公司产品出来正己烷和醋酸乙酯的混合物7:3 想请教大家如何能简便的分离 主要想把正己烷提出来

你第一次做维生素D3出峰了吗，第二次还是做D3同样的条件下不出峰了吗?还是做别的样品不出峰了。 听你的描述，你是用正己烷洗脱的，在正相硅胶色谱柱中，正己烷是很弱的洗脱溶剂。所以你说不出峰，也许是洗脱溶剂太弱，没有把样品洗脱下来，你可以试着搭配正己烷/异丙醇洗脱，选择合适的比例。你的色谱柱刚用，应该不至于需要再生，我感觉你只要加强洗脱强度就可以了。 你柱子里已经多次进样未洗脱出来了，你可以用乙酸乙酯冲洗色谱柱3~5倍柱体积，然后在选择合适流动相(比如:正己烷/异丙醇)平衡后进样洗脱。

正己烷/乙酸乙酯、三氯甲烷/甲醇和正己烷对微藻 油脂的提取情况,表明脂肪酸组成... 保留率较高,干藻粉的藻渣中蛋白质保留率分别为 55.92%, 62.38%和54.27%。

大豆毛油中磷脂含量约为2%,采用正己烷为溶剂,用磷脂酶C水解大豆毛油中的磷脂,生成甘油二酯,可以减少毛油的炼耗,提高精炼率.磷脂酶C水解大豆毛油中丙酮不溶物。

油脂的主要生理功能是贮存和供应热能，在代谢中可以提供的能量比糖类和蛋白质约高一倍。一克油脂在体内完全氧化时，大约可以产生39.8千焦的热能。油脂除食用外，还用于肥皂生产和油漆制造等工业中。

一般是可以的，具体应根据样品特性判断，若能用乙酸乙酯提对操作人员健康也有好处。农残测定中对于有机磷类农药，乙酸乙酯是一个不错的选择，SN的方法都有，现也改用乙腈作为萃取溶剂了，主要是乙腈提取时，色素等物质相对要少一些。加标回收率二者对于有机磷类差异不是太大。乙腈能与水、甲醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯、丙酮、乙醚、氯仿、四氯化碳、1,2-二氯乙烷及多种不饱和烃混溶，不能与饱和烃混溶。乙酸乙酯萃取的是脂溶性的物质。乙腈的记性参数为5.8，乙酸乙酯的为4.4，对于萃取的物质和量肯定是不一样的。应选择一个性质和萃取效果跟乙腈相差不大的溶剂，同时也和需要萃取的样品物质性质有关。

一般实验室经常用乙酸乙酯与正己烷混合做层析，还真没想过混合液的分离，而且两种溶剂都很容易挥发。个人感觉恐怕最好的方法就是萃取精馏，控制下相对混法度，应该还是可以的。刚替楼主搜了下，有关于间歇共沸精馏的相关研究，可以拿来看看

高效液相色谱柱大致可分为五类:一、高效反相液相色谱柱以C18为代表的高效反相液相色谱柱一直被描述为药物发现、开发、方法验证(validation)的心脏! 高效反相液相色谱柱也极其广泛应用在药物代谢及动力学、生命科学、医疗健康、生物分析检测、毒品和兴奋剂检测、食品安全分析、环境分析、军事、国土安全等领域! 高效反相液相色谱制备柱也是最重要的分离纯化技术之一! 无论是过去，现在和可预见的未来, 以球形B型硅胶(5um 或 3um)为材料骨架的高效反相液相色谱柱在实际应用中永远占有统治地位!常规HPLC方法的开发几乎总是从C18作为出发点，反相色谱占了80%以上的应用。 过去数十年来, 无数努力集注于: 1) 改善硅胶的品质, 优化键合化学2)开发新颖的材料骨架替代硅胶。十多年前, 使用有机硅材料取代无机硅材料作为起始原料生产球形硅胶代表一个划时代的革命! 生产的球形硅胶命名为B型球形硅胶。无机A型硅胶重金属含量很高, 硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等导致许多碱性化合物回收率低。球形B型硅胶重金属含量很低, 在非常大的程度上消除了A型无机硅胶表面若干位置严重酸化及螯合效应等问题。用B型球形硅胶合成高效液相色谱填料, 导致高效液相色谱柱产品质量有质的飞跃!然而，另一方面，基于客户的大量反馈和我们对几乎所有色谱厂商产品的评估, 我们相信键合化学问题没有获得很好的解决。具体体现在:

(1) “纯粹”反相机理的键合相例如C18和C8市场上仍然是单功能，三功能和聚合物键合相"鱼目混杂"。 (2) 键合相封端问题没有获得很好的解决, 一直是困扰色谱领域最大的问题! 迄今为止全部的尝试只获得有限的成功。

(3) 极性嵌入式(Polar embedded)键合相

极性嵌入式(Polar embedded)键合相是C18高效反相液相色谱"卫星群"中最重要的产品, 是C18和C8键合相最重要的补充。

极性嵌入式(Polar embedded)键合相起源于Supelco ABZ。Supelco ABZ的键合方法是用aminopropyl键合相和长链羧酸缩合反应形成一个C16酰胺。那么市场上的极性嵌入式(Polar embedded)键合相群的主要问题是什么? 极性嵌入式键合相和所谓的水相C18主要问题是键合相泄漏, 键合相不稳定等。两者之间的内在差异是: 极性嵌入式键合相键合相泄漏和键合相不稳定等问题能够获得很好的解决, 但使用极性硅烷试剂封端的所谓的水相C18键合相键合相泄漏和键合相不稳定等问题是不可逆转的。 在类似C18链长度的硅烷试剂中嵌入极性酰胺或酰酯, 使得键合相亲水, 在100%水相条件下稳定。但按照类似C18的键合化学, 键合覆盖率低, 键合相不稳定。 Chrom-Matrix InnovationTM PEG键合相是非常极性的产品, 但测试结果表明: PEG键合相非常稳定, 在LC-MS测试中没有检测到泄漏。这一成功和我们在胶体与界面科学领域的长期经验帮助我们成功开发了新型催化条件下新的键合化学。加上超临界流体技术封端, Chrom-Matrix InnovationTM 极性酰胺或酰酯键合相比那么市场上的极性嵌入式(Polar embedded)键合相群稳定得多。色谱柱产品质量和寿命有质的飞跃! 即使这样, LC-MS测试显示: Chrom-Matrix InnovationTM 极性酰胺或酰酯键合相仍然有非常低的泄漏。(4) 无泄漏低孔和高比表面积C18键合相等是小分子化合物分离纯化的终端保证!制备型高效反相液相色谱柱, 制备型高效正相液相色谱柱, 制备型高效离子交换色谱柱和对应的闪光色谱(flash chromatograpy) 是小分子化合物分离纯化最重要的终端保证!但是市场上大多数色谱产品和闪光色谱(flash chromatograpy)键合相有明显的泄漏。尽管泄漏在紫外可见检测器中是看不见的, LC-MS信号非常明显! 最重要的是泄漏的硅烷实实在在洗脱到顾客的终端纯化产品中, 而且没有考虑在内。

Chrom-Matrix公司成功地解决了上述所有问题! InnovationTM所有反相高效液相色谱产品都使用B型球形硅胶合成, 使用最优化个性化合成工艺, 使用超临界流体封端, 使用LC-MS/MS和表面电荷滴定等多种独特技术配合多种色谱测试保证产品的品质和批次重现性。其中大部分产品LC-MS/MS测试无泄漏, 极性嵌入式(Polar embedded)键合相非常低的泄漏。二、高效正相液相色谱柱正相液相色谱是最早的色谱模式。直到现在, 合成后通过硅胶柱做进一步纯化仍然是有机化学家日常工作的一个重要组成部分。在理论上, 几乎所有的溶于正己烷，乙酸乙酯或异丙醇的有机化合物都可以用高效正相液相色谱分析。但在实际应用中，高效正相液相色谱的应用比高效反相色谱少得多。这是因为正己烷, 乙酸乙酯没有像水，甲醇或乙腈那样受欢迎。此外, A型硅胶正相液相色谱给客户一个惯性思维: 高效正相液相色谱的平衡时间很长。事实上, 高效正相液相色谱在制备规模的色谱纯化中一直发挥了重要作用。这是因为:(1) 高效正相液相色谱比高效反相色谱柱压低得多。(2) 高效正相液相色谱用的溶剂例如正己烷, 乙酸乙酯很容易通过旋转蒸发除去。(3) 吡咯等蒸发性溶剂彻底改善了碱性有机化合物在B型球形硅胶, Diol和PEG正相液相色谱柱上的峰形。此外, 不管制备规模或分析测试,(1) 结构异构体分离分析必须使用正相液相色谱或超临界流体色谱。(2) 环境中腐殖酸的结构鉴定必须使用甲基化或硅烷化消除小分子聚集, 然后使用正相液相色谱或超临界流体色谱。这种小分子聚集的自然现象一定相当广泛。PEG正相液相色谱键合相等将让客户重新评估高效正相液相色谱的价值。三、高效亲水液相色谱柱 高效亲水液相色谱是一个介于正相和反相高效液相色谱之间的运作模式。这个模式最早来自NH2色谱柱的糖分析应用。在此之后，逐步在Diol, 硅胶和亲水性高分子键合相找到了一些有价值的应用。近年来，高效亲水液相色谱成为比较流行的色谱的运作模式, 主要是因为亲水性化合物有良好的保留和高效亲水液相色谱在LC-MS/MS中的应用。尽管如此，迄今为止没有权威的论文, 评论和教科书揭示了高效亲水液相色谱真正的价值和局限性。近年来，我们帮助客户采用高效亲水液相色谱的运作模式成功地开发和验证了数以百计的HPLC和LC-MS/MS应用。我们总结出:(1) 高效亲水液相色谱是LC-MS/MS应用的第一选择。请参阅我们的LC-MS/MS产品手册应用案例。(2) 除了InnovationTM TX多功能色谱柱, 所有亲水液相色谱仅可用于分析，而不是制备规模的分离。(3) 高效亲水液相色谱流动相A是乙腈(pH值用少量的甲酸或其他调节), 流动相B是水(pH值用少量的甲酸或其他调节)。化合物洗脱秩序类似于正相液相色谱, 疏水性化合物首先洗脱, 然后是亲水化合物。流动相A一般不使用甲醇或丙酮或其他有机溶剂。(4) 进样体积太大会导致一些峰值扭曲或分裂。柱承载能力通常是非常小的。(5) InnovationTM TX, HP Amide, Silica三种高效亲水液相色谱覆盖99 ％以上的应用, NH2色谱柱用于简单糖分析应用。(6) 除了InnovationTM TX多功能色谱柱, 所有亲水高效液相色谱柱柱效不如正相和反相高效液相色谱。四、高效强阳离子交换液相色谱柱 离子交换液相色谱是生物分离最常见最有用的一种色谱模式。另一方面，小分子分离分析极少使用高效离子交换液相色谱。这是因为:(1) 新颖的反相和多功能键合相例如InnovationTM Polar-Embedded Stable Amide和TX连续出现, 在很大的程度上补偿了常规C18键合相的缺点。 C18, C8键合相也有重大进展。高效亲水液相色谱柱也覆盖了许多分析应用。(2) 相比之下, 硅胶基质的高效离子交换键合相近几十年来产品质量没有取得质的突破。硅胶基质的高效离子交换键合相柱寿命普遍短, 疏水相互作用明显。(3) 聚合物基质的高效离子交换键合相在生物分析上面的应用比较广泛, 但其柱效过低，表面积太小，对小分子分离分析难有吸引力。科学发明往往来自现实世界的挑战! 在对海洋毒素, 微生物代谢产物和天然植物(包括中草药)有效成分的分离纯化过程中, 我们深深感到高质量的硅胶基质的高效离子交换键合相是必不可少的! 因此，我们开发了硅胶基质的SCX, WCX, DEAE和SAX高效离子交换键合相。五、InnovationTM高效多功能液相色谱柱我们介绍四种高效多功能液相色谱柱:(1) InnovationTMTX毒品分析HPLC柱InnovationTM TX毒品分析HPLC柱是实际应用中最有价值的一种色谱柱。由于其在毒品分析上出色的表现, DEA专家称它毒品分析HPLC柱。InnovationTM TX是一个多功能色谱柱, 具有反相, 弱阳离子离子交换, 亲水等作用, 能够使用在100%水相或100%有机相。由于它的弱阳离子离子交换机理, InnovationTM TX对碱性化合物的分离效果是所有色谱柱中最好的。它对碱性化合物有完美的峰形。它的绝对柱效和反相色谱分析柱相同的，甚至优于反相, 远胜传统的亲水色谱分析柱。(2) InnovationTM DNPH HPLC柱InnovationTM DNPH HPLC柱主要用于环境中醛和酮DNPH衍生物分析。在特定的DNPH衍生物分析应用中, 任何其他色谱柱没有它优越的选择性。(3) InnovationTM PAH HPLC柱 (4) 血浆，血清直接进样的InnovationTM PEG色谱柱限制进入键合相(Restricted access media)最早由Merck公司发明。一个典型的方法是首先制造Diol键合相, 然后通过酰酯或酰胺反应嵌入疏水链。硅胶外表面的酰酯或酰胺链使用酶切断开。但酶不能扩散到内表面。由此外表面亲水, 内表面疏水。血浆，血清, 尿样可以直接进样。蛋白质等生物流体通过亲水外表面时没有保留, 小分子化合物可以扩散到内表面通过反相保留最后洗脱。限制进入键合相(Restricted access media)在学术领域比较欢迎, 但随着固相萃取产品的发展, 在工业领域的应用相当少。但我们最后发现, 血浆，血清, 尿样可以直接进样的限制进入键合(Restricted access media), 尤其是InnovationTM PEG色谱柱在药物代谢领域具有独特价值。药物代谢研究, 尤其是全盲条件下的早期药物代谢研究, 追求绝对回收率! 一种药物代谢之后, 打破成许多小分子化合物。全盲条件下不可能使用固相萃取回收全部小分子代谢产物。最理想的方法是, 血浆，血清, 尿样可以直接进样, 每毫升收集液使用14C同位素检测, 然后建立一个明确的代谢概况。InnovationTM PEG色谱柱是一种多功能色谱柱。它是最好的正相色谱柱! 同时，使用乙醇取代储存溶剂后, 它能够被用来作为反相让血浆，血清, 尿样可以直接进样。

薄层色谱实验，如果两种化合物的比移值相近，可以根据化合物的极性，来调整展开剂的比例。

例如，分离极性较强的化合物，采用正己烷和乙酸乙酯作为展开剂，适当加大乙酸乙酯的用量，可以使极性较强的化合物的溶解度增大，使其更快的展开，极性较弱的化合物，展开速度将降低。反之亦然。

氧化铝吸附色谱洗脱顺序：

1、在氧化铝、硅胶吸附剂上混合溶剂的组合和洗脱顺序见表8-5。表8-5用于氧化铝、硅胶吸附剂的混合溶剂

2、在聚酰胺吸附剂上，洗脱剂的洗脱能力按下列顺序增强：水3、在活性炭吸附剂上，溶剂的洗脱能力与硅胶等极性吸附剂相反，洗脱剂的洗脱能力按下列顺序增强：水＜甲醇＜乙醇＜丙酮＜正丙醇＜乙醚＜乙酸乙酯＜正己烷＜苯。

点板点原料点，产物点，混合点是看，你的原料是否反应完了，混合点是方便你对照点的位置，产物，原料点Rf值是不变的。一般反应过程中你一直点反应液同一个浓度（比如说都是点三下），原料爬板的位置会一直变淡，反应液在原料爬板位置没点了说明反应完了，点板就相当于一个小型的HPLC反相，当然看你用的板和溶剂也可能是正相，也即意味着TLC一般来说极性小的爬得高，极性大的爬得低，从而起到分离的作用。过柱就是一个放大的TLC，极性小的先下，极性大的最后洗脱。从你的反应看点板原料是看R1-≡-R2的紫外吸收，反应产物是看R1-=-R2的紫外吸收，而且产物极性大，有叠氮，原料点TLC在上面，产物在下面，过柱没反应完的原料先被洗脱下来，产物最后用大极性溶剂冲，从而分离

反相柱的具体操作方法如下：

1、基本操作和硅胶柱相同，湿法装柱好些，匀浆液用甲醇。

2、流动相基本是水、有机相混合物，有机相可选择甲醇、乙腈、乙醇等。不能使用乙酸乙酯，氯仿，正己烷等正相溶剂。一般C18填料怕碱，多数C18填料使用pH范围2-8。慎用三乙胺，氨水之类的改性剂。流动相可加0.1%三氟乙酸或醋酸改善拖尾。

3、梯度洗脱从高水相开始，但有机相比例不低于5%，最好不要用纯水，有机相比例越高越容易洗脱。

4、洗脱结束用纯有机相，如纯甲醇冲洗。

5、使用后的填料不要干燥，保存在纯甲醇里，也方便下次装柱。

硅胶基质键合反相柱的清洗：

再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的清洗步骤来除去这些污染物往往就能恢复其色谱性能。

经过等度运行后的色谱柱，有时用90～100％含量的溶剂B（双溶剂反相系统中洗脱能力较强的溶剂，如甲醇、乙晴、四氢 呋喃等）冲洗20个柱体积可以清除污染物（色谱柱的柱体积和空柱管体积概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱体积只有2.5ml，2.1x150mm的是0.28ml）。

如果使用的是缓冲盐系统，不要直接切换到强溶剂，突然转换到高浓度有机溶剂可能会使HPLC流动体系中的缓冲盐沉淀，这样会导致更大的问题，如柱头筛板堵塞、连接管路堵塞、泵泄漏、活塞损伤或进样阀转轴失灵。应该先用无缓冲盐流动相（即把缓冲液换成水），冲洗5～10个柱体积以后才切换到用强溶剂清洗。

有时候，强溶剂B也没法把残留在色谱柱上的污染物洗掉。那么就需要用更强的溶剂或者是系列溶剂组合。如果污染物不是生物质的，一种强溶剂或几种溶剂组合清洗基本能解决问题。柱子生产厂家的网页和产品说明书上很多也有清洗方法推荐。