有机溶剂到底能否用移液器移取

磺胺二甲嘧啶(SM )是畜牧生产中应用最广泛

的磺胺类药物之一。广泛用于畜禽疾病的治疗和预

防，食用含磺胺二甲嘧啶的动物组织，能导致机体发

生过敏反应，破坏机体正常菌群生态平衡，引起致病

菌产生耐药性|1]。我国、欧盟和FAO／wH0规定，

动物组织中SM 最高残留限量为100 ug／kg。畜牧

生产中应用的磺胺类药物进入外界环境，可能随污

水或地表径流，渗漏进入地下水或污染附近的池塘，

对水环境中的非靶生物可能产生毒性或在其体内富

集，造成环境污染[2]。由此引起的该药物在水产品

中的残留也受到关注。

在动物体内，磺胺二甲嘧啶主要经乙酰化酶代

谢形成N 一乙酰化磺胺二甲嘧啶(N 一ACE—

SM )L3州]。在人体内，N -ACE-SM 可逆转化成为

药物原形，从而具有药理活性。因而，N 一ACE—SM

的残留测定也是有必要的。日本规定磺胺二甲嘧啶

的残留标识物为磺胺二甲嘧啶原形和N -ACE—

SMz L6J。本文建立了磺胺二甲嘧啶原形和乙酰化磺

胺二甲嘧啶残留的高效液相色谱测定法。

l 材料与方法

1．1 试验材料

1．1．1 标准品 磺胺二甲嘧啶，白色结晶，纯度>99 ，美国Sigma公司；N 一乙酰化磺胺二甲嘧啶，

白色结晶，由本实验室自行合成。

1．1．2 主要试剂 乙腈，色谱纯，Fisher公司；冰醋

酸：分析纯，北京化学试剂公司；正己烷，无水硫酸钠

和正丙醇：均为分析纯，北京化工厂。

1．1．3 主要仪器设备 高效液相色谱仪：SCL-

10AVP系统控制仪，DGU-12A 脱气装置SPDM10AVP

二极管阵列检测器，LC一10ATVP泵，

Class—VP工作站(日本Shimadzu公司)。调速多用

振荡器：HY一4型，常州同华电器有限公司。组织匀

浆机：Nissei AM-6，日本Ace公司。旋转蒸发器：

Laborota 4003型，德国Heidolph公司。离心机：

LD4-2A，北京医用离心机厂。电子天平：0．01 mg，

Sartorius公司。微量移液器：北京青云航空仪表有

限公司。磁力搅拌器：7 8-1型，浙江乐清乐成电器

厂。隔膜真空泵(GM-0．33)、溶剂过滤器，均为天津

市腾达过滤器件厂产品。SPE柱：Sep-Pak Vac

12cc(2g)碱性氧化铝柱，美国Waters公司。

1．2 试验方法

1．2．1 色谱条件 色谱柱：C e反相液相色谱柱，

Inertsil ODS-3(4．6 mm×250 mm，粒径5 m)；流

动相：水一乙腈一乙酸(76：24：0．05，V／V／V)；检测

波长：265 nm；进样量：50 ttL；流速：1 mL／mim。

1．2．2 标准溶液的配置 精密称取SM 和N 一

ACE-SMz各0．010 0 g，用乙腈溶解并定容至100

mL，配置成100 ttg／mL的2种标准贮备液，一20℃

避光保存。标准贮备液再用乙腈稀释，配置成浓度

为10 ttg／mL标准工作液，一20℃避光保存。

1．2．3 标准曲线绘制于测定当日用流动相将SM 、N 一ACE—SM 的标准工作液稀释，配制成浓度

为0．01、0．02、0．05、0．10、0．50、1．00 和2．50

t*g／mL的混合标准溶液，各取50 L进样，HPLC检

测，对峰面积积分。每一浓度进样5次，取平均值，

然后以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，分别绘制上

述2种化合物的标准曲线，求出回归曲线和相关系

数。

1．2．4 样品前处理

1．2．4．1 提取和净化：鲟鱼肌肉去皮，于15 000

r／rain匀浆3 rain后，准确称取2．00 g肌肉组织匀

浆，加入乙腈25 mL，无水硫酸钠4 g，中速振荡20

rain，3 000 r／rain离心5 rain。取上清于含30 mL

正己烷的100 mL分液漏斗中，振摇1 rain，静置20

rain，收集下层。分离后的残渣再用25 mL乙腈提

取1次，振荡20 rain后，3 000 r／rain离心5 rain。

倒入分液漏斗中振荡2 rain后静置分层，合并2次

所得的下层溶液，加入正丙醇10 mL，40℃下减压

蒸馏，残留物用5 mL乙腈一水(95：5，V／V)溶解。

1．2．4．2 萃取：预先用15 mL乙腈一水(95：5，

V／V)平衡Sep—Pak Vac 12cc(2g)碱性氧化铝柱，

然后上样，用5 mL乙腈一水(95：5，V／V)洗涤，不

收集；再用5 mL乙腈一水(75：25，V／V)洗脱，收集

洗脱液，氮气吹至近干，残留物用流动相定容至2．0

mL，所制样液用高效液相色谱仪进行检测。

1．2．5 回收率的测定设20、100、2 000 t*g／kg 3

个组织添加水平，并设空白对照，每个水平设5个平

行。分别称取匀浆肌肉组织2．00 g，添加一定体积

的标准工作液，使肌肉组织中药物浓度分别为20、

100、2 000 t*g／kg，涡动1 rain，静置10 rain，按样品

前处理方法进行处理后进HPLC分析。根据各组分的峰面积计算其浓度和回收率。

1．2．6 检测限的测定10个空白鲟鱼肌肉样品，每

个空白肌肉准确称取2．00 g，按样品前处理方法处

理，测得基线噪音值，按信噪比为3计算，求得鲟鱼肌

肉组织中SM。和N 一ACE-SM2测定方法的检测限。

1．2．7 精密度的测定 3 d内，每日准确称取匀浆

组织各2．00 g，每个浓度3个平行，分别添加一定体

积的标准溶液，使组织中SM 和N 一ACE—SM 药

物浓度为20、100、2 000 t,g／kg，涡动1 rain，静置1O

rain后，按样品前处理方法进行处理。El内每个浓

度取5个样品，每个样品重复进样测定5次，上述3

个添加浓度分别作3个El间重复。求各组分的峰面

积，计算2种药物在El内与El间回收率的平均值与

标准误。

2 结 果

2．1 标准曲线

取上述配制的各浓度的磺胺二甲嘧啶、N 一乙酰

化磺胺二甲嘧啶混合标准工作液在选定的色谱条件

下进行测定，在浓度为0．01～2．0 p．g／mI 范围内，

色谱峰面积与浓度呈线性相关。如表1所示，标准

品和样品的色谱图见图1。

表1 SM：、N‘一ACE-SM：标准曲线回归方程与相关系数

Table 1 Standard curves regression equations and

correlative coefficients of SM 2 and N‘-ACE-SM2

2．2 检测限

根据10个空白组织的基线噪音值，求其平均

值，以平均噪音的3倍计算检测限，求得肌肉组织中

SM，、N —ACE—SM2的检测限均为10．0 ttg／kg。

2．3 添加回收率和精密度

在20、100、2 000 ttg／kg(低、中、高)3个浓度的

添加水平，对鲟鱼肌肉样本进行添加回收试验，结果

见表2和表3。

表2 鲟鱼肌肉组织中SM：、N4_ACE—SM：的添

加回收率(n-5)

Table 2 Recovery of SM2 and N4_ACE·SM2

from fortified m uscles

3 讨 论

3．1 样品提取

关于肌肉组织中磺胺二甲嘧啶、N 一乙酰化磺胺

二甲嘧啶的提取方法，已有的报道大多用二氯甲

烷[川、乙腈 或偏磷酸一甲醇(2：1，V／V)[ 作提取

溶剂。用二氯甲烷提取时，组织漂浮在提取溶剂表

面，倾倒困难；使用偏磷酸一甲醇作提取溶剂，由于含

有大量的水分，造成减压蒸馏耗时费力；使用乙酸乙酯提取效率最高，但提取的组织内源性物质也最多，

净化较困难，净化方法还需要进一步研究。采用乙

腈作提取溶剂，提取效率较低，但增加提取溶剂的

量，可获得满意的回收率，另外用乙腈提取时共提的

杂质也较少。经过反复试验，用25 mL乙腈，提取2

次，可将目标分析物提取出来。

盐析会促进溶质的析出，可提高有机溶剂提取

效果。本试验在提取溶剂中加入无水NazSO ，提

高了磺胺二甲嘧啶和N 一乙酰化磺胺二甲嘧啶的提

取效率，当Na SO 加至4 g时，回收率不再增加。

因此，选用添加无水硫酸钠的量为4 g。

3．2 样品净化

样品净化是样品前处理步骤中关键的一步，选

择SPE柱的种类尤为重要，它直接关系到方法的回

收率。文献报道用于净化的SPE柱有C。。柱[3 ]，本

方法选用的碱性氧化铝柱为正相柱，洗脱溶剂黏滞

系数小，自然状态下很快流干，操作较简单。

3．3 检测

磺胺类药物的检测，文献报道有紫外检测器、荧

光检测器和电化学检测器。电化学检测器的电极需

要稳定的时间较长，样品杂质容易污染电极。荧光

检测器的灵敏度和选择性比紫外检测器高。SM

用荧光胺衍生化后生成的产物具有荧光性，但N 一

ACE—SM 不能用荧光胺衍生化，限制了荧光检测器

的应用。紫外检测器为目前测定磺胺类药物最常用

的检测器，可直接测定，无需衍生化，简捷迅速。我

们采用二极管阵列检测器检测，选取两种药物光谱

图的最大吸收波长作测定波长。光谱见图2。

3．4 回收率与检测限

在本试验条件下，对鲟鱼肌肉组织在20、100、

2 000 ttg／kg添加浓度范围内，磺胺二甲嘧啶、N 一乙

酰化磺胺二甲嘧啶的检测限均为10．0“g／kg。Ho—

rie等L7 报道用于测定肌肉中上述两种药物方法的

检测限为20．0 gg／kg，本方法的检测限低于文献报

道值；回收率与之接近，但本方法操作较简单。

3．5 操作注意事项

磺胺类药物在高温、光线直射、空气暴露等环境

条件下，会部分降解氧化损失，故在样品提取净化

操作过程中，要尽可能在避光、室温小于25℃条件

下操作，所用的器皿也应尽可能采用棕色；标准液

及样液应在冷藏、避光条件下保存；样液也应尽快分

析。本试验结果表明，100 ttg／mL 的标准液在

一20℃、黑暗条件下可保存6个月。

图没办法上传，加我qq445177317，可以给你，写百度知道就可。

高中化学合集百度网盘下载

链接：https://pan.baidu.com/s/1znmI8mJTas01m1m03zCRfQ

提取码：1234

简介：高中化学优质资料下载，包括：试题试卷、课件、教材、视频、各大名师网校合集。

标准值相对不确定度(%)单位苯35.4 2.0 质量浓度(mg/L)甲苯34.7 2.5 质量浓度(mg/L)对二甲苯34.4 3.0 质量浓度(mg/L)邻二甲苯35.4 1.3 质量浓度(mg/L)

可以参考：GBW(E)081023-甲醇中苯系物混合标准物质

移液枪的使用

量程的调节

在调节量程时，用拇指和食指旋转取液器上部的旋钮，如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可；但如果要从小体积调为大体积时，则可先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。

枪头的装配

在将枪头（pipette tips）套上移液枪时，很多人会使劲地在枪头盒子上敲几下，这时错误的做法，因为这样会导致移液枪的内部配件（如弹簧）因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导致刻度调节旋钮卡住。正确的方法是将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。

移液的方法

移液之前，要保证移液枪、枪头和液体处于相同温度。吸取液体时，四指并拢握住移液枪上部，用拇指按住柱塞杆顶端的按钮，移液枪保持竖直状态，将枪头插入液面下2－3毫米，缓慢松开按钮，吸上液体，并停留1～2秒钟（粘性大的溶液可加长停留时间），将吸头沿器壁滑出容器，排液时吸头接触倾斜的器壁。在吸液之前，可以先吸放几次液体以润湿吸液嘴（尤其是要吸取粘稠或密度与水不同的液体时）。最后按下除吸头推杆，将吸头推入废物缸。

两种移液方法

1、一是前进移液法。用大拇指将按钮按下至第一停点，然后慢慢松开按钮回原点。接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。

2、二是反向移液法。此法一般用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体，其原理就是先吸入多于设置量程的液体，转移液体的时候不用吹出残余的液体。先按下按钮至第二停点，慢慢松开按钮至原点。接着将按钮按至第一停点排出设置好量程的液体，继续保持按住按钮位于第一停点（千万别再往下按），取下有残留液体的枪头，弃之。

移液枪的维护保养

如不使用，需要把移液枪的量程调致最大刻度，使弹簧处于松弛状态，保护弹簧，并将其竖直挂在移液枪架上。

每天使用完后，应对移液枪外表进行清洁，用10%的次氯酸钠或者70%的酒精清洁后，自然晾干，特别需要注意移液枪嘴锥处，不能残留溶液（血液）。

移液枪必须按要求定期进行校准。

移液器使用注意事项

1、吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指，绝不允许突然松开，以防将溶液吸入过快而冲入移液枪内腐蚀柱塞而造成漏气。

2、为获得较高的精度，吸头需预先吸取一次样品溶液，然后再正式移液，因为吸取血清蛋白质溶液或有机溶剂时，吸头内壁会残留一层“液膜”，造成排液量偏小而产生误差。

3、移液器反复撞击吸头来上紧的方法是非常不可取的，长期操作会使内部零件松散而损坏移液器。

4、移液器未装吸头时，切莫移液。

5、移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体（如浓酸、浓碱、有机物等）。

6、严禁使用移液器吹打混匀液体。

7、不要用大量程的移液器移取小体积的液体，以免影响准确度。同时，如果需要移取量程范围以外较大量的液体，请使用移液管进行操作。

8、使用时要检查是否有漏液现象。

方法：吸取液体后悬空垂直放置几秒中，看看液面是否下降。

如果漏液，原因大致有一下几方面：

1、枪头是否匹配；

2、弹簧活塞是否正常；

3、如果是易挥发的液体（许多有机溶剂都如此），则可能是饱和蒸汽压的问题。可以先吸放几次液体，然后再移液。

你先将按钮压至第二停靠点（就是压到底），然后将吸头浸入液面，使按钮缓慢滑回原来位置。放液时，吸头紧贴容器壁，将按钮按到第一停点。剩余的液体你可以废弃，也可以放回原来的容器里。

一般不会用来取带有残渣的液体，最好不要这样用，会影响精确度，比如像你所说被堵住了，导致液体打不出来。使用移液枪注意事项：1、选择与移液枪配套的枪头，并且套紧，否则影响使用；2、选择好所需量程，调量程时要慢些，太快了会损坏移液枪；3、取液体时，先打到第一档再去取液体；4、向外打出液体时打到第二档；5、枪头和液体不要混用，否则会污染试剂，用过的枪头要消毒杀菌后再用，不过一般是一次性的，实验室不会再用了，用过就会扔掉；6、试验完毕后打掉枪头，把量程调最大，摆放时不要乱摆，有移液枪架，正确放在架子上。7、试验中使用时，不要把枪斜放或是倒放，会污染枪体。

这些都是我一个字一个字打出来的，第一次回答问题，希望采纳，谢谢~·以上这些如果用来写实验报告，老师肯定会给满分的，嘿嘿。

(1)吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指，绝不允许突然松开，以防将溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气。

(2)为获得较高的精度，吸头需预先吸取一次样品溶液，然后再正式移液，因为吸取血清蛋白质溶液或有机溶剂时，吸头内壁会残留一层“液膜”，造成排液量偏小而产生误差。

(3)浓度和粘度大的液体，会产生误差，为消除其误差的补偿量，可由试验确定，补偿量可用调节旋钮改变读数窗的读数来进行设定。

(4)可用分析天平称量所取纯水的重量并进行计算的方法，来校正移液枪，1mL蒸馏水20℃时重0.9982g。

(5)移液枪反复撞击吸头来上紧的方法是非常不可取的，长期操作会使内部零件松散而损坏移液器。

(6)移液枪未装吸头时，切莫移液。

(7)在设置量程时，请注意？旋转到所需量程？数字清清楚楚在显示窗中？所设量程在移液枪量程范围内不要将按钮旋出量程，否则会卡住机械装置，损坏了移液枪。

(8)移液枪严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体（如，浓酸、浓碱、有机物等）。

(9)严禁使用移液枪吹打混匀液体。

(10)不要用大量程的移液枪移取小体积的液体，以免影响准确度。同时，如果需要移取量程范围以外较大量的液体，请使用移液管进行操作

整个移液器的下半部能够高温灭菌,只要将下半部轻轻旋开,即可卸下进行灭菌。因此可以在进行一些有生物危险性或无菌要求比较高的工作。整支灭菌只适用于极少数实验，移液器灭菌方法需要按规定的步骤操作，如果长时间步骤灭菌会影响移液器的精度和使用寿命。移液前先用液体预湿吸头内部，即反复吸打液体几次使吸头预湿，吸液或排出液体时最好多停留几秒。尤其对于移取体积大的液体(如1000~1)，建议将吸头预湿后再移取。

从大量程调节至小量程为正常调节方法，逆时针旋转刻度即可；从小量程调节至大量程时，应先调至超过

设定体积刻度，再回调至设定体积，这样可以保证移液器的精确度。

标准操作：

适用的液体：水、缓冲液、稀释的盐溶液和酸碱溶液。

1、按到第一档，垂直进入液面几毫米。

2、缓慢松开控制按钮，否则液体进入吸头过速会导致液体倒吸人移液器内部吸人体积减少。

3、打出液体时贴壁并有一定角度，先按到第一档，稍微停顿1s后，待剩余液体聚集后，再按到第二档将剩余液体全部压出。