cck81h4h区别

终点法。

一、实验原理：

细胞活力检测试剂盒(CCK-8)可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。

其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】。

在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪_硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。

生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法,可替代传统的MTT法。

二、用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。

三、优点：使用方便，无需洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂。

CCK-8法能快速检测。CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度。CCK-8法的重复性优于MTT法，产生的formazan是水溶性的，减少因洗涤和溶解带来的误差。

CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取最佳测定时间，与MTT方法相比线性范围更宽，灵敏度更高。

CCK-8细胞活性检测试剂无需预制，即开即用。

材料表面在SBF中形成磷灰石的能力能够反应材料在体内的生物活性，具体检测方法如下：1.SBF配置由于SBF溶液对于磷灰石过饱和，所以配备方法不恰当会导致溶液中磷灰石沉淀产生。整个配备过程需要确保溶液无色、透明，容器表面无沉淀出现，如果过程中产生沉淀，倒去溶液，洗净仪器重新配制。准备一个1000ml的塑料烧杯。首先于塑料烧杯中装好700ml离子交换蒸馏水、一个适当大小磁子，杯口密封以蒸发皿或塑料薄膜。搅拌并调节水温至36.5±1.5C。按表1所列顺序在36.5C恒温下逐个溶解第一到第八个化合物，溶解过程表1配置1000mlSBF溶液时试剂添加顺序、添加量OrderReagentsAmountsContainersPurities（%）Formulaweights1NaCl8.035Weightpaper99.558.44302NaHCO30.355Weightpaper99.584.00683KCl0.225Weightbottle99.574.55154K2HPO4·3H2O0.231Weightbottle99.0228.22205MgCl2·6H2O0.311Weightbottle98.0203.303461.0M-HCl39mlGraduatedcylinder——7CaCl20.292Weightbottle95.0110.98488Na2SO40.072Weightbottle99.0142.04289Tris6.118Weightpaper99.0121.1356101.0M-HCl0-5mlSyringe——2.磷灰石形成能力测试对于密质薄片材料，测出样品尺寸并计算样品表面积精确到2mm应用如下公式计算出SBF用量：Vs=Sa/10,Vs（ml）是SBF的体积量，Sa（mm）表示样品的表面积。对于多孔材料，SBF的用量应大于上式计算量准备好塑料瓶或烧杯，装入计算出的SBF体积量加热到36.5C，然后按示意图往里放置样品。笔记：样品在容器中放置有两种情况，如图1(a)，1(b)。少数情况下，SBF溶液会生成同质磷灰石沉积于样品表面。所以如果样品放置是图A1(b)种情况，表征实验应该检测样品的下表面。四个星期内，分别取出恒温浸透不同时长的各组样品，纯水轻盈洗净。然后将样品放入干燥器中常温干燥。图1SBF中样品浸泡示意图1.四唑盐（MTT）比色法：检测细胞存活和生长的方法除前面所介绍的方法外，还可用四唑盐比色法试验（MTT）。此法的原理是：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物，并沉积在细胞中，而细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的蓝紫色结晶物，用酶联免疫检测，以在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反应活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。●0.25%胰蛋白酶消化细胞使其成为单细胞，用含0.1%胎牛血清的RPMI培养基配成1x10^9个/L的但细胞悬液，将细胞接种于96孔培养板中，每孔100ul。●将培养板置CO2培养箱中，在37℃、5%CO2条件下，培养3-5天。●培养3-5天后，每孔加入MTT溶液10ul，继续置培养箱孵育3-6h，终止培养，加10%SDS-HCl100ul/孔，37℃培养数小时，将细胞内与细胞周围的MTT颗粒充分溶解。●用酶联免疫检测仪测定每孔吸光度（OD），选波长490nm。以时间为横轴，OD值为纵轴绘制细胞生长曲线。用此法测细胞活力，为保证结果的准确性，最好在试验前测定每种细胞的贴比率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，再确定每孔细胞接种数和培养时间，以保证培养终止时不会过满。另外，实验时设空白对照，比色时，以空白孔调零。3.2.2CCK-8法CellCountingKit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazandye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。●制备细胞悬液：细胞计数●接种到96孔板中：根据合适的铺板细胞数，每孔约100ul细胞悬液，同样的样本可做3个重复。●37℃培养箱中培养：细胞接种后贴壁大约需要培养2-4小时，如果不需要贴壁，这步可以省去。●加入10ulCCK8：由于每孔加入CCK8量比较少，有可能因试剂沾在孔壁上而带来误差，建议在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。或者直接配置含10%CCK8的培养基，以换液的形式加入。●培养1-4小时:细胞种类不同，形成的Formazan的量也不一样。如果显色不够的话，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞形成的Formazan很少，需要较长的显色时间（5-6小时）。●测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。

cck8实验原理是如下：

一、实验原理：

细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。

其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】。

在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。

生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法,可替代传统的MTT法。

二、用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。

三、优点： 使用方便，无需洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂。

CCK-8法能快速检测。CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度。 CCK-8法的重复性优于MTT 法，产生的formazan 是水溶性的，减少因洗涤和溶解带来的误差。

CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取最佳测定时间，与MTT 方法相比线性范围更宽，灵敏度更高。

CCK-8细胞活性检测试剂无需预制，即开即用。

CCK8检测细胞原理：

Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基－4-硝基苯基）－3-(4-硝基苯基）－5-(2,4-二磺酸苯）－2H-四唑单钠盐】。

它在电子载体1-甲氧基－5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

CCK8的优点：

使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂。

CCK-8法能快速检测。

CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度。

CCK-8法的重复性优于MTT法。

CCK-8法对细胞毒性小。

CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。

The MTT assay and the MTS assay are colorimetric assays for measuring the activity of enzymes that reduce MTT or close dyes (XTT, MTS, WSTs) to formazan dyes, giving a purple color. A main application allows to assess the viability (cell counting) and the proliferation of cells (cell culture assays). It can also be used to determine cytotoxicity of potential medicinal agents and toxic materials, since those agents would stimulate or inhibit cell viability and growth.

MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, a yellow tetrazole), is reduced to purple formazan in living cells. A solubilization solution (usually either dimethyl sulfoxide, an acidified ethanol solution, or a solution of the detergent sodium dodecyl sulfate in diluted hydrochloric acid) is added to dissolve the insoluble purple formazan product into a colored solution. The absorbance of this colored solution can be quantified by measuring at a certain wavelength (usually between 500 and 600 nm) by a spectrophotometer. The absorption maximum is dependent on the solvent employed.MTS (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium), in the presence of phenazine methosulfate (PMS), produces a formazan product that has an absorbance maximum at 490-500 nm in phosphate-buffered saline.

MTS-PMS法原理和MTT差不多，下面是MTS检测的试剂盒

CellTiter 96® AQueous 非放射性细胞增殖检测（MTS）顶端产品 包装 目录号 价格(元)

CellTiter 96® AQueous Non-Radiotive Cell Proliferatim Assay 1000次检测 G5421

5000次检测 G5430

50000次检测 G5440

单独提供

CellTiter 96® AQueous MTS Powder 1g G1111

250mg G1112

描述：CellTiter 96® AQueous 非放射性细胞增殖检测以比色法确定在细胞增殖、细胞毒性或化学灵敏性检测等实验中的活细胞数目。这个系统由一种新型甲臢化合物[3-（4，5-二甲基噻唑-2-基）-5-（3-羧甲酯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四唑（金翁），内盐；MTS]和一个电子偶联剂（吩嗪硫酸二甲酯）PMS组成。MTS被细胞生物还原成一种可溶于组织培养基的甲臢化合物（1）。这种甲臢化合物在490nm的吸收值可以直接在96孔板上测量，而不需要另外作处理（2，3）。新陈代谢活跃的活细胞内的脱氢酶类将MTS转化成液态可溶的甲臢化合物。由490nm测量的吸收值所表示的甲臢产物的数量与培养物中活性细胞的数量成正比。

如果你目前正在使用[3H]-胸腺嘧啶掺入检测，使用MTS/PMS混合液可以替代[3H]-胸腺嘧啶检测。只要在通常加入放射性[3H]-胸腺嘧啶的时刻加入MTS/PMS混合物就行。比较使用CellTiter 96® Aqueous的检测和使用[3H]-胸腺嘧啶掺入的细胞增殖生物分析的数据，显示两者的结果相似。这与使用Promega原始的CellTiter 96® 检测（目录号#G4000）所进行的放射性掺入研究符合（4）。

CellTiter 96® MTS粉末是用比色法在细胞增殖，细胞毒性或化学灵敏性检测中确定活性细胞数目的一种新型甲臢化合物。它以粉末形式提供。

特点

● 易于使用：混合MTS和PMS溶液，加入到细胞中，孵育然后读取吸光度值。

● 快速：在96孔板中进行检测，不需洗涤或收获细胞。也不需要溶解步骤。因为MTS甲臢产物可溶解在组织培养基中。

● 非放射性：不需液闪混合液，不需处理放射性废物（不像[3H]-胸腺嘧啶）。

● 灵活：平板被读数后还可以放回温箱继续颜色反应（不像MTT）。

● 安全：不需要挥发性有机溶剂来溶解甲臢化合物（不像MTT）。

应用

● 细胞增殖

● 化学灵敏性

● 细胞贴附确定

● 细胞毒性

● 趋化性

● 凋亡结果