SDS法提取DNA是黄色是什么原因?
跑个电泳看看DNA质量吧,是不是用乙醇沉淀时沉淀的颜色就是黄色的,很有可能是色素,用酚氯仿多抽提几次试试看,实在不行,借个硅胶柱,一般的提取试剂盒里都有,调整好pH和盐浓度,过下柱子,色素一般会吸附到柱子上,再洗脱就行了。
买个试剂盒提方便又快捷,现在也没多少钱。
沉淀DNA 样品能达到浓缩的目的,而且沉淀也会去除阻止许多酶反应的残留氯仿。
一、步骤
于最多体积450 μl 的DNA 样品中,加入1/10体积pH4.2的3 mol/L NaAc, 快速颠倒以混匀。
加入2倍体积95%乙醇或无水乙醇,充分混匀。
样品踩于冷环境中沉淀:-20℃ 过夜,或-70℃30 min, 或干冰中5 min 。
使用干冰进行乙醇沉淀
用锤子将干冰砸成粉末,再将管子插入粉末;或将干冰砸成小块,置于抗冻容器中,加入95% 乙醇捣成稀泥,插入管子。 注意:乙醇会洗去标签。
图一 离心之后离心管中分为两层
1:上县为水相,包含着DNA ,下层为有机相,包含蛋白质。通常存水相与有机相之间有一个中间层,可见一个白色带, 这是一些被抽提出来的蛋白质。在你吸取水相的时候,不要碰那个白色带。
高速离心样品15 – 30 min, 转速至少12000g, 如果没有冷冻离心机,将离心机置于4℃ 。
除去上清,上清可以倒入下水道中。
离心管倒置于纸巾上吸干。
预冷的70%乙醇洗涤沉淀。
按步骤6干燥或使用真空浓缩机。
用pH8.0 的TE (10mmol/L Tris· HCI, 0.1 mmol/L EDTA) 重悬DNA 。如果沉淀不能完全溶解,加入更多的TE, 将样品保存于4℃。
三、温馨提示
在处理大分子DNA (大于30 kb) 时要特别小心,由于DNA 样品不能抹荡,只能颠倒或转动混匀。去除表面的氯仿,代替用乙醇沉淀DNA 样品的是, DNA 溶液需要对大体积的冷TNE 溶液进行透析或用水饱和的乙醚抽提。
如果可以看到很明显的一片就把它轻轻的弹起来,浸泡几分钟再离心,反复2-3次即可。如果你提取的沉淀颜色很深可以早70%的乙醇中浸泡过夜(4度),第二天再漂洗1-2次。
如果提取的沉淀很小肉眼看不清楚就只需要加70%乙醇浸泡后离心,千万别再弹起来,因为再次离心时贴壁不会很牢固,容易在弃上清的时候一起倒出去。