在进行芽孢染色时需要注意的事项有哪些
在进行芽孢染色时需要注意的事项有：
(1)选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已经破裂。
(2)加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色。
简介：
芽孢染色的方法：
(1)将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。
(2)滴加3-5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
(3)用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4-5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液(约7.6%)染10分钟。
(4)倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
(5)用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。
(6)待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
还可以用石炭酸复红染液。
原理是芽胞壁较厚，通透性低而不易着色，但芽胞一旦着色就很难被脱色。因此，先用着色能力强的染液（如孔雀绿或石炭酸复红）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽胞，水洗脱色时菌体中的染料被洗脱，而芽胞中的染料仍保留。再用对比度大的复染剂染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽胞仍为原来的颜色，这样两者区别开来。
细菌夹馍染色注意事项：
1. 加盖玻片时不可有气泡，否则会影响观察。
2. 应用干墨水法时，涂片要放在火焰较高处并用文火干燥，不可使玻片发热。
3. 在采用Tyler法染色时，标本经染色后不可用水洗，必须用20%CuSO4冲洗。
细胞芽孢染色的注意事项：
1.选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已经破裂。
2.加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色。
荚膜染色步骤：
1.涂片：在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水（或用接种环挑1-2滴水），用无菌的接种环挑取少量菌种与水滴充分混匀，涂成极薄的菌膜，涂布面积约1cm2 。
2.干燥：涂片在室温下使其自然干燥，也可以小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。
3.固定：手执玻片一端，有菌膜的一面朝上，通过微火三次（手指触摸反面不烫手为宜），待玻片冷却后，再加染色液。
4.染色：玻片置于玻片搁架上，加适量（以盖满菌膜为度）草酸铵结晶紫（或石炭酸复红染液）于菌膜部位，染色1-2min。
5.水洗：斜置载玻片，在自来水龙头（或洗瓶）下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
6.干燥：自然干燥或用吸水纸吸去涂片上的水，用吸水纸时切勿将菌体擦掉。
7.镜检：用高倍镜和油镜观察并绘细菌形态并绘图于记录表中
芽孢染色步骤：
方法1
（1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。
（2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6%）染10分钟。
（4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
（5）用番红水溶液复染1分钟，水洗至水为无色。
（6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色
方法2
（1）取二支洁净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另 一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。
（2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。
（3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95%乙醇冲洗至无红色液流出。
（4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。
（5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。
学习并掌握芽孢染色法。
二、基本原理
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。
三、器材
枯草芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭菌（Clostridium sporogenes）；
孔雀绿染液，番红水溶液，苯酚品红溶液，黑色素溶液等。
四、操作步骤
方法1、
（1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。
（2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。
（4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
（5）用番红水溶液复染1分钟，水洗。
（6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
方法2、
（1）取二支洁净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。
（2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。
（3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95％乙醇冲洗至无红色液流出。
（4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。
（5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。
五、实验报告
1．结果
绘图表示你观察到的两种芽孢杆菌的芽孢在形状、大小、着生位置上有什么不同？
2．思考题
为什么在孔雀绿染色液加热染色中，要待玻片冷却后才能用水冲洗？
一、目的要求学习并掌握芽孢染色法. 二、基本原理芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理,用不同染料进行着色,使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别.芽孢壁厚、透性低,着色、脱色均较困难,因此,当先用一弱碱性染料,如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时,此染料不仅可以进入菌体,而且也可以进入芽孢,进入菌体的染料可经水洗脱色,而进入芽孢的染料则难以透出,若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理,则菌体和芽孢易于区分. 三、器材枯草芽孢杆菌,蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）,生孢梭菌（Clostridium sporogenes）；孔雀绿染液,番红水溶液,苯酚品红溶液,黑色素溶液等. 四、操作步骤方法1、（1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌,作涂片、干燥、固定. （2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上. （3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热,使染液冒蒸汽但勿沸腾,切忌使染液蒸干,必要时可添加少许染液.加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟.这一步也可不加热,改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟. （4）倾去染液,待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止. （5）用番红水溶液复染1分钟,水洗. （6）待干燥后,置油镜观察,芽孢呈绿色,菌体呈红色. 方法2、（1）取二支洁净的小试管,分别加入0．2ml无菌水,再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔,另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔,两管各自充分混合成浓厚的菌悬液. （2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液,充分混合后,于沸水浴中加热3—5分钟. （3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上,涂薄,风干后,将载玻片稍倾斜于烧杯上,用95％乙醇冲洗至无红色液流出. （4）再用自来水冲洗,滤纸吸干. （5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处,立即展开涂薄,自然干燥后,油镜观察,在淡紫灰色背景的衬托下,菌体为白色,菌体内的芽孢为红色. 五、实验报告1．结果绘图表示你观察到的两种芽孢杆菌的芽孢在形状、大小、着生位置上有什么不同? 2．思考题为什么在孔雀绿染色液加热染色中,要待玻片冷却后才能用水冲洗?
学习并掌握芽孢染色法。
二、基本原理
芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此，当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（malachite green）或碱性品红（basicfuchsin）在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。
三、器材
枯草芽孢杆菌，蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus），生孢梭菌（Clostridium sporogenes）；
孔雀绿染液，番红水溶液，苯酚品红溶液，黑色素溶液等。
四、操作步骤
方法1、
（1）将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。
（2）滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
（3）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约7．6％）染10分钟。
（4）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
（5）用番红水溶液复染1分钟，水洗。
（6）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
方法2、
（1）取二支洁净的小试管，分别加入0．2ml无菌水，再往一管中加入1—2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1—2接种环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。
（2）在菌悬液中分别加入0．2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3—5分钟。
（3）用接种环分别取上述混合液2—3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95％乙醇冲洗至无红色液流出。
（4）再用自来水冲洗，滤纸吸干。
（5）取1—2接种环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。
五、实验报告
1．结果
绘图表示你观察到的两种芽孢杆菌的芽孢在形状、大小、着生位置上有什么不同？
2．思考题
为什么在孔雀绿染色液加热染色中，要待玻片冷却后才能用水冲洗？
