土壤脲酶的测定方法有哪些啊,苯酚钠比色法的具体步骤谁知道啊????
脲酶urease（水解酶）：
脲酶试验原理：
存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶、能酶促有机物质分子中酶键的水解。脲酶的作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和碳酸。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。
土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法是测定生成的氨量。
试剂：1）甲苯
2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。
3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184克柠檬酸和147.5克氢氧化钾溶于蒸馏水。将两溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释至1000毫升。
4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5克苯酚溶于少量乙醇，加2毫升甲醇和18.5毫升丙酮，用乙醇稀释至100毫升（A），存于冰箱中；27克NaOH溶于100毫升水（B）。将AB溶液保存在冰箱中。使用前将2溶液各20毫升混合，用蒸馏水稀释至100毫升。
5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。
6）氮的标准溶液：a 精确称取0.4717克硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg氮的标准液
标准曲线绘制：吸取配置好的氮溶液10ml，定容至100ml，即稀释了10倍，吸取1，3，5，7，9，11，13ml移至50ml容量瓶，加水至20ml，再加入4ml苯酚钠，仔细混合，加入3ml次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟,用水稀释至刻度。将着色液在紫外分光光度计上于578nm处进行比色测定，以标准溶液浓度为横坐标，以光密度值为纵坐标绘制曲线图。
取新鲜土壤7份，每份30g，装于棕色广口瓶中，先将1，3－二氯丙烯溶于丙酮（定量），6份分别加入不同浓度均为1.5ml的1，3－二氯丙烯，使之在土壤中的浓度分别为1、10、50、100、200、500µg/g，另1份相应加入1.5ml的丙酮作为对照，然后调节土壤的含水量至最大田间持水量的60%（记录此时重量，以便补充水分）。放置于25℃恒温培养箱，培养后第0d、1d，5d，10d（前10d密封，后来测定的敞口）、20d，30d，40d，50d分别取土样检测脲酶的活性。取样前，反复旋转广口瓶，混匀土样，一个处理随机取3个重复。
1) 称取5g过1mm筛的风干土样于100ml容量瓶中。
2) 向容量瓶中加入1ml甲苯（以能全部使土样湿润为度）并放置15分钟
3) 之后加入10ml 10％尿素溶液和20ml柠檬酸缓冲液（PH6.7），并 仔细混合
4) 将容量瓶放入37摄氏度恒温箱中，培养24h
5) 培养结束后，用热至38摄氏度水稀释至刻度，仔细摇荡，并将悬液用致密滤纸过滤于三角瓶中。
6) 显色：吸取3ml滤液于50ml容量瓶中，加入10ml蒸馏水，充分震荡，然后加入4ml苯酚钠，仔细混合，再加入3ml次氯酸钠，充分摇荡，放置20分钟，用水稀释至刻度，溶液呈现（青定）酚的蓝色。
7) 1h内在（（青定）酚的蓝色在1h内保持稳定）在分光光度计上用1cm液槽，于578nm处将显色液进行比色测定。
8) 无土对照：不加土样，其他操作与样品实验相同。以检验试剂纯度，整个实验设置一个对照
9)无基质对照：以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。每个土样都设此对照。
结果计算：土壤脲酶活性以24小时后100g土壤中NH3－N的毫克数表示。
M＝（X样品－X无土－X无基质）*100*10
式中：M－土壤脲酶活性值
X样品――样品实验的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N毫克数
X无土――无土对照实验中的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N毫克数
X无基质――无基质对照实验中的光密度值在标准曲线上对应的NH3－N毫克数
100 ――样品定容的体积与测定时吸取量的比值
10 ――酶活性单位的土重与样品土重之比值
注意事项：当脲酶活性为3-80微克NH3-N时，本法能获得可靠结果。当脲酶活性小于3微克NH3-N，培养时间需增至24小时（已经24h了）（计算时应考虑这一点）
计算：脲酶活性以24h后1g土壤中NH3-N的mg数表示。
NH3-N（mg）＝a*2
A：从标准曲线查得NH3-N毫克数
2 ：换算成1k土的系数。
验证苯酚的酸性1.
在试管中取2mL苯酚溶液，滴加石蕊试剂，观察现象。
2.
在三支试管中分别取少量苯酚固体，并分别向其中加入2—3毫升氢氧化钠溶液、2—3mL碳酸钠溶液、2—3mL碳酸氢钠溶液，充分振荡，观察并比较现象（注意加盐溶液的试管中是否有气泡。）
3.
在试管中取2mL氢氧化钠溶液，滴加2—3滴酚酞试液，再加入少量苯酚固体，观察颜色变化。
交流现象1.
苯酚不能使石蕊变红。
2.
苯酚固体易溶于氢氧化钠溶液和碳酸钠溶液，无气泡产生；难溶于碳酸氢钠溶液。
3.
苯酚使红色溶液（滴有酚酞试液的氢氧化钠溶液）逐渐变浅。
实验结论苯酚具有弱酸性，酸性介于碳酸和碳酸氢根离子之间。由于苯酚的酸性太弱，以至于不能使石蕊试剂变红。（石蕊试液的变色范围是：pH值5～8）
演示实验：在刚才制取的苯酚溶液中边振荡边逐滴加入氢氧化钠溶液，至恰好澄清，生成物为苯酚钠。再持续通入二氧化碳气体，溶液又变浑浊（二氧化碳与水生成碳酸，碳酸与苯酚钠反应生成苯酚与碳酸氢钠）。综上所述，根据强酸制弱酸的原理可知酸性：
H2CO3
>
>
NaHCO3
。亦可知碳酸的酸性比苯酚的酸性强。
苯酚的检验：滴入溴水反应生成白色沉淀（三溴苯酚）
注意：必须要加过量溴水并且是浓溴水.因为少量溴水生成物溶于苯酚，而如果不是浓溴水则不生成沉淀。
苯的检验：高效液相色谱法
分子式 C6H5ONa
分子量 116.10
无色易潮解的针状结晶蒸汽压熔 点溶解性：溶于水、乙醇密 度稳定性：稳定危险标记 20(腐蚀品)主要用途：用作防腐剂、有机合成中间体，在防毒面具中用以吸收光气 【苯酚、苯酚钠与碳酸、碳酸钠的反应】
苯酚的酸性强于碳酸氢根（苯酚的Ka大于碳酸的Ka2），所以苯酚可以溶解于碳酸钠溶液中，生成碳酸氢钠和苯酚钠，而碳酸氢钠溶解度在同等温度下小于苯酚钠，因为可用重结晶法将苯酚钠与碳酸氢钠分离。
而苯酚的酸性又小于碳酸（苯酚的Ka小于碳酸的Ka1），所以往苯酚钠溶液中吹入二氧化碳，又可以得到碳酸氢钠和苯酚，苯酚在65度以下溶解度极小，所以溶液变浑浊。
苯酚和钠可以反应，苯酚俗称石炭酸,具有酸的性质，二者可以反应。
化学反应方程式如下：
2苯酚+2Na--2苯酚钠+H2↑
离子方程式如下：
2C6H5OH+2Na→2C6H5ONa+H2↑
扩展资料；
苯酚（Phenol，C6H5OH）是一种具有特殊气味的无色针状晶体，有毒，是生产某些树脂、杀菌剂、防腐剂以及药物（如阿司匹林）的重要原料。也可用于消毒外科器械和排泄物的处理， 皮肤杀菌、止痒及中耳炎。
熔点43℃，常温下微溶于水，易溶于有机溶剂；当温度高于65℃时，能跟水以任意比例互溶。苯酚有腐蚀性，接触后会使局部蛋白质变性，其溶液沾到皮肤上可用酒精洗涤。 小部分苯酚暴露在空气中被氧气氧化为醌而呈粉红色。遇三价铁离子变紫，通常用此方法来检验苯酚。
可吸收空气中水分并液化。有特殊臭味，极稀的溶液有甜味。腐蚀性极强。化学反应能力强。与醛、酮反应生成酚醛树脂、双酚A，与醋酐；水杨酸反应生成醋酸苯酯、水杨酸酯。还可进行卤代、加氢、氧化、烷基化、羧基化、酯化、醚化等反应。
苯酚在通常温度下是固体，与钠不能顺利发生反应，如果采用加热熔化苯酚，再加入金属钠的方法进行实验，苯酚易被还原，在加热时苯酚颜色发生变化而影响实验效果。有人在教学中采取下面的方法实验，操作简单，取得了满意的实验效果。
在一支试管中加入2-3毫升无水乙醚，取黄豆粒大小的一块金属钠，用滤纸吸干表面的煤油，放入乙醚中，可以看到钠不与乙醚发生反应。
然后再向试管中加入少量苯酚，振荡，这时可观察到钠在试管中迅速反应，产生大量气体。这一实验的原理是苯酚溶解在乙醚中，使苯酚与钠的反应得以顺利进行。
钠为银白色立方体结构金属，质软而轻可用小刀切割，密度比水小，为0.97g/cm3，熔点97.81℃，沸点882.9℃。新切面有银白色光泽，在空气中氧化转变为暗灰色，具有抗腐蚀性。
钠是热和电的良导体，具有较好的导磁性，钾钠合金（液态）是核反应堆导热剂。钠单质还具有良好的延展性，硬度也低，能够溶于汞和液态氨，溶于液氨形成蓝色溶液。在-20℃时变硬。
已发现的钠的同位素共有22种，包括钠18至钠37，其中只有钠23是稳定的，其他同位素都带有放射性。
参考资料：百度百科——苯酚 百度百科——钠
一般采用柳树，杨树，冬青树皮或猕猴桃果实等来bai提，当然杨柳科的树叶中水杨酸含量也是很高的。
测定含量：
主要仪器：Beckman高效液相色谱仪，岛津荧光检测器，Heidolp旋转蒸发仪。SA标准品，上海五联化工厂生产；甲醇为色谱纯，天津市四友生物医学技术有限公司生产；其余所用试剂均为分析纯；水(二次蒸馏水，自制)。
HPLC检测条件：Cl8柱，7．3mm~20cm；流动相： 甲醇：乙酸缓冲液(pH3．2)=50：50；岛津荧光检测器(激发波长为310nm，发射波长为415nm)；流速为1．0mIMmin；进样量为201xL。
提取：
水杨酸可由苯酚与氢氧化钠反应生成苯酚钠，蒸馏脱水后，通二氧化碳进行羧基化反应，制得水杨酸钠盐，再用硫酸酸化，而得粗品。粗品经升华精制得成品。
其制备方法是由苯酚钠盐与二氧化碳羧基化后再经酸化而得。用苯酚及液体烧碱制成苯酚钠盐溶液，真空干燥，然后于100℃下慢慢通入干燥的二氧化碳，当压力达到0.7～0.8MPa时，停止通二氧化碳，升温至140～180℃。
扩展资料：
水杨酸在某些弱酸性电解液中作为添加剂，也可用作电镀或化学镀的络合剂。化妆品防腐剂。主要用于花露水、痱子水、奎宁头水等水类化妆品。除防腐杀菌作用外，还有祛除汗臭、止痒消肿、止痛消炎等功能。
主要作为医药工业的原料，用于制备阿司匹林、水杨酸钠、水杨酰胺、止痛灵、水杨酸苯酯、血防-67等药物。染料工业用于制备媒染纯黄、直接棕3GN、酸性铬黄等。还用作橡胶硫化延缓剂和消毒防腐剂等。
用作环氧树脂固化的促进剂，也可作为防腐剂。可用来制备水杨酸甲酯、水杨酸乙酯等合成香料。染料工业用作制备直接染料及酸性染料等的原料。还可用作橡胶防焦剂、消毒剂等。
参考资料来源：百度百科-水杨酸
专家建议：复硝酚钠是个混合体，由5-硝基愈创酚钠、邻硝基苯酚钠、对硝基苯钠按照3：6：9构成。一般要用液相色谱来检测鉴定，若看外观，只能是定性的区别，建议从以下三个方面来判断。第一，颜色仔细辨认，它是由三种晶体对硝基酚钠构成的，即由枣红色片状晶体5-硝基愈创酚钠、深红色针状晶体邻硝基苯酚钠、黄色粉末晶体对硝基苯钠三种晶体构成。若无三种颜色明显、晶体均不相同的成份构成，即不是真正意义的复硝酚钠。第二，从气味可以辨别，复硝酚钠有木质香味，因为其含有5-硝基愈创酚钠，质劣的复硝酚钠气味较刺鼻。第三，从溶解性来看，在常温下，复硝酚钠在水中溶解量大概为8%-10%左右，太大或太小都不对。另外，在溶解的过程中，有部分黄色晶体溶解较慢，但搅拌后全部溶完，呈透明澄清液体。其溶液颜色随溶液的酸碱性改变而发生明显改变。同时随深度稀释颜色会再次发生较大改变。
