供试品直接接种硫乙醇酸盐液体培养基出现混浊现象怎样判断是否长菌
如下:有菌生长时,培养基的性状会发生一定的改变,比如有沉淀,出现絮状物,培养基混浊等等。如果不能确定是否有菌生长,可以进行染色镜检。
制作硫乙醇酸盐流体培养基时,需要注意以下问题:
(1)硫乙醇酸盐流体培养基有少量的的琼脂,在灭菌后,培养基应呈现无浑浊状态,如果放置一段时间,出现轻微浑浊,尤其是放入冰箱后,浑浊现象更加明显。浑浊程度一方面可能与培养基用的琼脂质量有关,另一方面也可能与灭菌是否彻底有关,应具体分析。如果是前者可考虑更换培养基厂家或批号、或者更换琼脂,如果是后者则应检查仔细灭菌操作和灭菌设备。
(2)培养基在灭菌后至使用过程中取放应避免摇晃,以免培养基因振动而进入氧气,影响培养基的使用,接种操作应动作迅速、敏捷,否则暴露在空气中过长,培养基被氧化。
硫乙醇酸盐流体培养基的培养温度是30-35℃。
液体硫乙醇酸盐培养基(FT)
成分
胰酶消化酪蛋白胨 15.0gL-胱氨酸 0.5g
无水葡萄糖 5.0g酵母膏 5.0g
氯化钠 2.5g硫乙醇酸钠 0.5g
新配置的0.1%刃天青(Resazurin) 1.0ml琼脂 0.75g
蒸馏水 1000mL
制法
除葡萄糖和刃天青溶液外,取上述成分混合,微温溶解 ,调节pH为弱碱性,煮沸,滤清,加入葡萄糖和刃天青溶液,摇匀,调节pH,使灭菌后在25°C的pH值为7.1 土0.2。分装至适宜的容器中,其装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层(粉红色)不超过培养基深度的 1/2。灭菌。在供试品接种前,培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5,否则,须经100°C水浴加热至粉红色消失(不 释 过 2 0 分钟),迅速冷却,只限加热 一次,并防止被污染。除另有规定外,硫乙醇酸盐流体培养基置30〜 35°C培养。
1,瓶子上部空间不够,氧气不足以形成氧化层
2,指示剂失效(有可能是产品质量问题或灭菌过度造成)
3,瓶子高度不够或流体粘度不够,导致氧化层过深,使得培养基整体变色,看不出氧化层。
时间长了以后还是要出现的,很薄的一层氧化层的。如果一直都没有的话,或者说你在使用时接触空气都没有变色的话,那就要考虑是不是试剂、配制方法等方面是不是有问题了
配方:
胰酶消化酪蛋白胨——15g
L-胱氨酸——0.5g
葡萄糖——5g
酵母膏——5g
氯化钠——2.5g
硫乙醇酸钠——0.5g
刃天青(Resazurin)—— 0.001g
琼脂——0.75g
蒸馏水——1000mL
pH7.1
各成分作用:
酪胨和酵母出粉提供碳氮源、维生素和生长因子;葡萄糖提供可发酵有糖类更利于生长;氯化钠维持均衡的渗透压;硫乙醇酸钠和L—胱氨酸能有效降低氧化还原电位,防止过氧化物的积累对某些菌产生毒性,同时其硫氢基团有钝化含砷、汞及其它重金属防腐剂的抑菌作用;少量琼脂的凝固作用可防止二氧化碳、氧气和还原产物的扩散;刃天青是氧化还原指示剂,氧化状态呈粉红色,还原状态无色。
某些细菌具有色氨酸酶,能分解蛋白胨水中的色氨酸生成吲哚,当加入吲哚试剂后形成红色的玫瑰吲哚。
氧化酶试验原理
氧化酶使细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌,使细胞色素C氧化,再由氧化型细胞色素C是对苯二胺氧化,生成有色的醌类化合物。
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固体培养基:液体培养基中加入2%琼脂制成
固体培养基:观察菌落和分离提纯微生物
液体:工业大规模培养(微生物工程)
半固体:观察微生物的运动
(如果观察微生物就用固体培养基,如果大规模生产就用液体培养基。一般都不用半固体培养基,它主要用于观察可以运动的微生物的运动。)