不同浓度的硫酸铵溶液能析出不同的蛋白质对于所有的情况都是这样吗

生物化学实验关于蛋白质检测

实际上，凡分子内含有两个氨甲酰基（－CO－NH2)的化合物，不论是直接相连或是通过一个氮或碳原子间接连接；以及具有一CS－NH2，一C(NH)NH2，－CRH－NH2，－CH2NH－CHNH2CH2OH，－CHOH－CH2NH2等基团的化合物均能产生双缩脲反应；甚至过量的铵盐也会干扰反应。所以，双缩脲反应并非为蛋白质所特有。

【实验试剂和器材】

1．试剂

⑴ 10% NaOH溶液。

⑵ 双缩脲试剂：称取硫酸铜（cupric sulfate，CuSO4•5H2O，A.R.或C.P.)1.50 g，酒石酸钾钠（potassium sodium tartrate，NaKC4H4O6•4H2O，A.R.或C.P.)6.0 g，分别用蒸馏水约250 mL溶解后，全部转移于1 L容量瓶中，混合；再加入10% NaOH溶液300 mL，随加随摇匀；最后用蒸馏水稀释至1 L，保存于塑料试剂瓶中。如无红色或黑色沉淀出现，此试剂可长期使用。

⑶ 标准血清：收集足量的新鲜血清（单份的或混合的)，每100 mL加入叠氮钠50 mg，置于冰箱内分装后冰冻保存。

⑷ 生理盐水，即0.9%的NaCl溶液。

2．器材

⑴ 试管及试管架。

⑵ 刻度吸量管。

⑶ 722型分光光度计。

属于胶体范围。

在蛋白质中加入无机盐（如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等），会吸引大量水分子与这些无机盐离子水合，于是蛋白质表面暴露出来的疏水性区域增加，彼此靠著疏水性作用力结合，而从溶液中沉淀，这种作用便称为盐析来，因此向蛋白质中加入硫酸铵会发生盐籂胆焚感莳啡锋拾福浆析，是可逆的，不是变性

盐析有一下几种情况：

1.盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使溶解的物质析出的过程。如：加浓（NH4）2SO4使蛋白质凝聚的过程。

2.向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析。

3.把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物。往锅内加入食盐颗粒，搅拌、静置，使高级脂肪酸钠与甘油、水分离，浮在液面。（该反应用以制肥皂）

如果加蛋白质溶液加到硫酸铵溶液中,那么先加入的蛋白溶液必定会因为过高的盐浓度发生变性.

所以必须是要向蛋白质溶液中缓缓添加硫酸铵溶液,温和搅拌.逐滴加入硫酸铵.

因为血清蛋白存在溶液中，或多或少析出都会携带一部分的水分，不可能是单纯的血清蛋白，所以是溶液。盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。如：加浓（NH4）2SO4使蛋白质凝聚的过程；在乙酸生成乙酸乙酯的酯化反应中加入饱和碳酸钠溶液，降低乙酸乙酯溶解度，使其分层现象更明显的过程。向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐，可以使蛋白质性质发生改变而凝聚，进而从溶液中析出，这种作用叫作变性，性质改变，是化学反应，无法复原。把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物（胶体）。往锅内加入食盐颗粒，搅拌、静置，使高级脂肪酸钠与甘油、水分离，浮在液面。（该反应用以制肥皂）简单的说就是利用高浓度中性盐使蛋白质发生沉淀；蛋白质的溶解度（S）不同，用于沉淀的盐浓度不同。盐析结晶原理：盐析结晶是指在盐溶液体系中，加入某种电解质盐析剂, 这种加入的盐析剂，其离子的水合作用比原溶液中其它盐较强， 它使溶液中自由水分子数减小, 从而提高溶液中欲结晶物质在溶液中的有效浓度，使欲结晶物质在溶液中结晶析出， 这就是盐析结晶。

一是蛋白质颗粒表面大多为亲水基团，可吸引水分子，使颗粒表面形成一层水化膜，从而阻断蛋白质颗粒的相互聚集，防止溶液中蛋白质的沉淀析出；

二是蛋白质颗粒表面可带相同电荷颗粒之间相互排斥不易聚集沉淀，也可以起稳定颗粒的作用。若去除蛋白质颗粒这两个稳定因素，蛋白质极易从溶液中沉淀。

盐析是一种与蛋白质的沉淀的性质相关的分离方法：它用硫酸铵、硫酸钠等中性盐来破坏蛋白质在溶液中稳定存在的两大因素，故能使蛋白质发生沉淀。不同蛋白质分子颗粒大小不同，亲水程度不同，故盐析所需要的盐浓度不同，从而将蛋白质分离，如用硫酸铵分离清蛋白和球蛋白，在半饱和的硫酸铵溶液中，球蛋白即可从混合溶液中沉淀析出除掉，而清蛋白在饱和硫酸铵中才会沉淀。盐析的优点是不会使蛋白质发生变性。

凯氏定氮法测蛋白含量：

根据凯氏定氮测得的氮含量和氮在蛋白质中的含量为1/6.25（即16%），故可计算得出蛋白质的含量。

凯氏定氮过程及化学反应如下：

浓硫酸在催化剂和高温作用下，将有机化合物消化，使其中的氮全部转换成硫酸铵，然后采用加碱（NaOH）蒸馏的方式，使硫酸铵中的铵（NH4+）以氨气的形式释放出来，再用加有指示剂的硼酸溶液吸收这些氨气，用酸滴定液滴定至终点，从而确定蛋白质中氮的含量。本方法创始人是丹麦化学家Johan Kjeldahl (1849-1900)。其反应原理如下：

催化剂

消化：含氮有机物＋H2SO4 ――――→(NH4)2SO4

420℃

蒸馏：(NH4)2 SO4 + 2NaOH→2NH3 ↑+Na2SO4 +2H2O

吸收：NH3 + H3BO3 →NH4BO2 + H2O

滴定：2NH4BO2 + H2O +H2SO4→(NH4)2SO4 +2H3BO3

溶解，蛋白溶液加入浓无机盐溶液，导致蛋白质溶解度降低而析出，这是盐析过程，蛋白质只是沉淀，并未变性，加水后即恢复溶解。

将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止析出清蛋白。取出部分清蛋白，加少量水，沉淀是否再溶解？为什么？

不溶解，因为加入硫酸铵粉末是强电解质，引起蛋白质胶体的凝聚沉淀，是变性过程，不可逆，加水也不会溶解

盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。硫酸铵不是重金属盐，不会使得蛋白质变质蛋白质的盐析。硫酸铵浓溶液可降低蛋白质的溶解。

盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。硫酸铵不是重金属盐，不会使得蛋白质变质蛋白质的盐析。

硫酸铵浓溶液可降低蛋白质的溶解度使蛋白质脱水凝聚而盐析。这个过程是物理变化，不是化学变化，蛋白质分子没有改变。

向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。

向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐，可以使蛋白质性质发生改变而凝聚，进而从溶液中析出，这种作用叫作变性，性质改变，是化学反应，无法复原。

把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物（胶体）。

盐析结晶是指在盐溶液体系中，加入某种电解质盐析剂,这种加入的盐析剂，其离子的水合作用比原溶液中其它盐较强。

它使溶液中自由水分子数减小,从而提高溶液中欲结晶物质在溶液中的有效浓度，使欲结晶物质在溶液中结晶析出，这就是盐析结晶。

盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。比如在蛋白溶液中加入高浓度的硫酸铵使蛋白质溶解度降低而析出的过程。

很多中性盐都可以使蛋白质发生盐析，比如硫酸铵，氯化钠等等。

蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度，以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。