液体沉降法中选用分散液有哪些要求
基于三七总皂苷(PNS)存在状态,明确溶液环境对其分离行为的影响。方法 以成分透过率、溶液表面张力为指标,分析单因素乙醇、无机盐、表面活性剂和pH值对PNS存在状态的影响,进而采用Box-Behnken中心组合设计建立数学模型,考察乙醇浓度、氯化钠浓度、溶液pH值对三七皂苷R1(R1)和人参皂苷Rb1(Rb1)超滤分离的影响,分析因素交互作用,明确影响规律。结果 乙醇可以降低皂苷分子间作用力,pH值促进皂苷离子化,增加临界胶束浓度,PNS超滤透过率增加;无机盐的盐析作用降低临界胶束浓度,PNS透过率降低;表面活性剂类型与PNS超滤分离行为相关;通过响应面分析成分超滤透过行为,Rb1对考察因素的敏感度高于R1。结论 明确了溶液环境因素对PNS超滤分离的影响规律,可以动态调节成分状态,实现皂苷类成分的目的性分离。
用化学方法区别甾体皂苷与三萜皂苷的方法有:
(1)醋酐一浓硫酸(Liebermann-Burchard)反应:将样品溶于醋酐中,加入浓硫酸一醋酐(1:20)数滴,呈黄→红→蓝→紫→绿等颜色变化。此反应可以区分三萜皂苷和甾体皂苷,前者最后呈红色或紫色,后者最终呈蓝绿色。
(2)三氯乙酸反应:将含甾体皂苷样品的氯仿溶液滴在滤纸上,加三氯乙酸试液1滴,加热至60℃,生成红色渐变为紫色。在同样条件下三萜皂苷必须加热至100℃才能显色,也生成红色渐变为紫色,可用于纸层析。此方法也可以用于鉴别三萜皂苷和甾体皂苷。
(3)芳香醛一硫酸/高氯酸反应:在使用芳香醛的显色反应中,以香草醛最为普遍,其显色灵敏,常作为甾体皂苷的显色剂。除香草醛外,还有对一二甲氨基苯甲醛。
(4)五氯化锑反应:将皂苷样品溶于三氯甲烷或醇后,点于滤纸上,喷以20%五氯化锑的三氯甲烷溶液(不应含乙醇和水),干燥后60℃~70℃加热,显蓝色、灰蓝色或灰紫色斑点。
来源于植物界的有效成分主要有黄酮类、生物碱类、多糖类、挥发油类、醌类、萜类、木脂素类、香豆素类、皂苷类、强心苷类、酚酸类及氨基酸与酶等。现将主要成分简介如下: 多糖(polysaccharide)又称多聚糖(polysaccharides),由单糖通过苷键连接而成,是聚合度大于10的极性复杂大分子,基本结构单元是葡聚糖,其分子量一般为数万甚至达数百万。广泛分布于动物、植物及微生物中,作为来自高等动植物细胞膜和微生物细胞壁的天然高分子化合物,是构成生命活动的4大基本物质之一。目前已发现的活性多糖有几百种,按其来源不同,可分为真菌多糖、高等植物多糖、藻类地衣多糖、动物多糖、细菌多糖5大类。
植物多糖结构组成非常复杂,不同种的植物多糖的分子构成及分子量各不相同,植物的不同部位,因功能不同,多糖的种类和功能各不相同,生物活性也不同。多糖的结构与蛋白质一样也具有一、二、三、四级结构,植物多糖是由许多相同或不同的单糖以α一或β一糖苷键所组成的化合物,不同种的植物多糖的分子构成及分子量各不相同。淀粉、纤维素等多糖,大多为无定形化合物,无甜味和还原性,难溶于水;除淀粉、纤维素、果胶以外的具有生物活性的多聚糖,是一般,易溶于水,不溶于乙醇。 挥发油(volatile oils)又称精油(essential oils),是一类在常温下能挥发的、可随水蒸气蒸馏的、与水不相混的油状液体的总称。大多数挥发油具有芳香气味,在水中的溶解度很小,但能使水具有挥发油的特殊气味和生物活性,挥发油常存于植物组织表皮的腺毛、油室、油细胞或油管中,大多数成油滴状态存在。有时挥发油与树脂共存于树脂道内(如松茎),少数以甙的形式存在(如冬绿甙、其水解后的产物水杨酸甲酯为冬绿油的主成分)。
挥发油在植物体内的分布有多种多样。有的全株植物都含有(荆芥、紫苏);有的则在根(当归)、根茎(姜)、花(丁香)、果(柑橘)、种子(豆蔻)等部分器官中含量较多。挥发油为多种类型成分的混合物,一种挥发油往往含有几十种到一、二百种成分,其中以某种或数种成分占较大的分量。其基本组成为脂肪族、芳香族和萜类化合物。挥发油中存在的萜类主要是单萜和倍半萜,通常它们含量较高,但无香气,不是挥发油的芳香成分。挥发油易溶于醚、氯仿、石油醚、二硫化碳和脂肪油等有机溶剂中,能完全溶于无水乙醇。 醌类化合物(quinonoids)是植物中一类具有醌式结构的有色物质,在植物界分布较广泛,高等植物中大约有50多个科100余属的植物中含有醌类,集中分布于蓼科、茜草科、豆科、鼠李科、百合科、紫葳科等植物中。天然药物如大黄、虎杖、何首乌、决明子、丹参、番泻叶、芦荟、紫草中的有效成分都是醌类化合物。醌类化合物多数存在于植物的根、皮、叶及心材中,也有存在于茎、种子和果实中。
醌类化合物包括醌类或容易转化为具有醌类性质的化合物,以及在生物合成方面与醌类有密切联系的化合物,醌类化合物基本上具有α、β-不饱和酮的结构,当其分子中连有OH、OCH3等助色团时,多显示黄、红、紫等颜色。主要分为苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌四种类型,在中药中以蒽醌及其衍生物尤为重要。游离的醌类多具升华性,小分子的苯醌类及苯酮类具有挥发性,能随水蒸汽蒸馏,可因此进行提取、精制。游离醌类极性较小,一般溶于甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿、乙醚、苯等有机溶剂,不溶或难溶于水;与糖结合成苷后极性显著增大,易溶于甲醇、乙醇中,溶于热水,但在冷水中溶解度较小,几乎不溶于乙醚、苯、氯仿等极性较小的有机溶剂中。 木脂素(lignan)又称木脂体,由两分子苯丙素衍生物(C6-C3)聚合而成,单体主要是肉桂酸和苯甲酸及其羟甲基衍生物。是一类植物小分子量次生代谢物,在体内大多呈游离状态,也有与糖结合成甙存在于植物的树脂状物质中。木脂素常见于夹竹桃科、爵床科、马兜铃科植物中,广泛分布于植物的根、根状茎、茎、叶、花、果实、种子以及木质部和树脂等部位。因为从木质部和树脂中发现较早,并且分布较多,故而得名木脂素。木脂素类化合物可分为两大类,即木脂素和新木脂素。木脂素类是指C6-C3单位通过边链的β位碳连接而成的化合物,常见的有芳基萘、二苄基丁内酯、四氢呋喃、二苄基丁烷和联苯环辛烯等类型。C6-C3单位不通过边链β位碳连接形成的聚合体被归为新木脂素。
木脂素多数为无色或白色结晶(新木脂素除外),多数无挥发性,少数能升华,如去甲二氢愈创酸。游离木脂素偏亲脂性,难溶于水,能溶于苯、氯仿、乙醚、乙醇等。与糖结合成苷者水溶性增大,并易被酶或酸水解。木脂素分子结构中常含醇羟基、酚羟基、甲氧基、亚甲二氧基及内脂环等官能团,具有这些官能团所具有的化学性质。具有酚羟基的木脂素还可溶于碱性水溶液中。 香豆素类化合物(Coumarins)是邻羟基桂皮酸的内酯,具有芳香气味,广泛分布于高等植物中,尤其以芸香科和伞形科为多,少数发现于动物和微生物中。在植物体内,它们往往以游离状态或与糖结合成苷的形式存在。香豆素的母核为苯骈α-吡喃酮。该类化合物的母核结构有简单香豆素类、呋喃香豆素类、吡喃香豆素类三种类型,是生药中的一类重要的活性成分,主要分布在伞形科、豆科、菊科、芸香科、茄科、瑞香科、兰科等植物中。
游离的香豆素多数有较好的结晶,且大多有香味。香豆素中分子量小的有挥发性,能随水蒸汽蒸馏,并能升华。香豆素苷多数无香味和挥发性,也不能升华。游离的香豆素能溶于沸水,难溶于冷水,易溶于甲醇、乙醇、叙情和乙醚;香豆素苷类能溶于水、甲醇和乙醇,而难溶于乙醇等极性小的有机溶剂。 皂苷(saponins)是广泛存在于植物界的一类特殊的苷类,它的水溶液振摇后可生产持久的肥皂样的泡沫,因而得名。是由甾体皂苷元或三萜皂苷元与糖或糖醛酸缩合而成的苷类化合物。广泛存在于植物界,在单子叶植物和双子叶植物中均有分布,尤以薯蓣科、玄参科、百合科、五加科、豆科、远志科、桔梗科、石竹科等植物中分布最普遍,含量也较高,例如薯蓣、人参、柴胡、甘草、知母、桔梗等都含有皂苷。此外在海洋生物如海参、海星和动物中亦有发现。按皂苷配基的结构分为两类:甾族皂苷,多存在于百合科和薯蓣科植物中;三萜皂苷,多存在于五加科和伞形科等植物中。根据水解后生成皂苷元的结构,皂苷可分为三萜皂苷与甾体皂苷两大类。
皂苷大多为白色或乳白色的无定形粉末,味苦而辛辣,具吸湿性,能刺激粘膜而引起喷嚏,无明显的熔点。可溶于水,易溶于热水、热甲醇、热乙醇,不溶于乙醚、苯等极性小的有机溶剂。皂苷易溶于水饱和的丁醇或戊醇,因此常从水溶液中用丁醇或戊醇提取,借以与糖、蛋白质等亲水性成分分开。皂苷经酶或酸水解生成皂苷元为结晶状物质,可溶于丙酮、乙醚、三氯甲烷等有机溶剂。 强心苷类(cardiac glycosides)是指天然界存在的一类对心脏有显著生理活性的甾体苷类,可用于治疗充血性心力衰竭及节律障碍等心脏疾患,由强心苷元及糖缩合而成,其苷元是甾体衍生物,所连接的糖有多种类型。强心苷的基本结构是由甾醇母核和连在C17位上的不饱和共轭内酯环构成苷元部分,然后通过甾醇母核C3位上的羟基和糖缩而合成。根据苷元部分C17位上连接的不饱和内酯环的类型分为甲型和乙型两类。甲型,是目前临床应用的强心苷及植物体中发现的绝大多数强心苷都是属于这一类型,如洋地黄、毛花洋地黄、毒毛旋花、羊角拗、黄花夹竹桃、夹竹桃、福寿草、侧金盏花、北五加皮、铃兰、万年青等所含的强心苷。
强心苷类成分多为无色结晶或无定形粉末,味苦,对黏膜有刺激性。可溶于水、丙酮及醇类等极性溶剂,略溶于醋酸乙酯、含醇三氯甲烷(2∶1或3∶1),几乎不溶于醚、苯、石油醚等非极性溶剂。它们在极性溶剂中的溶解性,随分子中糖数目增加而增加。苷元难溶于极性溶剂而易溶于三氯甲烷、醋酸乙酯中。强心苷的苷键可被酸、酶水解,分子中具有酯键结构的还能被碱水解。
1、利用甾体皂苷与甾醇能形成分子复合物,甾体皂苷的乙醇溶液可被甾醇(常用胆甾醇)沉淀.生成的分子复合物用乙醚回流提取时,胆甾醇可溶于乙醚,而皂苷不溶,从而达到纯化甾体皂苷和检查是否有皂苷类成分的存在.
2、去一定量的水解液振摇,会有大量持续性泡沫产生,加酸加碱两管泡沫高度相同则可能是三萜皂苷,碱管高于酸管则可能是甾体皂苷
1、止血作用,三七粉可以止血而不留瘀,对出血兼有瘀滞者更为适宜,内服外用均可;
2、活血作用,对瘀血明显者,三七粉可舒筋活血;
3、止痛作用,三七含人参二醇皂苷,镇痛效果明显;
4、补虚强壮作用,三七粉中的三七皂苷可以明显提高巨噬细胞的吞噬力和吞噬指数,具有一定的免疫调节作用;
5、保护心脑血管,提高记忆力,三七粉能有效预防各种心脑血管疾病。三七皂苷可以改善缺氧和再供氧,增强脑血流量,可改善记忆力、抗疲劳并能延缓衰老。
三七做为伤科要药一直受到人们的青睐,随着祖国医疗技术水平的不断提高,人们将其制成了粉末,是用三七干燥根茎,经过加工后形成的物质,性甘、微苦。但三七粉好处虽多,却不适合孕妇、经期、低血压人群。
sān qī shāng yào kē lì
2 三七伤药颗粒药典标准2.1 品名三七伤药颗粒
Sanqi Shangyao Keli
2.2 处方三七157.5g、制草乌157.5g、雪上一枝蒿69.0g、冰片3.15g、骨碎补1476.6g、红花472.5g、接骨木2362.5g、赤芍262.5g
2.3 制法以上八味,除冰片外,制草乌、三七、雪上一枝蒿粉碎成细粉;冰片研细;其余骨碎补等四味加水煎煮二次,第一次2小时,第二次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.05(80~90℃)的清膏,静置,吸取上清液,浓缩至相对密度为1.40(80~90℃)的稠膏;加入制草乌、三七、雪上一枝蒿细粉及糊精适量,混匀,减压干燥,粉碎成细粉,制颗粒,干燥,加入冰片细粉,混匀,制成1000g,即得。
2.4 性状
本品为棕色至棕褐色的颗粒;味微苦。
2.5 鉴别(1)取本品4.5g,研细,加甲醇50ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次25ml,合并正丁醇液,用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次25ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。另取三七对照药材1g,加甲醇50ml,同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品、三七皂苷R1对照品,加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(2010年版药典一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述三种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(2)取赤芍对照药材1g,加乙醇15ml,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。另取芍药苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(2010年版药典一部附录Ⅵ B)试验,吸取[鉴别](1)项下的供试品溶液5μl、上述对照药材和对照品溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(3)取骨碎补对照药材2g,加乙醇15ml,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为对照药材溶液。另取柚皮苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(2010年版药典一部附录Ⅵ B)试验,吸取[鉴别](1)项下的供试品溶液10μl、上述对照药材和对照品溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(1:12:2.5:3)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,热风吹干,在紫外光(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(4)取本品15g,研细,置具塞锥形瓶中,加乙醚20ml,密塞,放置20分钟,超声处理10分钟,滤过,滤液低温挥干,残渣加三氯甲烷1ml使溶解,作为供试品溶液。另取冰片对照品,加三氯甲烷制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(2010年版药典一部附录Ⅵ B)试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯(19:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
2.6 检查2.6.1 乌头堿 ***取本品适量,研细,精密称取10g,置具塞锥形瓶中,加乙醚150ml,密塞,不断振摇10分钟,加氨试液10ml,再振摇30分钟,放置2小时,滤过,残渣用乙醚10ml洗涤,滤过,合并滤液,低温挥干,残渣加无水乙醇溶解并转移至2ml量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,作为供试品溶液。另取乌头堿对照品,加无水乙醇制成每1ml含1.0mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(2010年版药典一部附录Ⅵ B)试验,吸取供试品溶液10μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺(4:3:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上出现的斑点应小于对照品的斑点,或不出现斑点。
2.6.2 其他应符合颗粒剂项下有关的各项规定(2010年版药典一部附录Ⅰ C)。
2.7 含量测定2.7.1 骨碎补照高效液相色谱法(2010年版药典一部附录Ⅵ D)测定。
2.7.1.1 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(16:84)为流动相;检测波长为283nm。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于4000。
2.7.1.2 对照品溶液的制备取柚皮苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含80μg的溶液,即得。
2.7.1.3 供试品溶液的制备取装量差异项下的本品,研细,取约2g,精密称定,精密加入甲醇50ml,称定重量,放置过夜,超声处理(功率350W,频率50kHz)40分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,即得。
2.7.1.4 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每袋含骨碎补以柚皮苷(C27H32O14)计,不得少于1.50mg。
2.7.2 三七照高效液相色谱法(2010年版药典一部附录Ⅵ D)测定。
2.7.2.1 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按下表中规定的梯度进行洗脱;检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于6000。
时间(分钟)
流动相A(%)
流动相B(%)
0~25
20
80
25~75
20→35
80→65
75~76
35→90
65→10
76~83
90
10
2.7.2.2 对照品溶液的制备
取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液,即得。
2.7.2.3 供试品溶液的制备精密吸取[含量测定]骨碎补项下的供试品溶液25ml,蒸干,残渣加水15ml使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次20ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.7.2.4 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品每袋含三七以人参皂苷Rg1(C42H72O14)、人参皂苷Rb1 (C54H92O23)的总量计,不得少于3.0mg。
2.8 功能与主治舒筋活血,散瘀止痛。用于跌打损伤,风湿瘀阻,关节痹痛;急慢性扭挫伤、神经痛见上述证候者。
2.9 用法与用量口服。一次1g,一日3次;或遵医嘱。
2.10 规格每袋装1g
2.11 注意本品药性强烈,应按规定量服用;孕妇忌用;有心血管疾病患者慎用。
2.12 贮藏密封。
2.13 版本《中华人民共和国药典》2010年版 第三增补本
3 三七伤药颗粒说明书3.1 药品名称三七伤药颗粒
3.2 三七伤药颗粒的别名三七伤药胶囊;三七伤药片
3.3 剂型颗粒剂:每袋1g;
胶囊剂:每粒0.25g;0.5g;
片剂:每片重0.3g(薄膜衣片)
3.4 三七伤药颗粒的主要成份三七、制草乌、雪上一枝蒿、冰片、骨碎补、红花、接骨木、赤芍[1]
3.5 三七伤药颗粒的功能主治舒筋活血,散瘀止痛。用于跌打损伤,风湿瘀阻,关节痹痛;急慢性扭挫伤、神经痛见上述证候者。[1]
3.6 注意事项1.心血管疾病患者慎用。
2.老年人、婴幼儿、孕妇、哺乳期妇女使用安全性:孕妇忌服。
3.其他:三七伤药颗粒药性剧烈,应按规定量服用。若出现流涎、呕吐、血压降低、呼吸困难等症状,为中毒现象(乌头堿中毒),应立即停药,一般可用阿托品解救。
3.7 三七伤药颗粒的用法用量口服,一次1袋,3次/d,或遵医嘱。
胶囊剂:口服,一次3粒,3次/d,或遵医嘱。