苯酚-硫酸法测定多糖的原理

淀粉、纤维素的构成单位是葡萄糖，但植物多糖的话，种类就很多了，构成的单元也很多，多种单糖---果糖、半乳糖、木糖、甘露糖等等都可以作为构成单位。比如银耳多糖、香菇多糖，成分极为复杂。

苯酚硫酸法师利用糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物。在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量。

此时，对于杂聚多糖，只用葡萄糖溶液做标准曲线，是不准的。有时用多种单糖标准品作标准曲线，但不同单糖标准品在相同浓度下其吸收值相差较大（葡萄糖显色最大），分别制作标准曲线对杂多糖测定的结果也就不同。因此，苯酚硫酸法对于成分复杂的多糖来说，只能是一个参考。

对杂多糖往往不用单一的苯酚硫酸法。比如，采用气相色谱法对杂多糖的组成进行分析，再配合苯酚硫酸法可以得到更可靠的结果，比单用苯酚 硫酸法更可靠、准确。

DNS 法为在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。

苯酚硫酸法测多糖。

是将多糖在浓硫酸水合产生的高温下迅速水解，产生单糖。

单糖中再加入苯酚反应（在强酸条件下）生成橙色衍生物。

在波长490nm左右处和一定浓度范围内，该衍生物的吸收值与单糖浓度呈线性关系，从而可用比色法测定其含量。

若要一起加入，先配成溶液的话。要先将苯酚溶于（温）水，然后将浓硫酸绶绶倒入。切不可将溶液注入水中。

多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。

简介：

苯酚硫酸法测定总糖所用试剂：

1. 浓硫酸:分析纯，95.5%

2. 80%苯酚:80克苯酚(分析纯重蒸馏试剂)加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。

3. 6%苯酚:临用前以80%苯酚配制。(每次测定均需现配)

4. 标准葡聚糖(Dextran,瑞典Pharmacia),或分析纯葡萄糖。

5. 15%三氯乙酸(15%TCA):15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。

6. 5%三氯乙酸(5%TCA):25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。

7. 6mol/L 氢氧化钠:120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。

8. 6mol/L 盐酸

操作步骤：

1.制作标准曲线:准确称取标准葡聚糖(或葡萄糖)20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。

2.样品含量测定:

①取样品1克(湿样)加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5%TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5%TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意:总的溶液不要超出10毫升。(既不要超出离心管的容量)。

②离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。(测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。)

③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。

④定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。

最好用标样否则你怎么确定测定结果与真实结果的偏差除非高效液相测一下样品纯度(你不是有标样吗)很麻烦，得摸条件

这个实验意义不大，一般每个实验室都有自己加量而且固定，一般硫酸是苯酚5倍，苯酚6%和样品1:1或1:2，不用水浴，硫酸溶解会释放大量的热，多糖测定使世界难题，如果确定是什么多糖可以用酶法，别的还是水提醇沉，溶解，苯酚硫酸

原理

糖硫酸作用先水解单糖,并迅速脱水糖醛衍物,与苯酚橙黄色化合物.再比色测定.

试剂

1． 浓硫酸：析纯,95.5%

2． 80%苯酚：80克苯酚（析纯重蒸馏试剂）加20克水使溶解,置冰箱避光期储存.

3． 6%苯酚：临用前80%苯酚配制.（每测定均需现配）

4． 标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或析纯葡萄糖.

5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使溶解,置冰箱期储存.

6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使溶解,置冰箱期储存.

7． 6mol/L 氢氧化钠：120克析纯氢氧化钠溶于500ml水.

8． 6mol/L 盐酸

①原料的预处理，制备高纯度纤维素；

②降解纤维素制备微晶纤维素；

③微晶纤维素的干燥。

下面凯茵工业添加剂主要介绍微晶纤维素制备过程中的制备方法和干燥方式。

微晶纤维素是由葡萄糖单元构成的一种粒径小、结晶度高的多糖化合物，分子中主要由结晶区构成，一般通过生物法或化学法去除纤维素原料的大部分无定型区来制备。目前制备微晶纤维素常用的方法主要是酸水解法和生物酶法。

酸水解法

酸水解纤维素是制备微晶纤维素的最常用方法，具有成本低、耗时短、得率高、制备方法成熟且能实现工业化生产等优点。其原理为在酸性条件下，纤维素结构中的β-1,4糖苷键发生裂解，无定型区逐渐被去除，纤维素分子被降解至极限聚合度（15到375）形成微晶纤维素。但由于酸自身的特殊性质，酸水解法制备微晶纤维素目前也存在设备被腐蚀、废液难处理、制备过程中耗水量大等缺点。

影响酸水解法制备微晶纤维素的因素主要有：酸的种类、酸解时间、纤维素与酸的固液比、酸的浓度以及制备过程中用到的辅助手段。这些因素会影响微晶纤维素的得率、粒径、热稳定性、聚合度、纯度和结晶度等性质。

酸水解法制备微晶纤维素使用的酸可以是液态酸如盐酸、硫酸和磷酸等，或者是固体酸磷钨酸（HPW）等，其中盐酸和硫酸是酸水解法中最常使用的酸。与硫酸相比，盐酸制备的杂木微晶纤维素的聚合度和热稳定性更高。利用硫酸、盐酸、硝酸和硫酸/盐酸混合酸分别酸解制备芦苇MCC，结果表明酸的种类不会影响MCC的形态，制备的MCC均为短棒状，但与盐酸（或硝酸）相比，硫酸制备的微晶纤维素的结晶度较低。

利用不同浓度硫酸酸解棉布制备微晶纤维素的结果表明，与低浓硫酸（35%）相比，高浓硫酸（64%）制备的微晶纤维素具有更细的粒度和更低的模量。采用盐酸酸解制备微晶纤维素时，影响微晶纤维素得率的各因素影响程度由大到小的顺序为：酸解温度>盐酸浓度>酸解时间，在最优条件下微晶纤维素的得率可达54.34%。

生物酶法

生物酶法是制备微晶纤维素的一种新型方法，使用的生物酶主要是纤维素酶，其原理为纤维素酶中的内切酶在一定条件下可以使纤维素分子中无定型区内的分子链发生断裂，形成主要由结晶区构成的纤维素分子，进而得到微晶纤维素。与酸水解法相比，生物酶法制备微晶纤维素具有化学药品用量少、制备过程绿色环保等优势，但由于纤维素酶的特殊性，存在制备成本较高、效率低和制备过程中工艺条件要求苛刻等缺陷。生物酶法制备微晶纤维素的过程中，主要影响因素为：酶用量、酶解温度、酶解时间和酶解时的pH值。研究发现生物酶法制得蔗渣微晶纤维素时，各因素对微晶纤维素得率的影响程度由大到小的顺序为：酶用量>酶解时的pH值>酶解温度。

干燥方式

在微晶纤维素的制备过程中，干燥方法主要有喷雾干燥法、鼓风干燥法、冷冻干燥法和真空烘箱干燥法等，可通过控制干燥过程改变微晶纤维素的粒径分布、水分含量、黏合能力，使微晶纤维素的部分性质达到商业级标准。

在实际生产中，不同的干燥方式所制备的微晶纤维素性质一般不同。张美云等人研究了冷冻、真空和喷雾这几种干燥方法对微晶纤维素性质的影响，结果表明，喷雾干燥法制备的微晶纤维素具有结晶度高、纤维更加坚挺和粒径小等优点，是制备微晶纤维素的最佳干燥方式。类似的研究发现，与红外和鼓风干燥相比，喷雾干燥具有干燥速度快且不影响微晶纤维素的形态、结晶度和粒径等优点

一般单糖，蛋白质，色素等都会有影响，所以测定之前要把这些干扰都除去。

在不同文献里发现不同的苯酚溶液配置方法，有的直接配制，有的要添加Al片、NaHCO3或氢氧化钠后蒸馏。你是用来测多糖总量的吧，再加上如果用分光光度法仪器的误差,那我想你的苯酚是分析纯的话应该可以直接配制,且注意温度控制（苯酚室温下为固态）。如果精度要求高还是用色谱方面的相关技术，而且苯酚要重蒸馏。怎么配取决于你对实验结果的要求（如精度要求，多糖成分是常量还是微量甚至痕量）。

这是我参照文献和结合自己实验工作做出的回答，本人才疏学浅，能力只能至此。