蛋白质的盐析实验中为什么用饱和硫酸铵
盐析剂中的金属阳离子的电荷数越大，盐析作用越强。在阳离子的电荷数相同的情况下，盐析作用与阳离子的半径成反比，这是因为价态高半径小的阳离子的水化能力较强，所以使自由水分子减少的作用较大。
由于饱和硫酸铵是强电解质，解离作用强，饱和硫酸铵的解离可抑制蛋白质弱电解质的解离，使蛋白质带电荷减少，更容易聚集析出。
扩展资料：
中性盐在蛋白质溶液中，一方面与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；另一方面又大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出。常用的中性盐有硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等，但以硫酸铵为最多。
得到的蛋白质一般不失活，一定条件下又可重新溶解，故这种沉淀蛋白质的方法在分离、浓缩，贮存、纯化蛋白质的工作中应用极广。
原理就是溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同，步骤就是不断加硫酸铵…以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀，再加到浓度50%时球蛋白沉淀，饱和时清蛋白沉淀…
一，基本原理
硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。
二，试剂及仪器
1.组织培养上清液、血清样品或腹水等
2.硫酸铵（NH4）SO4
3.饱和硫酸铵溶液（SAS）
4.蒸馏水
5.PBS(含0.2g/L叠氮钠)
6.透析袋
7.超速离心机
8.pH计
9.磁力搅拌器
三，操作步骤
以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%—50%。
（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS）
1.将767g（NH4）2SO4边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液（4.1mol/L,25°C）.
2.其它不同饱和度铵溶液的配制
（二）沉淀
1.样品（如腹水）20000′g离心30min，除去细胞碎片；
2.保留上清液并测量体积；
3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中，终浓度为1：1（
4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜（4°C），使蛋白质充分沉淀。
（三）透析
1.蛋白质溶液10000′g离心30min（4°C）。弃上清保留沉淀；
2.将沉淀溶于少量（10-20ml）PBS-0.2g/L叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对
PBS-0.2g/L叠氮钠透析24-48小时（4°C），每隔3-6小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；
3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。
四，应用提示
（一）先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。
1.边搅拌边慢慢加SAS到样品溶液中，使浓度为0.5:1(v/v)；
2.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或过夜（4°C）；3.3000′g离心30min（4°C），保留上清液；上清液再加SAS到0.5:1(v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；
4.上清液再加SAS到0.5:1(v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；
5.杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效
（二）为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1）；硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。
总硫酸铵沉淀法纯化蛋白质采用的是盐析法。当硫酸铵溶液达到饱和时，蛋白质大量析出。采用硫酸铵，因为不含有水，可以很快达到饱和度，从而使蛋白质析出。而采用硫酸铵溶液，会带入大量的水，即使能够使蛋白质析出，因为硫酸铵溶液带入的大量的水，也会导致溶液大量稀释，使析出效率大大降低。因此，必需使用无水的固体氯化铵作为析出剂。
1、现象：
盐析是指在蛋白质水溶液中加入中性盐，随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的现象。中性盐是强电解质，溶解度又大，在蛋白质溶液中，一方面与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
另一方面又大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出。常用的中性盐有硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等，但以硫酸铵为最多。得到的蛋白质一般不失活，一定条件下又可重新溶解，故这种沉淀蛋白质的方法在分离、浓缩，贮存、纯化蛋白质的工作中应用极广。
2、原理：
在高浓度的中性盐溶液中，由于盐离子亲水性比蛋白质强，与蛋白质胶粒争夺与水结合，破坏了蛋白质的水化层。
在高浓度的中性盐溶液中，由于蛋白质和盐离子对溶液中水分子都有吸引力，产生与水化合现象，但它们之间有竞争作用，当大量中性盐加入时，使得盐解离产生的离子争夺了溶液中大部分自由水，从而破坏蛋白质的水化作用，引起蛋白质溶解度降低，故从溶液中沉淀出来。
扩展资料：
蛋白质的来源：
蛋白质的主要来源是肉、蛋、奶、和豆类食品，一般而言，来自于动物的蛋白质有较高的品质，含有充足的必需氨基酸。
必需氨基酸约有8种，无法由人体自行合成，必须由食物中摄取，若是体内有一种必需氨基酸存量不足，就无法合成充分的蛋白质供给身体各组织使用，其他过剩的蛋白质也会被身体代谢而浪费掉，所以确保足够的必需氨基酸摄取是很重要的。
植物性蛋白质通常会有1-2种必需氨基酸含量不足，所以素食者需要摄取多样化的食物，从各种组合中获得足够的必需氨基酸。一块像扑克牌大小的煮熟的肉约含有30-35公克的蛋白质，一大杯牛奶约有8-10公克，半杯的各式豆类约含有6-8公克。
所以一天吃一块像扑克牌大小的肉，喝两大杯牛奶，一些豆子，加上少量来自于蔬菜水果和饭，就可得到大约60-70公克的蛋白质，足够一个体重60公斤的长跑选手所需。若是你的需求量比较大，可以多喝一杯牛奶，或是酌量多吃些肉类，就可获得充分的蛋白质。
参考资料来源：百度百科—盐析
参考资料来源：百度百科—蛋白质
蛋白质分离主要根据五种原理：
分子大小、溶解度、电荷、吸附性质、对配体分子的生物学亲和力等。
一、根据分子大小不同的纯化方法
1.透析和超过滤：
透析是利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质，使蛋白质和其它小分子物质分开。常用的半透膜是玻璃纸或称赛璐玢纸、火棉纸和其它改型纤维素材料。
2.密度梯度离心；
3.凝胶过滤；
二、利用溶解度差别的纯化方法
1.等电点沉淀和pH控制；
2.蛋白质的盐溶和盐析；
3.有机溶剂分级分离法；
4.温度对蛋白质溶解度的影响；
三、根据电荷不同的纯化方法
1.电泳；
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳；
3.毛细管电泳；
4.等电聚焦；
5.层析聚焦；
6.离子交换层析；
四、利用选择性吸附的纯化方法
1.羟磷灰石层析；
2.疏水作用层析；
五、利用对配体的特异性生物学亲和力的分离纯化
六、高效液相层析和快速蛋白质液相层析
