2摩尔的三氟乙酸怎么配

(1) calculate the moles of TFA needed

(100 mL)*(2M TFA) = 200 millimoles TFA = 0.200 moles of TFA

(2) Look up or calculate the molar mass of TFA:

http://en.wikipedia.org/wiki/Trifluoroac...

Molar mass 114.02 g/mol

(3) calculate the mass of 0.200 moles of TFA

(0.200 moles)*(114.02 g/mol) = 22.80 g of TFA

Therefore, 22.80 g of TFA diluted to 100 mL with water will give a 2 M TFA solution.

如果配制1升4mol的三氟乙酸需要称取456.08g三氟乙酸加入700~800ml去离子水然后再全部转移至1000毫升的容量瓶中再用去离子水稀释至1000毫升，混匀即可得到4摩尔每升的三氟乙酸溶液。

能被硼氢化钠或氢化铝锂还原为三氟乙醛和三氟乙醇。在205℃以上稳定，酯类和酰胺类衍生物容易水解。

因此能以酸或酸酐的形式，制取糖类、氨基酸和肽类衍生物。容易在五氧化二磷作用下脱水为三氟乙酸酐。

作用与用途

用作医药、农药中间体、生化试剂、有机合成试剂。三氟乙酸用于合成含氟化合物、杀虫剂和染料。是酯化反应和缩合反应的催化剂；羟基和氨基的保护剂，用于糖和多肽的合成。还用作选矿剂。用于有机合成。

三氟乙酸是一种重要的脂肪含氟中间体，由于含有三氟甲基的特殊结构，因此使其性质不同于其他醇类，可以参与多种有机合成反应，尤其用于合成含氟的医药、农药和染料等领域，国内外需求量越来越大，已成为含氟精细化学品的重要的中间体之一。

主要用于新型农药、医药和染料等的生产，在材料、溶剂等领域也有较大的应用开发潜力。三氟乙酸主要用于合成多种含三氟甲基和杂环的除草剂，可以合成多种带有吡啶基、喹啉基的新型除草剂。

按类别的配制方法：

一、5g三氯乙酸/（5g三氯乙酸+95ml蒸馏水）=5%蒸馏水的密度取1.0g/ml，所得结果是质量浓度。

二、5g三氯乙酸，100ml定容是算物质的量浓度，单位为mol/L。

0.1%三氟乙酸水溶液的配制：称取1克三氟乙酸，溶于999克中即可得到0.1％的三氟乙酸。

正常的0.1%TFA加入后PH大约在2.5左右。三氟乙酸可由3,3,3-三氟丙烯经高锰酸钾氧化制得或由三氯乙腈与氟化氢反应，首先生成三氟乙腈，继而水解制得；也可用乙酸或乙酸酐进行电化学氟化制得。

三氟乙酸

（TFA）是一种强羧酸。pKa=-0.23。只有轻微的毒性，TFA经历微生物降解产生温室气体CHF3，受吸电子性的三氟甲基的影响而有强酸性，酸性比乙酸强十万倍。三氟乙酸在苯胺存在下分解成氟仿和二氧化碳。

能被硼氢化钠或氢化铝锂还原为三氟乙醛和三氟乙醇。在205℃以上稳定，酯类和酰胺类衍生物容易水解，因此能以酸或酸酐的形式，制取糖类、氨基酸和肽类衍生物。容易在五氧化二磷作用下脱水为三氟乙酸酐。

编辑

一种常用的过酸，由于三氟甲基的强吸电子效应，进行烯烃环氧化等反应时比过氧乙酸快得多。有强氧化性，需现配现用。可由三氟乙酸酐与过氧化氢和二氯甲烷混合反应，并在冰水浴中搅拌制得。

制备方法

编辑

在一个300ml三颈瓶上安装有搅拌器、滴液漏斗和带氯化钙干燥管的冷凝器，瓶中盛100ml二氯甲烷。先不搅拌，用10ml刻度吸管或量筒，每次约加1ml共加入5.4ml（0.20mol）90%过氧化氢，它与溶剂分层而不互溶。瓶用冰浴冷却，开始搅拌。在此冷溶液中至少在20min内滴加34.0ml（0.24mol）三氟乙酸酐。加完后，撤去冰浴，在室温再搅拌30min。

2、了解苯碘化的特殊方法。

实验原理：O2N-C6H5 + TI(OOCCF3)3 = p-O2N-C6H4-TI(OOCCF3)2 + CF3COOH

p-O2N-C6H4-TI(OOCCF3)2 + 2KI = p-O2N-C6H4-I + TII + 2KOOCCF3

实验仪器：烧杯（250ml），分液漏斗

主要药品：三氧化二铊，三氟乙酸，硝基苯，碘化钾，乙醚

实验步骤：三氟乙酸配制成20%（质量分数）左右的溶液，将比理论量稍小的三氧化二铊加入溶液中 ，微热使之全部溶解。之后将硝基苯（比理论量稍小） 逐滴加入上述溶液，并剧烈搅拌，加完后微热30min使反应完全。将配置好的碘化钾饱和溶液，逐滴加入上述溶液中，并不断搅拌，微热1小时。将反应液置于分液漏斗，分出下层油状液体，水层用乙醚萃取两次，合并乙醚层与下层油状物，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次， 用无水硫酸镁干燥，将液体滤入蒸馏烧瓶，先常压蒸出乙醚，再减压蒸馏，蒸出对硝基碘苯。

实验中注意

1、含铊的化合物有毒，使用时要小心。

2、三氟乙酸有毒。

检查纯度最常用的判断方法：

（1）用gc、hpLc测定组成多糖的单糖的摩尔比是否恒定。

用不同的柱型测定结果更为可靠。

（2）电泳只出现一条带。

如可用聚丙烯酰胺凝胶电泳、乙酸纤维素薄膜电泳及玻璃纤维纸电泳。对于中性多糖可采用高压电泳，以硼酸盐为缓冲液，可增大其迁移速度。

（3）凝胶柱层析图呈现对称的单峰。若有“拖尾”现象，说明其均一性不够好。阴离子交换层析纯化

用DeAe一纤维素52(2.6x100cm)柱层析,0.lmol/Lnacl洗脱,流速6ml/h,按2ml一管分部收集,苯酚一硫酸法逐管检测,绘制收集体积与糖含量之间的关系曲线。看是否有单一对称峰。

按照Ye等报道,采用DeAe一52一纤维素交换柱层析法(2.6x30cm)对鲍氏层孔菌菌丝体粗多糖进行初步分离。DeAe一纤维素凝胶预处理:称取DeAe一52一纤维素凝胶干粉,加入约10倍体积质量比(ml/g)的0.5mol/Lna0h溶液浸泡30分钟,倒出上清液,用大量去离子水反复浸洗至ph值近中性再用相同体积的0.5mol/LhcI溶液浸泡30分钟,倒出上清液,用大量去离子水反复浸洗至ph值近中性最后用相同体积的0.5mol/lnaoh溶液再浸泡30分钟,用大量去离子水反复浸洗至ph值中性。处理完毕后,进行湿法装柱,用去离子水0.5mol/Lnacl溶液,去离子水依次分别平衡(流速1.0ml/min)2一3个柱体积备用.

糖样100mg溶于5ml的去离子水中,离心除去不溶物,上样于DeAe一52一纤维素阴离子

-1层析柱(2.6x30cm,cl型),分别采用去离子水0.1和0.3mol/LnacI溶液进行分段梯度洗脱,

流速1.0ml/min,自动收集器分部收集(10ml/管),每梯度20管。用硫酸一苯酚法跟踪检测各管多糖含量(490nm处吸收值),以收集的管数为横坐标。吸光值(490nm)为纵坐标绘制DeAe一52一纤维素色谱柱洗脱曲线。依据洗脱峰型,合并相同组分,50℃旋转蒸发浓缩,对去离子水透析48h以去除nacI及小分子杂质,最后将透析内液冷冻干燥,得初步纯化产品。

初步纯化多糖得率计算公式:

多糖得率(%)=纯化多糖质量/粗多糖质量x100%

葡聚糖凝胶层析纯化

采用sephadexg-100凝胶层析法对DeAe-52一纤维素初步纯化的不同组分的多糖样品进一步纯化。葡聚糖凝胶(sephadexg一100)的预处理:称取sephadexg一100凝胶干粉,加入30倍体积质量比(ml/g)的去离子水,沸水浴5小时使其溶胀。冷却后用去离子水反复浸洗,减压脱气后进行湿法装柱,用0.1mna2so4溶液平衡(流速0.25ml/min)2一3个柱体积备用。

分别称取经DeAe一纤维素一52初步纯化的各多糖组分样品20mg,溶于2ml0.1mna2so4溶液中,上样于sephadexg一100层析柱(2.6x60cm)用0.1mna2so4溶液溶液洗脱,流速0.25ml/min,分步收集(5ml/管)。

用硫酸一苯酚法跟踪检测各管多糖含量(490nm处吸收值),以收集的管数为横坐标。吸光值(490nm)为纵坐标绘制sephadexg一100色谱柱洗脱曲线。依据洗脱峰型,合并相同组分,50℃旋转蒸发浓缩,对去离子水透析48h以去除na2so4及小分子杂质,最后将透析内液冷冻干燥,得不同纯化产品。

纯化多糖得率计算公式:

纯化多糖得率(%)=纯化多糖质量/粗多糖质量x100%

（鲍氏层孔菌菌丝体粗多糖）

（4）纸层析法呈单一集中斑点。

取0.5%的多糖样品溶液50ul,点样于新华中速滤纸(3cmx20cm)距端点1cm处的中部,以正丁醇:浓氨水:水(4o:50:5)为展开剂,饱和2小时以上,在室温下展开6h,取出吹干,用0.5%甲苯胺蓝液染色,立即用95%乙醇漂洗至背景褪色,看是否只有一个清晰的斑点。

（5）琼脂糖(Agarose)凝胶电泳法

在琼脂糖板(厚度为0.2cm)上点样3一5ul采用浓度为0.075mol/L,ph8.6的巴比妥缓冲液,电泳1-1.5h,电压为64一80V,甲苯胺蓝(浓度为1%)染色,醋酸乙醇混合溶液(醋酸:乙醇:水=0.1:5:5)脱色。多糖纯品经电泳展开后,看是否呈现单一斑点,斑点是否清晰。

（6）紫外分光光度法

将多糖pwZ加0.9%nacI溶液溶解,配成浓度为1mg/ml的溶液,采用uV一16oA紫外可见光谱仪扫描(200nm一30onm)观察260nm、280nm处是否有吸收峰。

多糖的分子量测定：

过去用超速离心沉降法、光散射法、渗透压法、粘度法(:多糖质谱鉴定)等，这些方法操作复杂且误差较大，现已少用。现在较常用的方法有凝胶过滤法和高效凝胶液相色谱法，这两种方法须先用已知分子量的标准多糖对照测定样品的分子量。

一般来说，多糖结构分析包括以下几点：

（1）单糖组成分析：研究确定单糖的种类及摩尔比；

完全酸水解后用高效液相色谱方法(hpLc)或气相色谱方法测定。

（2）糖苷键类型：研究确定糖苷键及支链点连接位置；

甲基化分析方法

高碘酸氧化法与smith降解法

（3）糖环大小：研究确定糖苷键为呋喃糖或吡喃糖；

红外光谱

（4）异头碳构型：研究确定糖苷残基的a-或p-构型；

2DnmR.(TwodimensionalnuclearmagneticResonance)光谱分析方法测

（5）确定单糖残基和重复单元的序列

甲基化分析方法与磁共振光谱分析方法结合分析，一般会参考多糖的单糖组成及摩尔比信息以利于解析多糖结构。

高碘酸氧化法

薄层层析(TLc)——定性，

气相色谱法

（6）取代基团位点：研究0h-修饰基团的种类和取代位点，如0-磷酸化，乙丑基取代，0-

硫酷化等；

比色分析方法

（7）多糖分子量分布的研究。

紫外光谱

定性与定量方法

薄层层析：残基定性

气相色谱：残基定量

气质联用：残基定量

高效阴离子色谱法：残基定量

鉴定结构常用物理化学方法：

高效液相色谱:确定单糖组分和相对分子量

红外光谱分析:测定多糖的官能团，不仅可以检测酮糖、酵糖的耻喃糖环或呋喃糖环的构象和糖苷键的构型

核磁共振:α-构型与β-构型残基的比例；判断异头碳构型；推断主链和支链连接键型鉴定结构复合方法：

甲基化分析:推断出多糖样品中糖基的连接方式及各种连接键型的比例

高碘酸氧化法与smith降解法:判断糖苷键的位置、直链多糖的聚合度及支链多糖的分支数目

糖睛乙酸酷衍生物的气相色谱法:单糖组成和摩尔比

各种多糖化学结构鉴定方法的具体实施方案

1、酸水解

（1）完全酸水解

-1称取20mg样品,加入2mL2mol·L的h2so4于安培管中沸水浴水解8h,水解液用

baco3中和至ph=7,离心,取上清夜置冰箱冷藏备测。（阿魏侧耳子实体多糖分离纯化及其化学结构的初步研究）

（2）部分酸水解

称取糖样70mg，80℃条件下，0.05m三氟乙酸水解2h。降至室温后，离心（4000r/min，10min），将沉淀干燥，留做gc分析。上清用无水乙醇除酸至中性(ph为6～7)，蒸馏水透析48h：将袋外透析液浓缩，真空干燥，留做gc分析；袋内液浓缩至5ml左右，加10倍体积无水乙醇，醇沉过夜，离心(4000r/min，10min)，沉淀常规干燥，作gc分析；上清浓缩，真空干燥，留做gc分析。

2、高效液相色谱

确定样品的单糖组成

色谱条件为:

色谱柱为shodexKs804sugar(300mm×7.8mm)

柱温40度

流动相为水

-1流速0.8mL·min

检测用410RⅠ示差检测器，数据处理用810gpc软件进行。

同时用鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖、木糖、果糖、葡萄糖、岩藻糖8种单糖进

行对照,根据峰值确定样品的单糖组成。

分子量的测定以标准分子量的葡聚糖pulluan作分子量测定标准。让其通过高压液相色谱柱,条件同上,先以分子量对数与对应的保留时间作标准曲线,从标准葡聚糖pulluan的工作曲线上可以求得该成分分子量。

例如：（阿魏侧耳子实体多糖分离纯化及其化学结构的初步研究）

将水解后的多糖样品pw2进行hpLc分析,结果如表所示:阿魏侧耳子实体多糖pw2经过酸水解后,得到2种单糖:葡萄糖和半乳糖,摩尔比例1.77∶1。

例如：

4经hpLc测定后对照标准曲线得多糖pw2的分子量为3.18×10。（阿魏侧耳子实体多糖

分离纯化及其化学结构的初步研究）

4、甲基化分析

(1)基本原理

先将多糖中各种单糖残基中的游离羟基全部甲基化，然后将多糖中的糖苷键进行完全酸水解，水解后得到的化合物，其羟基所在的位置，即为原来单糖残基的连接点。同时根据不同甲基化单糖的比例，可以推测出此种连接键型在多糖重复结构中所占的比例。

用此种方法得到的羟基及nabh4还原醛基后产生的羟基，经乙酰化可得到甲基化的糖醇乙酸酯(此产物易挥发，可进行gc分析)，再经gc与gc-ms分析，通过气相色谱的出峰顺序和对质谱谱图的主要离子碎片的分析便可以较准确地确定糖的连接键型。

反应通式如下

:

（2)甲基化反应

取充分干燥的多糖样品10mg，溶解在2.0ml的二甲基亚矾（Dmso)中。在n2保护下快速加入干燥的naoh粉50mg，用n2排出空气，加盖密封，室温反应1.0h并间歇振荡。在n2保护下缓慢滴加碘甲烷1.0ml，用n2排出空气，加盖密封，室温继续反应1.0h并间歇振荡，反应完成后加0.5ml水终止反应。反应液先用自来水流水透析48h，再用蒸馏水透析24h，透析液冷冻干燥得第一次甲基化样品。第一次甲基化样品继续甲基化，反应步骤同上，得第二次甲基化样品。如此重复甲基化三次。甲基化后的样品用红外光谱检测，3700

cm-1—3100cm-1，附近无羟基的特征吸收峰，表明甲基化反应完全。

（3)甲基化样品的衍生化

上述完全甲基化多糖样品加入2mol/1的三氟乙酸(TFA)3.0ml,120℃密闭水解2.0h。冷却后50℃减压蒸发干，加2.0ml甲醇再蒸发干，重复三次，最后蒸发干得完全甲基化多糖的水解产物。加蒸馏水2.0ml使其溶解，再加硼氢化钠25mg，振荡后室温还原反应2.0h。反应完后滴加0.1mol/1醋酸分解过量的硼氢化钠并调ph值至5.5~7.0弱酸性。反应液50℃减压蒸发蒸干，加2.0ml甲醇再蒸干，重复三次，最后蒸发干。

上述蒸发干样品加入1.0ml醋酸酐和1.0ml吡啶，封管后在沸水浴中反应1.0h。反应液50℃减压蒸发干，加2.0ml甲醇再蒸发干，重复三次，最后蒸发干。加入丙酮1.0ml，用0.45ul尼龙微孔滤膜过滤，取样进行gc/ms分析。

(4)衍生化样品的gc/ms分析

多糖样品经甲基化、水解、还原、乙酰化后得到甲基化糖醇乙酸酯，进行gc/ms联机分析，根据文献的相对保留时间和不同单糖的主要离子碎片(m/e），推断出多糖样品中糖基的连接方式及各种连接键型的比例。

本实验采用的条件为:gc(Variancp3800型)和ms（Variansatum2200型)气相一质谱联用仪，Db-5ms石英毛细管柱(30mx0.25mmx0.25um)程序升温，初温80℃，保持1min，以8℃/min升至210℃，保持1min，再以20℃/min升至260℃,保持1min氦气作载气，进样口温度250℃，分流比1:50，柱流速1.0ml/min电子电离源(eI源)70eV，倍增器电压350V，灯丝电流250uA，接口温度260℃,离子源温度180℃，质荷比(m/z)扫描范围30~450，扫描速率2.5scan/sec。（胞式层孔菌菌丝体多糖分离纯化、结构鉴定及其生物活性研究）

流程图如下：（mAep-2a-2b是安络小皮伞菌丝体多糖的某个过程中第某个样品）

篇二：1多糖含量检测

亿信检测推出单糖组成方案

简介：gc-ms（气相质谱联用技术测定单糖组成）

1多糖含量检测

方法：苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生