碱基化蛋白质上的氨基,从而影响抗原的氨基酸序列分析。有毒性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作,勿吸入尘埃。
(15)叠氮化钠:有剧毒性,可阻断细胞色素电子转运系统。含此药物的溶液要明确标记。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜,并小心使用。此药品为氧化剂,故保存时要远离可燃物品。
(16)多聚甲醛:有剧毒。易通过皮肤吸收,并对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有严重破坏性。避免吸入尘埃。戴好手套和护目镜,在通风橱内操作。多聚甲醛是甲醛的未解离形式。
(17)3,3’-二氨基联苯胺四氢氯化物:为一种致癌剂,操作时要非常小心。避免吸入气体。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(18)二甲苯:可燃,高浓度有麻醉作用。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。始终远离热源、火花和明火。
(19)二甲苯蓝:见二甲苯。
(20)二甲次胂酸钠:可能为致癌剂,并含有砷,有剧毒性。戴好手套和护目镜,只在通风橱内操作。
(20)二甲次胂酸钠:可能为致癌剂,并含有砷,有剧毒性。戴好手套和护目镜,只在通风橱内操作。
(21)N,N-二甲基酰胺(DMF):刺激眼睛、皮肤和黏膜。可通过吸入,摄入,和皮肤吸收发挥其毒性。慢性吸入可导致肝、肾损害。戴好手套和护目镜,在通风橱内操作。
(22)二甲亚砜(DMSO):吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜,在通风橱内操作。DMSO为可燃物保存于密封容器中。远离热源、火花和明火。
(23)二硫苏糖醇(DTT):为一强还原剂,有恶臭味。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。当使用固体形式或高浓度溶液时,戴好手套和护目镜并在通风橱内操作。
(24)4ˊ,6-二脒基-2ˊ-苯基吲哚盐酸(DAPI):可能为一种致癌剂。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。可引起刺激。避免吸入。戴好手套和护目镜,在通风橱内操作。
(25)放射性物质:当计划的一个实验涉及放射性物质的使用时,应包括以下内容:同位素的理化性质(如半衰期,放射型,辐射能量),辐射物质的化学形式,其辐射度(具体的活性)总量,化学浓度,需要使用多少就预定多少,使用放射性物质时,要始终戴好手套和护目镜,穿实验室工作服。X和γ射线为由仪器产生放射性物质辐射出的短波电磁波,它们会丛放射源辐射出来或聚成光束。它们的潜在危险决定于暴露于其中的时间、强度和它的波长。。
(26)放线菌素D:是一种畸胎剂和致癌剂,有剧毒。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害,甚至是致命的。应避免吸入。戴好手套和护目镜,并始终在化学通风橱内操作,放线菌D见光分解。
(27)高压玻璃器皿时要格外小心。高压锅和金属容器中的玻璃器皿,宜放入金属网中或蒲氏隔板中。在真空状态下使用玻璃器皿,如真空收集器、干燥设备或氩气条件下的反应器等,要谨慎操作。戴好护目镜。
(28)过二硫酸铵:对黏膜组织、上呼吸道、眼睛和皮肤有极大的破坏性。吸入可致命。戴好手套和护目镜,穿好防护服。必须在化学通风橱内操作。操作后要彻底清洗。
(29)过氧化氢:有腐蚀性、毒性,对皮肤有强损害性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜,只在化学通风橱内操作。
(30)环乙酰亚胺:吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜,只在化学通风橱内操作。
(31)磺基蓖麻酸(二水合物);对黏膜和呼吸系统有极大破坏性。不要吸入粉尘,戴好手套和护目镜,在化学通风橱内操作。
(32)甲氨蝶呤(MTX):为一种致癌剂和致畸胎剂。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。暴露于其中可导致胃肠反应,骨髓抑制,肝或肾损害。戴好手套和护目镜,在化学通风橱内操作。
(33)甲醇:有毒,可致失明。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。要有足够的通风以减少挥发气。不要吸入这些气体。戴好手套和护目镜,在化学通风橱内操作。
(34)甲基磺酸乙酯(EMS):为一种可诱导机体突变和致癌的挥发性有机溶剂。吸入,摄入,皮肤吸收可造成伤害。
35)甲醛:有剧毒性和挥发性。也是一种致癌剂。可通过皮肤吸收,对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激或损伤。避免吸入气体。戴好手套和护目镜。始终在通风橱内操作。远离热源、火花和明火。
(36)甲酸:有剧毒,对黏膜组织、上呼吸道、眼睛、皮肤有极大的损伤。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(37)甲酰胺:可导致畸胎。其挥发的气体刺激眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。操作高浓度甲酰胺时要在通风橱内操作。尽可能将反应的溶液盖住。
(38)焦磷酸钠:有刺激性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。
(39)焦碳酸二乙酯(DEPC):是一种潜在的蛋白质变质剂,且为可疑的致癌剂。开启时瓶口不要指向操作者或其他人。瓶内压可导致喷溅。戴好手套并穿实验室工作服,在通风橱内操作。
(40)聚丙烯酰胺:无毒性,但仍应谨慎使用,因为其中可能含有少量未聚合的物质。
(41)聚乙二醇(PEG):吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。避免吸入粉末。戴好手套和护目镜。
(42)菌种(运输):健康教育福利部门根据运输器具将各种细菌划分为不同的类别。大肠杆菌的非病原种(K12)和枯草芽孢杆菌为第一类,正常运输条件下是无危害或危害性很微小的。但是沙门菌、嗜血杆菌、链霉菌和假单孢菌的一些菌种为第二类。第二类细菌为“一般潜在危害剂:能造成不同严重程度的疾病,但在普通实验室技术下可操作。”
(43)抗淬灭剂:见苯二胺。
(44)考马斯亮蓝:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
(45)联结剂(DMP):刺激眼睛、皮肤和黏膜。可通过吸入,摄入,皮肤吸收发挥其毒性。不要吸入气体,戴好手套、面罩和护目镜。
(46)链霉素:有毒性,怀疑为致癌剂和突变诱导剂。可导致过敏反应。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
(47)亮肽素;吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(48)邻苯二甲酸二丁酯:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入气体。
(49)磷酸二氢钠:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(50)磷酸:高腐蚀性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
(51)磷酸钾:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘,在通风橱内操作。
(52)磷酸钠:刺激眼睛和皮肤。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。
(53)磷酸氢钠:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(54)硫氰酸胍:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
(55)硫氰酸胍盐;见硫氰酸胍。
(56)硫酸:剧毒性,对黏膜组织、上呼吸道、眼睛和皮肤有极大的损伤。可造成烧伤,与其他物质(如纸)接触可能引发火灾。戴好手套和护目镜,在通风橱内操作。
(57)硫酸镁:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(58)氯仿:刺激眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。为一种致癌剂。有肝、肾毒性。有挥发性。避免吸入蒸汽。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(59)氯化铵:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(60)氯化钙:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(61)氯化钾:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(62)氯化锂:刺激眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(63)氯化镁:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(64)氯化锰:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(65)氯化铁:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(66)氯化锌:有腐蚀性,对胎儿有潜在危险。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(67)3-(N-吗啉)-丙磺酸:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。刺激眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(68)没食子酸丙酯(NPG0:见苯甲酸。
(69)柠檬酸钠:见柠檬酸。
(70)柠檬酸:有刺激性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
(71)硼酸:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
(72)羟胺:有腐蚀性和毒性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(73)氢氧化铵:为氨的水溶液。具有腐蚀性。操作时要小心。氨气可从氨水中挥发出来,具有腐蚀性、毒性和爆炸性。戴好手套。必须在通风橱内操作。
(74)氢氧化钾:剧毒性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。溶液为强碱性,当心使用。戴好手套。
(75)氢氧化钠:溶液有剧毒,强碱性,当心使用。戴好手套。其他所有高浓度碱溶液都应以类似方式操作。
(76)秋水仙碱:有剧毒,可致命,可导致癌症和可遗传的基因损害。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。不要吸入粉尘。
(77)β-巯基乙醇:吸入或皮肤吸收可致命,摄入有害。。高浓度溶液对黏膜、上呼吸道、皮肤和眼睛有极大损害。β-巯基乙醇有难闻气味。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(78)去氧胆酸钠:刺激黏膜和呼吸道。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。使用粉末时,戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。
(79)溶剂;谨慎操作。
(80)溶菌酶:对黏膜有腐蚀性。戴好手套和护目镜。
(81)三氯乙酸:有很强的腐蚀性。戴好手套和护目镜。
(82)三乙胺:有剧毒,易燃。对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有强腐蚀性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。始终在通风橱内操作。远离热源、火花和明火。
(83)三乙醇胺:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。始终在通风橱内操作。
(84)十二烷基磺酸钠(SDS):有毒性和刺激性,有严重损伤眼睛的危险。。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。不要吸入粉尘。
(85)双丙烯酰胺:是一种潜在的神经毒素,可通过皮肤吸收,避免吸入,在称量时,戴好手套和护目镜。
(86)四环素:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(87)N,N,N’,N’-四甲基乙二胺:对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有极大损伤。吸入可致命,长时间接触可产生严重刺激或烧伤。戴好手套和护目镜。穿防护服,必须在通风橱内操作。使用完毕要彻底清洗。易燃性,其挥发气体可到达一定距离,形成引燃源,瞬间发生火灾。远离热源、火花和明火。
(88)四水合乙酸镁:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
(89)四唑氮蓝;有危险性,小心操作。
(90)碳酸钠:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
(91)同位素125I;在甲状腺,为一潜在的健康杀手。无论何种形式的同位素都用铅板遮挡。操作同位素时,要戴一到两副手套,着取决于同位素的用量和所进行的操作难度。
(92)胃酶抑素:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(93)胃酶抑素:吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(94)硝酸:具有挥发性,操作时要小心。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。远离热源、火花和明火。
(95)硝酸银:强氧化剂,小心操作。皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。与其他物质接触会发生爆炸。
(96)溴酚蓝:皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(97)5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷:对眼睛和皮肤有毒性。皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
(98)5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸酯:有毒性。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜。
(99)5-溴-2’-脱氧脲苷;为致畸胎剂。吸入,摄入,皮肤吸收可造成损伤。有刺激性。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。
(100)溴乙啡啶:为一种强致突变剂,有毒性。避免吸入粉尘。操作含此染料的溶液时,戴上手套。
胶束开始形成时的浓度被称作临界胶束浓度(CMC)。CMC是单体的最大浓度,并且可以因此对形成胶束的自由能进行量度。CMC越低,胶束越稳定,并且分子并入胶束或脱离胶束的速度越慢。去垢剂疏水区域的结构会影响胶束的结构。离子型去垢剂疏水烃链的长度增加会导致胶束增大和CMC降低,同时构建胶束需要的分子也减少。
胶束中单体的平均数量被称作聚集数。CMC和聚集数的值很大程度上取决于以下因素:温度、pH、离子强度以及去垢剂的均一性和纯度。用来测定CMC和聚集数的分析方法的不同可能会造成报道数值的轻微差异。聚集数的值也会因浓度而变化,当浓度高于CMC时,单位胶束中的去垢剂分子数目会增加。
易于去除或交换是选择去垢剂时需考虑的一个重要因素。一些常见的去除去垢剂的方法包括:
透析
凝胶过滤色谱
疏水吸附色谱
蛋白沉淀
去垢剂相关的CMC值是疏水结合强度的重要参考。去垢剂的CMC值越高其结合越弱,相应的也越容易通过透析或置换方法去除。而CMC值较低的去垢剂则只需要较少的去垢剂就可以形成胶束并溶解蛋白质或脂质。
另一个用于评估后续去除去垢剂难易度的有用参数是胶束分子量,表示相对胶束大小。越小的胶束越容易去除,在基于蛋白质分子尺寸的蛋白质-去垢剂复合物分离时效果也更理想。胶束分子量可以用单体分子量乘上聚集数来计算。
浊点是指当浓度接近或高于CMC时,去垢剂溶液分离成两相的温度。胶束聚集,形成高去垢剂浓度的混浊相,而溶液达到平衡点时会耗尽去垢剂。得到的两相溶液可以被分离,提取出的蛋白质位于富含去垢剂的相中。因为高浊点温度会造成溶解蛋白质的变性,因此在蛋白质存在时推荐使用低浊点的去垢剂,例如TRITON® X-114 (浊点~23 °C)。去垢剂浓度和温度的变化以及添加盐或聚合物(例如葡聚糖和聚乙二醇)等因素都会影响浊点。需要注意的是富含去垢剂的相也取决于去垢剂的种类和盐浓度;在某些条件下,相可以是澄清的而不是混浊的,可以作为溶液的上相或下相。对于非离子型去垢剂,这一特点已被用于膜蛋白的相分离和提纯。2
去垢剂的种类和选择
选择去垢剂时,首先需要考虑的通常是亲水基团的组成:
根据分子结构,去垢剂可大体分为:3
离子型
两性离子型
非离子型
离子型去垢剂
离子型去污剂含有阴离子或阳离子头部基团,并具有净电荷。它们的疏水尾巴要么是直链烃链(例如十二烷基硫酸钠(SDS)和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)),要么是刚性甾体基团(例如胆汁酸盐)4。离子去污剂胶束的大小取决于 侧链的疏水引力和离子基团的斥力。因此,通过增加中和头部基团上电荷的抗衡离子浓度,可形成较大的胶束尺寸。胶束的大小也随着烷基链长度的增加而增加。离子去污剂在膜蛋白增溶方面非常有效,但难免或多或少造成变性5。
胆汁酸盐是阴离子去垢剂,具有由刚性甾族基团(例如胆酸和脱氧胆酸的钠盐)组成的主链。由于为平面结构,这些分子具有极性和非极性的表面;因此,它们的CMC较高且其胶束较小,易于通过透析去除。6胆汁酸盐是相对温和的去垢剂,与同头部基团的线性链去垢剂相比,其失活性通常较小。7未偶联的胆汁酸盐单体pKa值约为5-6,在低pH值下溶解度有限。但是,在任何给定的pH值下,胆汁酸偶联都会降低pKa,产生更大比例的离子化分子。由于离子盐形式比质子化酸形式更易溶于水,因此在低pH值下,偶联可增加溶解度8。
非离子型去垢剂
非离子型洗涤剂含有不带电荷的亲水性头基,由聚氧乙烯部分(如BRIJ®和TRITON™去垢剂)或糖苷基团(如辛基葡糖苷和十二烷基麦芽糖苷)组成。由于非离子型去污剂会破坏脂质-脂质和脂质-蛋白质的相互作用,但不会破坏蛋白质-蛋白质的相互作用,因此被认为是非变性。9 因此,它们广泛用于分离生物活性形式的膜蛋白。与离子型去垢剂不同,盐对非离子型洗涤剂的胶束尺寸影响极小。5
具有聚氧乙烯头基团的去垢剂可以包含烷基聚乙烯醚(CnH2n+1(OCH2CH2)xOH),或烷基链与醚基之间包含苯环。TRITON™X-100去垢剂属于后一类。需要注意的是,含有芳香环的去垢剂在紫外线区域吸收。它们可能会干扰分光光度法280 nm处的蛋白质监测。这些去垢剂可提供氢化形式,其中芳香环被还原以消除紫外线吸收。但是,在这种还原制剂中可能存在少量未反应的材料。在某些应用中,具有脂族疏水部分的市售聚氧乙烯去垢剂可以代替某些芳族聚氧乙烯。例如,在紫外线不可见光波长应用中,通常可采用TERGITOL™ 15-S-9、TERGITOL™ TMN-10、聚氧乙烯10月桂基醚和聚氧乙烯10十三烷基醚代替TRITON™X-100。这些去垢剂具有脂族疏水部分,因此不会明显吸收紫外线区间波长。
尽管聚氧乙烯比合成的非离子型去垢剂(如烷基糖苷)具有明显的成本优势,但由于两大原因,后者在许多应用中仍是首选去垢剂。首先,它们的组成和结构均一。其次,可利用它们轻松合成几种包含不同烃链和极性糖基组合的烷基糖苷变体。可利用附接到葡萄糖、麦芽糖或蔗糖头基上,带有各种烷基链的烷基糖苷的理化性质细微差异,选择性溶解膜蛋白。10
两性去垢剂
两性去垢剂同时具有离子型和非离子型去垢剂的特点。和非离子型去垢剂一样,两性去垢剂不具有净电荷,无导电性和电泳迁移性,且不与离子交换树脂结合。但和离子型去垢剂一样,它们可以有效地破坏蛋白质间的相互作用。与线性链两性离子去垢剂(例如十二烷基二甲基二胺氧化物)相比,固醇类两性去垢剂(例如CHAPS)的变性概率较小。7
非去垢剂磺基甜菜碱
非去垢剂磺基甜菜碱(NDSB)是两性离子化合物。和去垢剂磺基甜菜碱(SB)– 例如线性SB(例如SB 3-16、SB 3-10、3-12 后文 3-14)、11 CHAPS12和氨基磺基甜菜碱(例如N-烷基氨基丙基-N,N二甲基氨基烷基磺酸盐)13一样 – NDSB带有磺基甜菜碱亲水性头基。但与SBs相比,NDSB中的疏水基太短,即使浓度高达1 M时也无法形成胶束。因此,NDSB易于通过透析去除,且易于在色谱基质和聚丙烯酰胺凝胶中扩散,适用于电泳应用。
NDSB首先用于天然等电聚焦实验中,以在不增加电导率的情况下筛选静电相互作用。14从那时起,它们被广泛应用,包括蛋白质的增溶和结晶14,15,以及化学和生物变性蛋白质的复性和重折叠。16凭借短疏水基团和电荷屏蔽作用,NDSB可防止聚集并提高膜蛋白产量。此外,NDSB不会干扰涉及硝基苯基的显色底物的酶法测定,且不会抑制酶(例如β-半乳糖苷酶和碱性磷酸酶)的活性。14值得注意的是,NDSB-195、NDSB-211和NDSB- 221不吸收280 nm波长的光线;因此,它们与蛋白质纯化程序兼容,可在蛋白质纯化过程中通过测量该波长吸光度监测蛋白质浓度。17
去垢剂选择指南
如果裂解液或匀浆100,000 x g离心1小时后上清液中存在膜蛋白,则认为该膜蛋白已溶解。在大多数情况下,去垢剂溶解后,会在上清液中保留蛋白质的生物学活性。因此,适当的去垢剂会在上清液中产生大量生物活性蛋白。鉴于当今市面上的去垢剂种类众多,选择合适的去垢剂可能会很困难。下面概述了部分有助于选择合适的去垢剂的要点。
查阅文献,尝试使用先前已用于分离和表征类似生化或酶学性质的蛋白质的去垢剂。
考虑去垢剂在工作温度下的溶解度。例如,丙磺酸二甲基棕榈酰胺(SB3-16)在4°C下不溶于水,而TRITON™X-114去垢剂在室温下会发生相分离。
考虑去垢剂去除方法。如果要进行透析,显然优选高CMC去垢剂。如果使用离子交换色谱,则非离子或两性离子去垢剂更佳。
保留活性生物或酶活性可能需要试验几种去垢剂。除去垢剂种类外,去垢剂用量也会影响蛋白质活性。对于某些蛋白质,仅可在很窄的去垢剂浓度范围内保留其生物学活性。低于该范围,蛋白质不溶解;高于特定浓度,蛋白质灭活。
考虑下游应用。由于TRITON™X-100去垢剂含有260-280 nm吸收波长的芳环,因此如果操作规范要求紫外线监测蛋白质浓度,则应避免使用这种去垢剂。同样,如果要等电聚焦分离蛋白质,则应避免使用离子型去垢剂。进行蛋白质凝胶过滤时,应考虑使用聚集数较小的去垢剂。
考虑去垢剂纯度。应使用纯度尽可能高的去垢剂,因为目前确知某些去垢剂(例如TRITON™X-100)含有过氧化物污染物。
对于存在DNase、RNase和蛋白酶等污染问题的任何研究,可使用多种分子生物学级去垢剂。
与有毒去垢剂相比,优先选择无毒去垢剂。例如,洋地黄毒苷(洋地黄甙)需要特别小心处理。
由于未知的原因,某些去垢剂通常可以更好地用于特定分离程序。例如,目前已发现正十二烷基-β-D-麦芽糖苷是用于分离细胞色素C氧化酶的首选去垢剂。因此,可能需要通过一些“试错”方法,确定分离生物活性膜蛋白的最佳条件。
有时很难找到理想的去垢剂溶解和分析特定蛋白质。在这种情况下,通常可以用一种去垢剂溶解蛋白质,然后再用对实验影响最小的另一种去垢剂代替。
在某些情况下,已观察到隔离缓冲液中含有磺基甜菜碱(NDSB)去垢剂可大幅提高可溶性膜蛋白产量。