苯酚-硫酸法的注意

他们不是一起加入的吧？怎么能先配制呢？

苯酚硫酸法测多糖。 是将多糖在浓硫酸水合产生的高温下迅速水解，产生单糖。

单糖中再加入苯酚反应（在强酸条件下）生成橙色衍生物。

在波长490nm左右处和一定浓度范围内，该衍生物的吸收值与单糖浓度呈线性关系，从而可用比色法测定其含量。

若要一起加入，先配成溶液的话。要先将苯酚溶于（温）水，然后将浓硫酸绶绶倒入。切不可将溶液注入水中。

你可以用一个棕色的试剂瓶把自己配好的苯酚在4℃冰箱冷藏保管，紫外分光光度法测定糖含量的时候从仪器打开的那一刻到你所有多糖样品测定完，到关闭仪器，这一个过程你只需要做一个标曲。当下一次重新开机测定的时候你就要继续重新做一个标曲了，因为系统也是有误差的。

这个方法测定糖含量的时候 你也会发现 第一天和第二天同一台仪器同样的人同样的方法做出的标曲吸光值是不太一样的。所以每一批都要做标曲的。

而苯酚对你的实验影响不大，避光冷藏不会变质这样你的试剂误差其实更小，这个方法关键是系统误差比较严重。还有R2做出三个9相当牛了的 一般做因素分析实验时候 没有必要一味的追求3个9 有时候2个9 也能说明问题了的。

多糖的多变性很严重，你最好每个样品多测几次，当三个值都差不多时取均值来算。还有记得一定摇匀了，测定在转移到比色皿的时候也要注意岩壁慢慢倒入，小心气泡引入前后测定值差异大。最好祝你实验顺利。希望对你有帮助

利用多糖被浓硫酸水合产生的高温迅速水解，产生单糖，并迅速脱水生成醛糖衍生物，在这种强酸条件下与苯酚反应生成橙色衍生物，该衍生物在波长490 nm 处和一定浓度范围内，吸光度与糖浓度呈线性关系。

制备苯酚制剂的目的，就是因为苯酚的纯度对实验影响很大，不得已而为之。

如果限于实验室条件不能进行高温蒸馏，那么建议你采用蒽酮硫酸法测定多糖，很可能比NDS测定方法重现性还好，但需注意一点：蒽酮剧毒！所以一般用的都是NDS方法，虽然麻烦一些。