十二烷基硫酸钠的合成 产品为何要控制PH

表面活性剂。电导法常作为检测水的纯度的理想方法。十二烷基硫酸钠又称AS，简称SDS，属阴离子表面活性剂，是表面活性剂，所以在测定十二烷基硫酸钠溶液的表面张力时可以用电导法。用作乳化剂、灭火剂、发泡剂及纺织助剂等。

氢氧化镁用作阻燃剂时，必须经过特殊处理和表面改性，具备特定的晶形。一般要求：①晶形为纤维形，这样能够增加材料的延伸率和挠曲强度。②纯度必须高，纯度越高，阻燃效果越好。③颗粒越小越好实验证明纳米氢氧化镁作为阻燃剂填充到材料中时，各方面性能包括阻燃效果、消烟和机械性能都比微米氢氧化镁优越。④表面极性低，普通氢氧化镁正是由于表面极性高、微观内应力大，作为阻燃剂填充到材料中时影响了材料的机械性能。当表面极性低时，颗粒积聚成团性降低，在材料中分散性和相容性增加，对材料机械性能影响减少[4]。所以要用适当的表面活性剂及用量进行表面处理，来提高与高分子聚合物的相容性。⑤比表面积小于20m2/g，在(101)方位扭歪值小于3.0×0.001,(101)方位的晶体尺寸大于80nm，只有具备以上特性的氢氧化镁才能和材料比较好的相容。

如PCR、Southern杂交这一类实验基本保证所需片段的完整，而二代测序实验为了获得全面的序列信息对DNA的完整性要求更高。

去除对下游实验中酶分子有抑制作用的有机溶剂和高浓度金属离子

将蛋白质、多糖、多酚等生物大分子的污染降到最低

去除其他核酸（如RNA对后续实验的影响）

血液、动物组织、培养细胞、鼠尾等

特点：细胞数量较多、样本成分相对单一

血清、血浆、鼻咽拭子、痰液、支气管/肺泡灌洗液、腹水、病毒、粪便、FFPE样本等

特点：细胞数量少、样本成分复杂

普通植物：拟南芥、小麦、玉米、水稻等

特点：存在细胞壁这样的保护结构、细胞内部还有液泡、叶绿体等细胞器成分相对复杂

多糖多酚类植物：水果果肉、植物种子等

特点：多糖与核酸理化性质一致、多酚氧化后易于核酸结合，影响DNA的提取

细菌:革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌等）、革兰氏阴性菌（大肠杆菌等）

特点：有细胞壁，有的细菌还有鞭毛和荚膜

真菌：酵母、真菌菌丝等

特点：存在以多糖为主要成分的细胞壁、细胞内部成分相对复杂

新鲜样本中受到内源性核酸酶影响相对最小，得到DNA质量相对更好。

投入过多样本，后续样本裂解不充分从而影响DNA提取情况，还会引入过多杂质及内源性核酸酶。

对于含有多糖多酚等次生代谢产物的衰老叶片可在4℃黑暗环境下饥饿1-2天；进行低温或冷冻保存可以避免内源性DNA酶对样本中的DNA进行一个降解。

-20℃短期保存（1-3个月），-70℃长期保存；福尔马林固定时间8-24h内为宜，样本存放时间不宜超过1年；FFPE样本保存温度4℃，建议不超过3年。

长时间使用福尔马林进行固定，里面有效成分甲醛会引起生物大分子之间形成广泛的亚甲基交联桥使DNA分子脆性增加，在剪切力的作用下，DNA分子容易断裂，同时DNA与蛋白质之间经广泛交联之后，可形成牢固的复合物，这样也阻止蛋白酶对组织的消化，从而影响DNA的提取。

可使用不同抗凝剂的抗凝管进行采集和保存；避免反复冻融，4℃短期保存3-4天，-20℃下可最多保存2年，-70℃下长期保存：全血、白细胞、血凝块、血清或血浆。

液氮研磨或匀浆

液氮研磨（最推荐）

研磨充分又保证样本处于低温条件下避免DNA降解

DNA存在于含有细胞核的白细胞中，而大量存在的红细胞会引入更多杂质和核酸酶，所以需要提前使用红细胞裂解液对红细胞进行去除。

贴壁细胞胰酶消化处理再做收集

悬浮细胞只要离心弃上清

溶菌酶破壁处理

如金黄色葡萄球菌加入一定量的溶菌酶在37℃条件下孵育30min就可完成破壁的处理

酶解破壁或液氮冻融或超声裂解法

脱蜡处理（二甲苯或矿物油类的物质进行脱蜡处理）

CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂，可以溶解细胞膜，与核酸结合形成在高盐环境下可溶的复合物。

1.Tris-Hcl (PH8.0) 提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏

2.EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性

3.Nacl提供一个高盐环境，使DNA充分溶解于液相中

4.CTAB裂解细胞，与核酸结合形成在高盐环境下可溶的复合物

SDS法（十二烷基硫酸钠）是一种阴离子去垢剂，高温（55-60℃）裂解细胞，蛋白变性，染色体离析，在高盐环境下或降低温度后蛋白、多糖等结合形成的复合物沉淀，释放核酸。

在氢氧化钠（PH12-12.6碱性环境）和去污剂SDS的作用下细胞破裂，细菌蛋白质和染色体DNA变性，双链DNA氢键断裂，DNA变性。加入酸性高盐缓冲液后PH恢复中性，共价闭合环状质粒DNA复性速度快于线性的染色体DNA。细菌蛋白质、破裂的细胞壁和变性的染色体DNA会相互缠绕成大型复合物被SDS包盖。之后复合物沉淀下来，质粒DNA留在上清中。

含有Triton X-100和溶菌酶的缓冲液中加热至100℃使细菌裂解。通过加热破坏细菌外壁的同时有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA变性。温度下降后，闭环DNA形成超螺旋分子，离心时留在上清中。

酚/氯仿抽提去除蛋白质，之后使用乙醇或异丙醇沉淀DNA

通过离心柱上的吸附膜，特异性吸附DNA

通过磁珠表面修饰（硅基质）从而特异性吸附核酸

检测原理：核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统，能吸收紫外光，最大吸收波长是260nm。

优点：操作简便、迅速

缺点：无法区分DNA、RNA、降解核酸、游离核苷酸及其他杂质，易得到浓度虚高值

常见仪器：Nanodrop、Onedrop

检测原理：采用荧光染料与特异的靶分子结合后发出荧光，仪器接收荧光值转化为浓度数据。

优点：灵敏度较高，操作简便

缺点：成本高，价格较贵；无法直接区分降解核酸

OD260：核酸的吸光度

OD280：蛋白质的吸光度

OD260/OD280 =1.7-1.9 说明纯度很好

OD260/OD280 <1.7 表明可能有蛋白质残留

OD260/OD280 >1.9 表明DNA可能存在部分降解，建议进行完整度检测或存在RNA残留

判断有无RNA、蛋白残留。1%-2%琼脂糖，上样1-3ul

判断DNA有无降解。1%-2%琼脂糖，上样1-3ul

通过胶图中DNA条带情况来判断

完整的基因组DNA条带单一且明亮，无任何拖尾或弥散。

出现不同程度的降解，胶图中可看到不同程度的拖尾或弥散。降解越严重弥散越亮，片段大小会越小。

保存形式：建议分装保存，避免DNA反复冻融，影响DNA的完整性。

保存液：

短期保存：对下游实验中离子浓度要求比较高的——PH为弱碱性的无菌水。

对离子浓度要求不高的——TE缓冲液（Tris、EDTA）。

长期保存：乙醇。

保存温度：-20℃/-80℃下可长期保存，4℃下保存时间最好不超过14天。

1.尽可能选择新鲜的样本，减少内源酶的作用

2.样本起始投入量不要超过所用方法的起始量标准

3.样本保存时尽可能的避免反复冻融

4.选择合适的处理方式并进行充分的样本前处理

5.前处理结束后在样本解冻前添加裂解液

6.需对样本进行充分裂解

7.正确添加所需试剂种类及使用量，样本量增加时裂解液也需成倍增加

8.对得到的DNA产物进行分装保存，避免反复冻融且保存时间不易太久

1.事先了解好提取样本中DNA含量水平

2.样本中发生DNA的降解，产量也会有所下降

3.选择合适的前处理及裂解方式（如延长裂解和沉淀DNA的时间等），并尽可能的将样本中的DNA完全释放出来

4.使用柱式试剂盒对DNA产物洗脱的时候，要尽可能的覆盖整个吸附膜；进行二次洗脱也可增加产量

5.使用沉淀法提取DNA时，可以在沉淀之前加入1/10体积的醋酸钠（PH5.2）有助于DNA沉淀

1.样本投入量不要太多，投入太多杂质也多以及后续裂解也不完全

2.样本应进行充分裂解，特别是对于一些比较复杂、含有较多杂质（多糖、多酚等）的样本需进行特殊处理

3.RNA残留：使用RNase对RNA进行处理，处理时间不宜太短（5min左右）

4.蛋白残留：使用蛋白变性剂或蛋白酶K

沉淀法分层吸取上清(DNA)时注意不要吸到下层沉淀蛋白

1.抽提液中加入防止酚类氧化的试剂：β-巯基乙醇，抗坏血酸，半胱氨酸，二硫苏糖醇等

2.加入易与酚类结合的试剂：如PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，与酚类有较强的亲和力，可防止酚类与DNA的结合

1.高盐法：用高浓度的Na+、K+改变多糖的溶解特性，使其脱离水相进入有机相，然后用酚仿抽提去除

2.低浓度乙醇和醋酸钾溶液可以共同沉淀多糖

3.PVP/PVPP类物质对多糖的去除也有一定作用

1.质粒拷贝数

低拷贝质粒：pBR322、pACYC及其衍生载体、pSC101及其衍生载体、SuperCos、pWE15等

高拷贝质粒：pTZ、pUC、pBS、pGM-T等

低拷贝质粒适当增加样本投入量

2.菌种问题：保存时间、抗性筛选

如保存时间过久，提取质粒之前，这个质粒已经丢失，这种情况可选择活化，涂布平板培养后，重新挑选新的菌落来进行液体培养

3.选择合适的前处理及裂解方式，并尽可能的将样本中的DNA完全释放出来

4.使用柱式试剂盒对DNA产物洗脱的时候，要尽可能的覆盖整个吸附膜；进行二次洗脱也可增加产量

1.菌种收集时间

对于老旧菌种所含有的开环质粒的量明显高于属于对数生长期的菌种的。根据使用菌种生长情况找到对数生长期。一般来说对数生长期是生长速率常数最大，细胞分裂所用的代时最短的时候就是对数生长期。

2.胞内酶含量很高的宿主菌

先去除胞内酶，再提取质粒

3.变性裂解的时间不宜过长，也会对质粒完整性造成影响

4.碱裂解法加入中和液后操作应该轻柔(裂解时间不宜超过5min）

杂质有3种

1.RNA残留

使用RNase对RNA进行消化处理

2.基因组DNA残留

温和操作

在裂解或中和过程中，操作过于剧烈而导致基因组DNA的断裂

3.蛋白残留

使用蛋白变性剂或蛋白酶K进行消化

碱裂解法将中和后的体系置于4℃一段时间，使蛋白质残留沉淀下来更少

中和均匀彻底，将蛋白与试剂充分融合

一、首先我们需要了解一下全成分标识。

1、根据国家质量检验检疫总局和国家标准化管理委员会发布的《消费品使用说明化妆品通用标签》的规定 ，从2010年6月17日起，所有在中国境内生产和进口报检的化妆品都需要在产品包装上明确标注产品配方中加入的所有成分的名称。

2、全成分标识包括所有在中国境内生产和销售的化妆品，如护肤品、彩妆、洗护发产品、头发定型产品（啫哩、发胶、发泥、定型喷雾和摩丝等）、染发产品、烫发产品、牙膏和漱口水等。

3、全成分标识的成分表中，成分名称应按加入量由多到少排列。排位越靠前，表明这个成分在该化妆品中占的比重越大。

4、另外，全成分标识中，成分加入量小于或等于1％的成分，位于加入量大于1％的成分之后，排列不按先后顺序。所以，在全成分表中，最后的几个成分之间可能并没有加入量多少的关系，也就是说基本起不到功效性作用。

5、还有一点值得注意的是，香精香料统一以香精标注在全成分表中，色素则以着色剂的编号或者中文名称标注。

二、通过熟知单一成分了解产品对应功效

舒缓：你选择的产品中就要有对应的安全的舒缓成分。（积雪草苷、神经酰胺、没药醇、卵磷脂、牛油果树、洋甘菊提取物、芦荟汁、甾醇等。）

保湿：你选择的保养品中应该含有（透明质酸、甘油、丁二醇、神经酰胺、牛油果树、矿物油、尿囊素、矿物元素等。）

美白：你选择的保养品中应该含有这些成分（VC、抗坏血酸及其衍生物、烟酰胺、曲酸、氨甲环酸、光果甘草提取物、熊果苷等。）

抗衰老：你选择的保养品中应该含有（视黄醇及其衍生物、烟酰胺、胜肽、氨基酸肽、玻色因、神经酰胺、大豆异黄酮、多酚等）

三、如果一款产品中植物提取成分排在卡波姆、黄原胶（增稠剂）、苯氧乙醇（常用防腐剂）这些防腐剂和乳化剂之后，那它所起到的作用就基本可以被忽略，只能被理解是一种宣传概念或是噱头；

反之，如果植物提取成分在成分表中的位置远远前于防腐剂和乳化剂，那添加了这个浓度植物提取成分的保养品就基本可以起到成分本身诉求的护肤作用。

扩展资料：

错误的标注

经常关注护肤的仙女们应该有注意到，化妆品的很多成分都不只一个名字，比如玻尿酸、果酸、A醇、VC等，这些都是成分的昵称，或者是我们生活中约定成俗的叫法，并不是该成分真正的名称，所以在成分表中压根找不到他们的身影。

国家规定，中文标签中的成分名称必须按照国际通用命名方式进行命名。比如下面的一些常见的成分：

如果有小仙女在产品的成分表中发现了某种成分的昵称，那就要注意了，这个产品基本可以判定是违规的，甚至不是正规品牌。

如果成分表中出现“美白因子”、“保湿因子”等字眼，那更要小心了，这是绝对的错误，这样标注是不可能通过国家相关部门审核的，你却买到了， 那这个产品应该要好好考虑考虑了~

但是，成分表中标注“香料”，是完全没问题的，国家允许此类成分直接以“香料”标注。

需要注意的是，化妆品中添加的香料、香精一般都是人工合成，是一种很多成分的合成品，不是单一的成分（除非是天然香料，相当的昂贵），对皮肤的致敏风险比较高，建议尽量避开含香精香料的护肤品，尤其是皮肤屏障脆弱的仙女们。

浓度高不高，看排序

化妆品的成分表中各成分的顺序不是顺便排的，是依据其浓度高低进行顺位排序，当成分浓度低于1%的时候，可以随机排列。

对于大多数产品而言，水类和多元醇（一般是丁二醇、甘油、丙二醇、戊二醇）构成了基底成分，所以在产品中，这两类成分的浓度一般是最高的，也就是说其排名是非常靠前的，一般都会排在第一二三位。

除了看有效成分的浓度，成分表中也能很容易看到一些致敏风险较高成分的浓度，比如乙醇（酒精），酒精对皮肤有刺激性，干皮、敏感肌肤建议慎重选择。

参考资料：凤凰网-1分钟教你看护肤品成分表

1.SDS-PAGE的类型

在SDS-PAGE中，由于蛋白质与SDS结合后都带负电，因此是阳极电泳。

与常规聚丙烯酰胺凝胶电泳相似，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳也可分为圆盘电泳、垂直平板电泳和水平平板电泳。其中平板电泳较常使用。

  SDS-PAGE一般来说不采用连续电泳方式，因为在SDS-PAGE中蛋白质间不存在电荷密度差异，多采用不连续电泳方式。不连续电泳中蛋白质的分离主要取决于其分子大小和形状。不连续电泳的分离胶可以是均一胶，也可以是梯度胶。

2.SDS-PAGE的原理

  对于SDS-PAGE，由于在电泳体系中加入了十二烷基硫酸钠（SDS）和强还原剂（如巯基乙醇，二硫苏糖醇等），其中SDS作为阴离子去污剂会破坏蛋白质的氢键和疏水相互作用，导致蛋白质构象改变，而巯基乙醇等可以打开蛋白质分子内的二硫键，使其分解为亚基，因此电泳过程中蛋白质的生物活性丧失或减弱，但电泳后可恢复或部分恢复其活性。

  在离子强度低时，主要以单体形式存在的SDS可以与蛋白质结合，生成蛋白质-SDS复合物。由于SDS带有大量负电荷，复合物所带的负电荷远远超过蛋白质原有的负电荷，这使得不同蛋白质间电荷的差异被掩盖。而SDS-蛋白质复合物形状都呈椭圆棒形，棒的长度与蛋白质亚基分子量有关，所以在SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白只存在分子大小的差别，利用这一点可将不同的蛋白质分开 （分子筛效应），因此SDS-PAGE常用于检测蛋白质亚基的分子量及鉴定纯度。

  与常规PAGE类似，不连续SDS-PAGE对蛋白质的分离除了基于分子筛效应外，还基于其对样品的浓缩效应。

3.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验方法

  样品缓冲液中须含有3～4倍于蛋白质的SDS以及足够断裂二硫键的β-巯基乙醇或二硫苏糖醇，而且蛋白须完全变性展开。由于每克伸展的蛋白质结合1.4g单体SDS，因此通常在样品缓冲液中加1％～2％（10～20g/L）SDS，在凝胶及电泳缓冲液中加0.1%SDS。

制胶

  SDS-PAGE多采用不连续的电泳方式，其制胶方法与常规PAGE的制胶方法基本一致，但由于凝胶中含有SDS，容易起泡，低温下又易结晶析出，因此单体储备液不需抽气，聚合时的凝胶也不适宜在4℃放置。制胶模具的准备也同常规PAGE相同。下面就介绍不连续电泳中的阳极电泳的制胶方法。

（1）凝胶储备液的配制

① 丙烯酰胺储备液T＝30％，C固定，2.6%～3%。

② 4×分离胶缓冲液 如pH＝8.8、1.5mol/L Tris-HCl缓冲液，含0.4%SDS。

③ 4×浓缩胶缓冲液 如pH＝6.8、0.5mol/L Tris-HCl缓冲液，含0.4%SDS。

④ 10％过硫酸铵溶液（AP）。

注：丙烯酰胺是神经毒剂，应戴手套操作。电泳时的试剂应达到电泳纯，并使用重蒸水配制溶液。

（2）分离胶配方

A液/ml B液/ml 重蒸水/ml 10%AP/μl TEMED/μl

x/30×10=x/310/4=2.510-x/3-2.5约503～5

  根据聚合的快慢来调节AP和TEMED的用量，使凝胶在20～60min内聚合。

（3）制备浓缩胶

制备样品和加样

  5×样品缓冲液：pH＝6.8、0.06mol/L （0.4mol/L）Tris-Hcl缓冲液，含25％（50％）甘 油、2％（10％）SDS、5％ （体积分数）巯基乙醇和0.1％溴酚蓝。

  将蛋白质溶液与5×样品缓冲液以4：1（体积比）的比例混合（如果蛋白质溶液浓度过高，需预先脱盐处理）后，在100℃水浴中加热3～5min，使蛋白质充分变性，再于10000r／min离心5min，取上清加样。

电泳

  电泳缓冲液：pH＝8.3，0.025mol/L Tris-0.192mol/L Gly缓冲液，含0.1％SDS。

1、带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用很好的并且长期的保护SH基团，得到较窄的谱带另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，以防止银染时的纹理现象。

染色和检测

（1）考马斯亮蓝法，在SDS-PAGE后，凝胶的固定和染色时间应比常规PAGE的长1倍左右，或用多倍体积染色液染色，以排除SDS的影响。

（2）银染法，在电泳后染色之前，必须将凝胶多次漂洗，以除去SDS。

4.影响分离结果的因素

缓冲系统

  在SDS对蛋白质的助溶作用以及负电荷的包裹作用影响下，蛋白质的分离仅依据亚基的分子大小，因此缓冲系统的选择比较简单，只要利于分离并保持蛋白质的稳定以及不与SDS发生相互作用即可。常用的缓冲系统有 Tris-Gly缓冲液，其余如磷酸缓冲液（多用于连续电泳）、Tris-醋酸盐缓冲液、Tris-硼酸盐缓冲液、咪唑缓冲液以及SDS-尿素系统 （用于分离低分子量蛋白样品）。离子强度一般为0.01～0.2mol/L。

  SDS-PAGE为阳极电泳，在凝胶缓冲液中加入 0.1％SDS，在样品缓冲 液中加1％ ～2％SDS和1％～6％巯基乙醇 （或3％二硫苏糖醇），并加适量溴酚蓝，在电极缓冲液中加0.1％SDS，不连续电泳的凝胶缓冲液和样品缓冲液中还需加适量甘油。

凝胶浓度

  由于凝胶浓度决定凝胶孔径大小，而凝胶孔径影响电泳效果 （即凝胶的分子筛效应）。特别是对于SDS-PAGE，由于电泳分离只取决于SDS-蛋白质亚基胶束的大小，因此凝胶浓度的选择尤为重要。应根据样品中蛋白质的分子量范围选择合适的凝胶浓度

C=2.6% C=5%

凝胶浓度（T）/%分子量范围/kDa凝胶浓度（T）/%分子量范围/kDa

5

10

15

20

25-200

10-70

＜50

＜40

5

10

15

20

60-170

20-100

10-50

5-40

溶液配制

1 Tricine凝胶buffer

称取SDS 0.3g，Tris 36.5g，用浓盐酸调pH至8.45，定容至100mL。4℃保存，1个月内使用。

2 5M HCL

浓盐酸稀释2.4倍，室温保存，1个月内使用。

3 49.5% Arc/Bis，3%C凝胶贮液

称取48g丙烯酰胺，1.5g甲叉双丙烯酰胺，蒸馏水溶解并定容至100mL。4℃保存，1个月内使用。

4 50%甘油

取50mL甘油，加蒸馏水至100mL。室温保存，1个月内使用。

5 10％过硫酸铵溶液

称取过硫酸铵10g，蒸馏水溶解并定容至100mL，分装成1.2mL/支。-20℃保存，一年内使用。

6 正极缓冲液

称取 Tris 24g，用800mL蒸馏水溶解，1M HCL调pH至8.9，定容至1L。4℃保存，一个月内使用。

7 负极缓冲液

称取Tris 12.1g，Tricine 17.9g，SDS 1g，加水溶解，定容至1L。2-8℃保存，半个月内使用。

8 非还原型样品缓冲液（2×）

量取100mM Tris-cl 1mL、溴酚兰20mg、十二烷基硫酸钠0.4g、甘油2mL，加蒸馏水溶解并稀释至10mL，冷冻保存，一年内使用。

9 考马斯亮兰染色液

称取考马斯亮兰R-250 0.25g，加入甲醇45mL、冰醋酸10mL、蒸馏水45mL，混匀即成，室温保存，1个月内使用。

10 脱色液

取甲醇450mL、冰醋酸100mL、注射用水450mL，混匀，室温保存，3个月内使用。

实验流程

1 凝胶模具的组装与检漏

取1.0mm厚度的长短玻璃板，清洗干净后组装模具。注：短板朝里，若只跑一块胶，电泳夹的对面也必须放置一块电泳板。模具组装完成后，沿长短玻璃板之间形成的空隙加入注射用水直至水加满，平放模具。30S后，若液面不下降，则倒掉模具中的水，侧立模具并用滤纸吸干长短玻璃板间的注射用水。若模具漏水，则重新组装模具。

2Tricine SDS-PAGE 凝胶配制

（1）配制下层胶：

16.5%分离胶10mL

注射用水 0.68mL

Tricine 凝胶Buffer 3.4mL

49.5%Arc/Bis 3%C凝胶储液 3.4mL

50%甘油2.72mL

TEMED 5μl

10%AP 100μl

（2）配制上层胶：

5%浓缩胶Buffer 6mL

注射用水3.6mL

Tricine 凝胶Buffer1.24mL

49.5%Arc/Bis 3%C凝胶储液0.4mL

TEMED 6μl

10%AP 60μl

先配制下层胶，按下层胶配方依次加入相应溶液后，立即混匀（尤其是加入TEMED和10%AP时动作要快），倒入准备好的凝胶模具中，注意勿打入气泡，高度至槽高2/3-3/4。用移液器在凝胶上方轻轻加入蒸馏水，水封。20min凝胶聚合后，倒掉模具中水封用的蒸馏水，侧立模具，用滤纸吸干模具中的水，但不要接触到下层胶。再配制上层胶，向模具内倒入上层胶至满，插上1.0mm厚度的梳齿。20min凝胶聚合后，拆下模具托盘，将装置放于电泳槽中，向玻璃板之间加入负极液至漫过短板，在外侧尽量多地加入正极液，双手均匀用力拔出梳齿。注：负极液必须漫过短板，正极液加入时不要和负极液相通。

2 电泳

将样品与对照品用注射用水稀释至1mg/mL，取30uL与2×非还原型上样缓冲液30uL以1：1混合，煮沸2min，点样量20μl/孔（双复孔）。

分子量标准65℃预热5min，点样量10μl。恒流35mA，约2-3h结束。

3 染色和脱色

将电泳后的凝胶浸入装有染色液的容器中，于摇床上低速震荡染色约30min，然后更换为脱色液，于摇床上低速震荡脱色至背景全无。

数据处理

用Quantity one 分析软件分析电泳图片，计算出电泳纯度