植物dna提取的原理和方法?其中乙醇和氯仿一异成醇各起什么作用
植物DNA提取方法是采用CTAB法。
CTAB,是一种阳离子去污剂,能与核酸形成复合物,此复合物在高盐(>0.7mol/L) 浓度下可溶,并稳定存在,但在低盐浓度(0.1~0.5mol/L NaCl)下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀,而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。经离心弃上清后,CTAB-核酸复合物再用70%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。
无水乙醇:沉淀DNA。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。 DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。
氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。
异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
氯仿: RNA脱离DNA及蛋白,从混合液中层析到水相.水相中的RNA可用异丙醇沉淀浓缩.
接着用异丙醇进行二次沉淀,随后用乙醇洗涤沉淀,可去除所有残留的蛋白质和无机盐. RNA样品中如果含有无机盐, 有可能对后续实验操作中的一些酶促反应产生抑制作用。
若说萃取,工业生产中,辛醇和氯仿效果还行。但环保和安全让人如履薄冰。正在努力寻求其他办法替代萃取。
化工生产中结晶并离心后的常温母液(水系)含少量,此时氯仿可有效萃取回收。氯仿的好处是易挥发,易再利用,溶解度高,有气味(便于识别泄露)。
可以提前做个水,乙醇,氯仿等溶剂的溶解度曲线,不难,利于后期实验方案的制定。
酒精特点:比水的密度小,可以溶解有机物以及无机物。适合提取一些溶于酒精的有机物,通过将有机物溶于酒精中,然后对混合溶液进行蒸馏,把酒精蒸发掉,剩下的就是想获取的有机物了。
乙醇在常温常压下是一种易燃、易挥发的无色透明液体,低毒性,纯液体不可直接饮用;具有特殊香味,并略带刺激;微甘,并伴有刺激的辛辣滋味。易燃,其蒸气能与空气形成爆炸性混合物,能与水以任意比互溶。能与氯仿、乙醚、甲醇、丙酮和其他多数有机溶剂混溶。
扩展资料:
乙醇也可被高锰酸钾氧化成乙酸,同时高锰酸钾由紫红色变为无色。乙醇也可以与酸性重铬酸钾溶液反应,当乙醇蒸汽进入含有酸性重铬酸钾溶液的硅胶中时,可见硅胶由橙红色变为灰绿色,此反应可用于检验司机是否饮酒驾车(酒驾)。
乙醇可以与金属钠反应产生氢气,但不如水与金属钠反应剧烈。活泼金属(钾、钙、钠等)可以将乙醇羟基里的氢取代出来,生成物遇水则迅速水解生成醇和碱,其水溶液为强碱性。
实验中在提取液中加入氯仿乙醇混合溶剂因为氯仿的作用是战胜酚的缺陷,加快有机相与液相的分层,最后用氯仿抽提出DNA。
在提取分离脂类化合物的过程中,要依据脂类化合物的种类、理化性质、在细胞中存在的状态来选择提取的溶剂和操作条件,所以除了氯仿和水,也可以选择别的溶剂,看具体情况来选择。
得到浸膏用水悬浮(水不能完全溶解,所以用悬浮这个词)
4种不同极性的溶剂按极性大小排列,先用极性最小的萃取,然后用次小,中等,和大极性的萃取
通常使用的萃取溶剂是石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇(极性从小到大)
萃取时试剂按1:1的体积添加,每种溶剂萃取3次
注意的是,石油醚萃取时,石油醚层在水层的上面,将石油醚层分离出来后
在水层中加氯仿萃取,氯仿层在水层下面(氯仿比重重)
醋酸乙酯和正丁醇比重都小于水,所以萃取时在水层上方
萃取时会出现乳化现象,应长时间放置使分层,或加热
氯仿的用途是:有机合成原料,主要用来生产氟里昂(F-21、F-22、F-23)、染料和药物,在医学上,常用作麻醉剂。
可用作抗生素、香料、油脂、树脂、橡胶的溶剂和萃取剂。与四氯化碳混合可制成不冻的防火液体。
还用于烟雾剂的发射药、谷物的熏蒸剂和校准温度的标准液。工业产品通常加有少量乙醇,使生成的光气与乙醇作用生成无毒的碳酸二乙酯。使用工业品前可加入少量浓硫酸振摇后水洗,经氯化钙或碳酸钾干燥,即可得不含乙醇的氯仿。
扩展资料:
氯仿对光敏感,遇光照会与空气中的氧作用,逐渐分解而生成剧毒的光气(碳酰氯)和氯化氢。可加入0.6%~1%的乙醇作稳定剂。
氯仿能与乙醇、苯、乙醚、石油醚、四氯化碳、二硫化碳和油类等混溶、 25℃时1mL溶于200mL水。相对密度1.4840。凝固点-63.5℃。沸点61~62℃。折光率1.4476。低毒,半数致死量(大鼠,经口)1194mg/kg。
操作人员必须经过专门培训,严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴直接式防毒面具(半面罩),戴化学安全防护眼镜,穿防毒物渗透工作服,戴防化学品手套。
防止蒸气泄漏到工作场所空气中。避免与碱类、铝接触。搬运时要轻装轻卸,防止包装及容器损坏。配备泄漏应急处理设备。倒空的容器可能残留有害物。
参考资料来源:百度百科——三氯甲烷