RNA提取的时候无水乙醇，75%乙醇，氯仿有哪些作用

加完氯仿是用异丙醇析出RNA，我们是用75%的乙醇（用DEPC水来配）洗涤，乙醇是去各种离子的，无水乙醇不能去除离子，洗完之后一定要完全晾干，然后加入适量的DEPC水，在60度中水浴，直至溶解，如果部分沉淀不能溶解，那可能是含有其他物质，你可以将溶解的部分吸到另一个灭菌的管子中，这部分应该是会有溶解有RNA的。

异丙醇是可以沉淀DNA的。后续或者前面应该有分离掉DNA的方法，因为DNA假如你是真核的话，通常是染色体的形式出现，分子量很大的，很容易沉淀下来，但是RNA的分子量就比较小，从而产生分离。

异丙醇可以沉淀RNA和蛋白质，其实。。。。假如很本质的看，都是差不多的，就是抢水。但是其还会让蛋白质变性，RNA什么的，不会，假如你不是研究什么二级结构的话。

异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，

氯仿的作用有多个方面，一是作为有机溶剂变性蛋白，使其沉淀并通过离心除去，同时也通过变性作用抑制RNase活性；二是RNA提取试剂中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚，很多自己配试剂提的方法也用苯酚，抽提蛋白时也会用到苯酚），苯酚微溶于水，抽提烷之后水相里有痕量的酚，如果不除去会损伤核酸，需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等），起到一定除杂作用。

通常氯仿里面会加少量异戊醇（1/25），减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫，影响后续操作，不过个人经验感觉加不加没什么太大区别，也许是我的样品里蛋白不多吧

异丙醇是沉淀核酸用的，作用和乙醇一样。只不过用量少一点，0.6V~1V就够了，不像乙醇沉淀需要至少2V，一般需要2.5倍体积。在水相很多，离心管容积有限，加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。不过感觉效果不如乙醇，偶尔会有沉淀不出来东西的时候。

提取中都是用酒精洗脱盐离子使DNA或RNA沉淀下来

本身是不溶于酒精的

混有RNA的话基本是没有影响的

因为RNA比DNA要跑的快

跑完后会在胶的最前段

而且残留的RNA很大部分因为无处不在的RNA酶而降解

所以基本没问题

还有就是跑琼脂糖不用7%的胶

除非是特定大小片段的回收

否则基本用0.8%或1%的琼脂糖做分离就好了