柱色谱实验中甲基橙和亚甲基蓝哪个先洗脱下来

你应该用GB/T12496.10-1999木质活性炭试验方法亚甲基蓝吸附值的测定。

1 范围

本标准规定了木质活性炭亚甲基蓝吸附值的试验方法。

本标准适用于木质活性炭。

2 引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

GB /T 6 682-1992 分析实验室用水规格和试验方法

GB /T 9 721-1988 化学试剂分子吸收分光光度法通则(紫外和可见光部分)

3 方法提要

试样与一定量(以毫升为单位)的亚甲基蓝溶液混合作用后过滤。滤液用分光光度计测定其吸光度，该吸光度低于规定浓度下的标准溶液的吸光度，则所需亚甲基蓝毫升数为活性炭试样的亚甲基蓝吸附值。

4 主要仪器

4.1 电动振荡器(往复式)，频率约275次/min.

4.2 分光光度计(GB/T 9721),

5 试剂和溶液

本标准所用水应符合GB/T6 682中三级水规格，所列试剂除规定外，均指分析纯试剂。

5.1 亚甲基蓝，指示剂。

5.2 磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O(GB/T 1263),

5.3 磷酸二氢钾(GB/T 1274),

5.4 缓冲溶液:称取3.6g磷酸二氢钾，14.3g磷酸氢二钠溶于1000mL水中，此缓冲溶液pH值约为7

5.5 亚甲基蓝试验液(1.5 g /L)

5.5.1 配制

由于亚甲基蓝在干燥过程中性质发生变化，应在未干燥情况下使用4h后，测定其水分。

亚甲基蓝未干燥品的取用量按式(1)计算:

m1=m/[P(1-E)]..............................( 1 )

式中:m1—亚甲基蓝吸附值，mg/g

E—亚甲基 蓝吸附值，mL/0.1 g ,

m—干燥品需要量，g

P— 亚甲基蓝的纯度，%。

按式(1)计算与1.5g亚甲基蓝干燥品相当的未干燥品的量，将称取的亚甲基蓝(称准到1mg)溶于温度为(60士10)℃的缓冲溶液中，待全部溶解后，冷却到室温过滤于1000 mL容量瓶内，分次用缓冲溶液洗涤滤渣，再用缓冲溶液稀释至标线。

6 操作步骤

称取经粉碎至71μm的干燥试样0.100g(称准至1mg),置于100mL具磨口塞的锥形烧瓶中，用滴定管加入适量的亚甲基蓝试验液，待试样全部湿润后，立即置于电动振荡机上振荡2 min，环境温度(25士5)℃，用直径12.5cm的中速定性过滤纸进行过滤。将滤液置于光径为1cm的比色皿中，用分光光度计在波长665nm下测定吸光度，与硫酸铜标准滤色液〔称取4.000g结晶硫酸铜(CuS04·5H20)溶于1000m1，水中〕的吸光度相对照，所耗用的亚甲基蓝试验液的毫升数即为试样的亚甲基蓝吸附值。

7 结果表述

7.1 亚甲基蓝吸附值可直接以mL/0.1g为单位表示。

7.2 亚甲基蓝吸附值也可以mg/g为单位表示。

A = B*15.............................( 2 )

式中:A—亚甲基蓝吸附值，mg/g

B—亚甲基蓝吸附值，mL/0.1g .

8 亚甲墓蓝试验液的标定

亚甲基蓝试验液配置中所用亚甲基蓝指示剂含量在98.5%以上，严格按照5.5.1配制，可直接应用于脱色试验操作，也可用下述方法之一进行标定。

8.1 碘量法

准确吸取亚甲基蓝试验液50.00mL于250mL棕色容量瓶中，加入36%乙酸25mL，摇匀，准确加入0.1mol/L碘标准溶液30mL，立即大力振摇片刻，将瓶置于黑暗处1h，其间每隔10min振摇1次，用水稀释至标线，摇匀，立即用滤纸过滤，弃去最初溶液20mL，其后滤液收集于干燥三角烧瓶中。准确吸取上述滤液100mL，用0.1mol/L硫代硫酸钠溶液滴定到浅黄色，以淀粉液作指示剂继续滴定到无色为终点。另取50mL缓冲液置于250mL容量瓶中，同时作一空白试验。亚甲基蓝溶液浓度按式(3)计算:

亚甲基蓝溶液浓度(g/L)=c(V1-V)*3.196 ......................(3)

式中:c一硫代硫酸钠的浓度，mol/L

V1—空白试验所消耗硫代硫酸钠溶液的体积，mL

V—试样所耗硫代硫酸钠溶液的体积，mL

319.6—亚甲基蓝(C16H18ClN3S)的摩尔质量，g/mol,

8.2 重铬酸钾法

准确吸取亚甲基蓝试验溶液50.00mL置于容量为400mL烧杯中，准确加入c(1/6 K2Cr207)=0.100mol/L重铬酸钾标准溶液25.00ml，放入水浴中加热至(75士2)℃，并在(75土2)℃不断搅拌.保持30min后流水冷却，经滤纸过滤，并用水洗涤，将滤液收在300 mL锥形瓶中，加(1十8)硫酸溶液25.00mL和碘化钾2g ,摇匀，然后用硫代硫酸钠溶液滴定，至溶液呈淡黄色时加人淀粉指示液数滴，滴

定至蓝色消失呈亮绿色为终点。按相同条件用50.00mL缓冲溶液做一空白试验。则亚甲基蓝溶液浓度p(g/L)按式(4)计算:

p(g/L)=c(V2-V1)*106.6/50............................( 4 )

式中:V2一空白滴定所消耗硫代硫酸钠标准溶液之体积，mL

V1--滴定亚甲基蓝所消耗硫代硫酸钠标准溶液之体积,mL

c--硫代硫酸钠溶液的浓度，mol/L

106.6--1/3亚甲基蓝(C16H18ClN3S)的摩尔质量，g/mol,

8.3 分光光度法

准确吸取10.00mL亚甲基蓝溶液于200mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。再从此稀释液中准确吸取20ml入1000mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀，立即用分光光度计(按GB/T9721，分子吸收分光光度法通则或仪器说明书进行校正)在波长665nm，光径为1cm下测定吸光度，其吸光度应与硫酸铜对照液的吸光度偏差在土0.01〔取硫酸铜(CuSO4·5H2O)2.40g，加水溶解后移入100mL容量瓶，稀释至标线〕。

亚甲基蓝可以结合核酸，使细胞核呈蓝色。用亚甲基蓝溶液染色后，被染为深蓝色的部分是细胞核。

亚甲蓝的水溶液在氧化性环境中蓝色，但遇锌、氨水等还原剂会被还原成无色状态。亚甲蓝高浓度时直接使血红蛋白氧化为高铁血红蛋白。低浓度时，在还原型辅酶I脱氢酶（NADPH）作用下，还原成为还原型亚甲蓝，能将高铁还原型蛋白还原为血红蛋白。

亚甲蓝，化学名称为3，7-双（二甲氨基）吩噻嗪-5-翁氯化物，又称亚甲基蓝、次甲基蓝、次甲蓝、美蓝、品蓝，是一种芳香杂环化合物。被用作化学指示剂、染料、生物染色剂和药物使用。

分析鉴定

在化学实验中，分析纯亚甲基蓝可用作化学试剂中的吸附指示剂，也可用以沉淀高氯酸盐和铼酸盐，催化光度测定硒和钼等。

同时，亚甲蓝还具有氧化性，可以氧化一些还原性较强的物质，自身被还原成无色的还原态亚甲蓝（有人称亚甲基白）。

在被还原后，还原态的亚甲蓝便具有一定的还原性，可以被一些氧化性物质，如空气中的氧氧化，又生成氧化态的蓝色亚甲蓝。因此亚甲蓝可用于氧化-还原滴定，也可用来示范氧化-还原振荡反应，最典型的是蓝瓶子实验。