如何判断样品灼烧完全如何判断加1:1盐酸提取样品时钙镁铁已提取完全提取完全
试样用盐酸溶液提取其中钙镁铁,用络合滴定法测定滤液中钙镁铁的含量。
称取干燥式样1.0g于100mL锥形瓶中,加“1+11”的盐酸25mL,缓和煮沸5分钟,稍冷过滤,用30mL热水分次洗涤滤渣,滤液和洗液合并,滴加10%氨水使溶液程微碱性,过滤于250mL三角烧瓶中,用热水洗涤沉淀,滤液洗液合并,加水使使全量约为100mL,加2mL硫化钠溶液1mL乙二胺四乙酸镁溶液,氨-氯化铵缓冲溶液指示液,用0.02mL乙二胺四乙酸二钠标准溶液滴定至溶液由蓝紫色转变为纯蓝色。可提取出来。
粗盐中存在泥沙等不溶性杂质和钙离子、镁离子、硫酸根离子等可溶性杂质,所以需要加一些化学试剂除去杂质进行提纯。具体除杂质步骤和各试剂作用如下:
1、加水溶解粗盐,形成溶液环境;
2、加过量BaCl2溶液,其作用是除去硫酸根离子;
3、加过量NaOH溶液,其作用是除去镁离子;
4、加过量Na2CO3溶液,其作用是除去钡离子和钙离子;
5、加过量HCl溶液,其作用是与氢氧根、碳酸根反应生成水和CO2,从而除去溶液中剩余的氢氧根离子和碳酸根离子;
6、过滤出沉淀,滤液加热,除去溶液中的HCl;
7、蒸发结晶,得到精盐。
一会儿还要蒸发的,一蒸发盐酸就挥发了,而且盐酸也不和食盐反应
真要有影响的话,只可能是这样了
食盐中有一些可溶性的杂质,如碳酸钾,可以和盐酸反应,产生其他物质,从而影响纯度
通常会使用过量的NaOH除去样品中的Mg^2+、使用过量的Na2CO3除去样品中的Ca^2+和Ba^2+,
用盐酸二次调节滤液的酸度时,把ph值调至4左右,就是为了除去过量的NaOH和过量的Na2CO3,
用盐酸除去过量的NaOH时,把ph值调至7即可,
用盐酸除去过量的Na2CO3时,反应为:
Na2CO3+2HCl=2NaCl+H2CO3 H2CO3=H2O+CO2(气体符号)
饱和碳酸溶液的PH约为5.6,把ph值调至4左右就可使碳酸分解完全,促使上述两个反应的发生
过量的盐酸在蒸发过程中可以除去
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加入过量BaCl2(去除硫酸根离子)
加入过量NaOH(去除镁离子)
加入过量Na2CO3(去除钙离子)
过滤后往滤液中加入过量HCl除去NaOH,Na2CO3
氢氧化钠+盐酸->氯化钠+水;
(工业用)可以加入纯碱、小苏打提取
将盐酸全部反应完毕即可
② 由于氯离子对金属离子形成的离子键相对较强,如果是提取锌只需按照原子活动顺序排列,(钠、钾、钙、镁、铝、锰、“锌”、镉、铁、……)用镁、铝、锰,根据置换反应原理提取。
原理:
1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤:
1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重。
5
min
2.溶解DNA:
3.析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢
4.过滤:取黏稠物
5.再溶解:顺时针方向搅拌,较慢。3
min
6.过滤:取滤液。
7.提取出含杂质较少的DNA,逆时针方向搅拌,稍慢。5
min
8.DNA的鉴定:沸水浴5min
大学
DNA提取分为三个基本步骤,每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。
利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂。
加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提,以除掉细胞内的蛋白,如与DNA结合的组蛋白。
将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因为DNA在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分。
另外,目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。
2.细胞的破碎
细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种①机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法②化学试剂法:用SDS处理细胞③酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。
3.DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
A.
利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M
氯
纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的
氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA
钠盐沉淀出来.
B.
也可用0.15
MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
C.以稀盐酸溶液提取DNA
时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA
的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA
的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.
(2).阴离子去污剂法
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA
.由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA
(3).苯酚抽提法:苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA
联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA
的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA
。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态
(4).水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%
,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.