99%的巯基乙醇的浓度

第一种方法是测量260/280的比例，判断是否有蛋白质的污染。在260nm和280nm处测定DNA溶液的光吸收，A260与A280之比应在1.75-1.80之间。低于此值表明制备物中残留蛋白质成分较高或含有酚，高于此值表明有RNA的残留。

第二种方法是凝胶电泳分析，看有无断裂降解。

影响DNA提取质量的因素：

如果实验开始植物样品不经液氮处理，则提取液中的CTAB浓度需要提高到4%。

在大多数情况下，使用0.1%巯基乙醇，并不能完全抑制叶片中的氧化作用。但这种氧化作用不会影响限制性内切酶的活性。如果使用的巯基乙醇浓度高于0.1%，则会大大降低DNA提取的得率。

扩展资料：

DNA的提取方法：

一、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb

二、甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

三、玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

四、异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

五、表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

六、加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

七、碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

参考资料来源：百度百科-DNA提取

生物分离工程 细胞破碎 包含体的处理一般就是包含体的洗涤、溶解、复性。有些包含体也可以在变性状态下进行色谱层析纯化。

包含体的洗涤一般就是通过表面活性剂如Triton X100，或者低浓度的变性剂如2M 尿素来完成，包含体的溶解主要是高浓度变性剂，比如8M 尿素，6M 盐酸胍加上一些还原剂比如DTT或者巯基乙醇就可以了。包含体的复性比较复杂，主要是通过氧化还原电对促进其重新折叠成天然结构。

巯基乙醇提取rna作用 Tris饱和酚一般PH大于7.8，用于DNA的提取。其中，酚是强的蛋白变性剂，可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出。 而Tris的主要作用是防治止酚类氧化，若酚类氧化，则会形成醌（两个苯环），醌含有强自由基，会破坏核酸结构。 同时，由于PH值大于7，在碱性环境中DNA处于水相，RNA处于有机相。从而分离上清，即可得到DNA。 Tris饱和酚的配置： 1、冰箱取出重蒸酚，室温放置－－－68度水浴溶化，切勿立即放入68度的水浴中，以防玻璃炸裂 2、加8－羟基喹啉至0.1％和β－巯基乙醇至0.2％，（原液14. 4MOL/ML），混匀，溶液呈现黄色，倒入分液漏斗中（也可在烧杯中进行） 3、加入等溶剂的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反复混匀后，静至分层；放出下层黄色酚液，弃上层 4、加固体Tris约1g/100ml酚，摇匀，去水相 5、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)平衡数次，至PH为8.0 6、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)于棕色瓶中4度保存 7、如黄色消失或呈粉红色（说明酚已经被氧化），则不能使用 巯基乙醇提取rna作用机理 RNasin是一类从大鼠肝或人胎盘中提取出来的酸性糖蛋白质，鼠肝RNasin分子量为40KD；来源于人胎盘的RNasin分子量为51KD，等电点为4.7，最适pH为7～8。RNasin能与RNase非共价结合（Ki=3×1010）从而抑制了它们的活力，RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂。1mmol/L的二巯基乙醇对于RNasin的发挥抑制RNase的最大活性非常重要。 RNasin最好不要与某些蛋白质变性剂（如7mol/L的尿素）同时使用，因为尿素能使RNase-RNasin复合物分离，并释放出活性的RNase。 rna提取中乙醇的作用 1. 按照Invitrogen公司的Tizro说明书，在提取RNA过程中进行到加入75%乙醇后，可使RNA沉淀在4度保存一个月，在-20度保存一年。 2. 一般这种方法用的比较少，因为每次提RNA都是一气下来，中间没有停顿的，除非一次提很多，上午时间不够用，可进行到加入乙醇未知，然后放到-20度冰箱，下午可继续进行。 3. 一般保存方法都是RNA溶解到无RNase的水中，然后-80度冰箱保存。 4. 反复冻融对RNA的长时间保存肯定是有影响的，可分成小量保存，尽量减少冻融。 5. 现在有些试剂公司有相关的产品，可用于保存RNA，不过可能会有植物或动物，细胞或组织之分。 二巯基丙醇怎么提取 二巯基丙醇古代叫砒霜解药，二巯丙醇为无色或几乎无色、易流动的澄明液体。有类似葱蒜的气味。在甲醇、乙醇或苯甲酸苄酯中极易溶解，溶于水，在脂肪油中不溶，可防止砷、汞、铋、金、锑等金属对身体组织的中毒作用。名称介绍 中文名称：2,3-二巯基丙醇；2,3-二氢硫基-1-丙醇；2,3-二巯基-1-丙醇；二巯基丙醇；3-羟基-1,2-丙二硫醇；巴尔；巴尔双硫代甘油；英国抗路易斯气剂 dna提取中巯基还原剂 DTT作用如下： 1、DTT的作用之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。 这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。 2、DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。 但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M盐酸胍、8M尿素或1%SDS）。 反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。 DTT即DL-Dithiothreitol，中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2，分子量为154.25，纯度>99%。常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。 而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近，但DTT价格略高一些。 RNA提取中巯基乙醇如何除去 是 TRIzol有毒性，trizol中含有苯酚，苯酚是刺激性气味。对呼吸道有伤害，闻久了会有晕的感觉。 1、TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。 2、苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。 巯基乙醇作用Rna提取 Trizol就是酚氯仿提取法的常用试剂 Trizol中有酚，异硫氰酸胍和B-巯基乙醇。他们的作用都是使蛋白变性，使蛋白质与核酸解聚。加入氯仿，用来分相，实际上是加速有机相和水相的分层，当溶液pH在酸性的时候，DNA分子就会沉淀在酚与溶液的界面，就是白色层，只有RNA分子留在水相，但溶液pH不在酸性范围内，会使DNA溶解在水相，所以使用时按照说明书要求根据细胞数或培养器皿底面积适量加入Trizol。最后异丙醇沉淀，将水相中RNA提取出来。 提rna加巯基乙醇 材料、试剂及器具 1、 材料 总rna提取物。 2、 试剂 (1)0.1%DEPC水：200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。 (2)10x电泳缓冲液。 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) 0.4mol/L(pH 7.0) NaAc 0.1mol/L 乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L (3)50mL变性琼脂糖凝胶(1%) (4)10x电泳缓冲液 5 mL 琼脂糖 0.5 g 0.1%DEPC水 36.5 mL 加热溶解，稍冷却，加入8.5 mL 37%甲醛。 (5)上样缓冲液：50%，1mmmol/LEDTA，0.4% 溴酚兰，0.4%二甲苯蓝。 (6)甲酰胺(去离子)。

主要用途： 用于合成树脂及用作杀霉菌剂、杀虫剂、增塑剂、水溶性还原剂等。

其它理化性质： 1.4996

健康危害： 吸入 、摄入或经皮肤吸收后会中毒。中毒表现有紫绀、呕吐、震颤、头痛、惊厥、昏迷，甚至死亡。对眼、皮肤有强烈刺激性。可引起角膜混浊。

环境危害： 对环境有危害，对水体可造成污染。

燃爆危险： 本品可燃，有毒。

危险特性： 遇高热、明火或与氧化剂接触, 有引起燃烧的危险。受高热分解放出有毒的气体。加入保护剂 防止某些生物活性物质的活性基团及酶的活性中心受到破坏。如最常见的巯基，是许多活性物质和酶催化的活性基团，极易被氧化，故提取时常加入一些还原剂。一些易受重金属离子抑制生理活性的物质，加入某些金属螯合剂，把有害金属离子螯和掉，而保持被提取物的活性。 [螯合剂和巯基试剂] 巯基试剂在生化反应中有两个用途，一是防止蛋白质或酶等分子中的SH-基氧化成S-S，二是某些酶反应中维持体系的还原环境。经常应用的巯基试剂有二硫丁醇类化合物（如二硫苏糖醇DTT、二硫赤酰糖醇DTE）和2-巯基乙醇，谷胱甘肽也经常应用。一般来说二硫丁醇类是常选用的巯基试剂，不仅是因为挥发性低，难闻的气味较少，而且氧化电位低，比2-巯基乙醇浓度低很多的情况下，可以使其他二硫化合物完全还原。螯合剂用于控制反应中金属离子浓度或去除金属离子，常用的螯合剂有EDTA（乙二胺四乙酸）、EGTA、1,10-二氮杂菲、柠檬酸和磷酸等。

抗氧化。用PBS配成100X的浓度，4度避光保存，用2周。

瓶子上没有特殊标注，应该就是纯的吧？

可以的。

DTT和2-ME（2-mercaptoethanol的简称，下同）都属于巯基试剂。

也就是说DTT和2-ME的作用是一样的：可以防止蛋白质或酶等分子中的巯基氧化成二硫键，维持体系的还原性环境。

β-巯基乙醇和DTT都是还原剂，防止蛋白质被氧化，β-巯基乙醇常用浓度为5-20MMOL/L，DTT为0.5-1MMOL/L。因为β-巯基乙醇加入缓冲液后24小时易被氧化，其后加速蛋白质的失活，而DTT氧化后形成稳定的分子内二硫健，并不危及蛋白的巯基，所以在蛋白制备中常用β-巯基乙醇，而长期储存用DTT。还有其上提到的试剂浓度均指终浓度。

至于使用浓度，DTT和2-ME的工作浓度一般为1-5mM，如果2-ME的浓度是1mM，由于DTT的氧化能力强于2-ME，DTT的浓度用0.5-1mM就可以了。

1． 称取2～5g 新鲜菠菜幼嫩组织或小麦黄花苗等植物材料，用自来水、蒸馏水先后冲洗叶面，用滤纸吸干水分备用。叶片称重后剪成1cm 长，置研钵中，经液氮冷冻后研磨成粉末。待液氮蒸发完后，加入15mL 预热（60～65℃）的CTAB 提取缓冲液，转入一磨口锥形瓶中，置于65℃水浴保温，0.5~1h，不时地轻轻摇动混匀。

2．加等体积的氯仿/异戊醇(24:1)，盖上瓶塞，温和摇动，使成乳状液。

3．将锥形瓶中的液体倒入离心管中，在室温下4 000r/min 离心5min，静置，离心管中出现3 层，小心地吸取含有核酸的上层清液于量筒中，弃去中间层的细胞碎片和变性蛋白以及下层的氯仿。

4．根据需要，上清液可用氯仿/异戊醇反复提取多次。

5．收集上层清液，并将其倒入小烧杯。沿烧杯壁慢慢加入1～2 倍体积预冷的95％乙醇，边加边用细玻棒沿同一方向搅动，可看到纤维状的沉淀（主要为DNA）迅速缠绕在玻棒上。小心取下这些纤维状沉淀，加1～2 mL 70%乙醇冲洗沉淀，轻摇几分钟，除去乙醇，即为DNA 粗制品。

6．上述DNA 粗制品含有一定量的RNA 和其它杂质。若要制取较纯的DNA，可将粗制品溶于TE 缓冲液中，加入10mg/mL 的RNase 溶液，使其终浓度达50μg/mL，混合物于37℃水浴中保温30min 除去RNA。重复步骤2～5 的操作，可制得较纯的DNA 制品。

7．将DNA 制品溶于250μL 的TE 缓冲液中，完全溶解DNA 样品。

8．加入1/10 倍体积的3mol/L NaAc（pH6.8）和2 倍体积的95％乙醇，沉淀DNA，重复步骤5。最后，将DNA 溶于250μL 的TE 缓冲液中。

9．在751 型分光光度计上测定该溶液在260nm 紫外光波长下的光密度值。代入下式计算DNA 的含量。

结果计算

式中OD260nm 为260nm 处的光密度；L 为比色杯光径（cm）；0.020 为1μg/mL DNA 钠盐的光密度。

DNA 的紫外吸收高峰为260nm，吸收低峰为230nm，而蛋白质的紫外吸收高峰为280nm。上述DNA 溶液适当稀释后，在751 分光光度计上测定其OD260nm、OD230nm 和OD280nm。如OD260nm/ OD230nm≥2OD260nm/ OD280nm≥1.8，表示RNA 已经除净，蛋白含量不超过0.3％。

附 注

如果植物样品不经液氮处理，提取液中的CTAB 浓度需要提高到4%（W/V）。在许多情况下，使用0.1%（V/V）巯基乙醇，并不能完全抑制叶片中的氧化作用，但是，这种氧化作用不会影响限制性内切酶的活性。如果使用的巯基乙醇浓度高于0.1%（V/V），则会大大降低DNA 的得率。

1．制备的DNA 在：（1）含有螯和剂如EDTA 中较稳定，因为EDTA 能螯和Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase；（2）在pH5～9 之间较稳定，否则过酸过碱会破坏DNA 的结构；

（3）有一定离子强度（强度越高, DNA 越稳定）的溶液中较稳定。

（TE 满足以上要求, 但如需对所得DNA 进行酶切, EDTA 浓度不可过高, 一般用0.1×TE 或0.2×TE）。

2．为了保证植物DNA 的完整性：（1）整个提取过程应在较低温度下进行（一般利用液氮或冰浴）；这样可防止和抑制内源DNase 对DNA 的降解；（2）当DNA 处于溶解状态时，要尽量减弱溶液的涡旋，动作要轻柔；在进行DNA 溶液转移时用大口（或剪口）吸管，尽量减少对溶液中DNA 的机械剪切破坏

这个是用来染胞内，尤其是核内抗原要用到的。细胞先固定，然后透膜。所谓透膜，就是使用去垢剂破坏膜的完整结构，让抗体可以自由进入细胞膜内部。具体的浓度和作用时间需要根据不同的细胞还有实验条件来优化。建议你从文献提供的数据出发，先做一遍，然后根据得到的结果看看效果是否满意，再做调整

考马斯亮蓝染色法测定法不会受绝大部分样品中的化学物质的影响.巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5 mM.但受略高浓度的表面活性剂影响.若SDS高于0.1%,TritonX-100高于0.1%,Tween20,60,80高于0.06%,可取少量样品加水稀释到适当浓度

对于第一个问题，我不知道你是用多大的体系。我们提植物基因组都是装在1.5的EP管里的，酚氯仿都是分别加到管里，从来不做预混，因此也不会出现你想多加异戊醇的问题了。事实上，我们都不用异戊醇这个消泡剂。

至于巯基乙醇，我们都是在研磨好，加酚氯仿之前的细胞裂解液里加0.5%的巯基乙醇。酚如果觉得氧化了就换一瓶吧。

离心转速一般在10000-13000rpm，都没问题，DNA很坚强，浓度又不高，没关系的。

其实Tris饱和酚的pH值本身就在7-8，所以pH应该不是问题。另外酚主要是作用与蛋白的，既然体系可以用酚就说明对DNA没什么大影响。原来在找不到Tris饱和酚的时候我还用过水饱和酚，pH在4左右，也提的不错。pH只是影响了DNA的溶解度而已。异戊醇这个东西真的是可加可不加。一般都是酚氯仿等体积混合抽一遍，再氯仿抽一遍。

实际上我有点困惑，酚氯仿异戊醇不应该分层啊！