刚果红染色法的方法

用乙醇做溶剂配制就行，按照要求浓度称取一定质量的刚果红，加入到乙醇中溶解均匀即可。

果红是一种有机化合物，分子式为C32H22N6Na2O6S2，为棕红色粉末，溶于水呈黄红色，溶于醇呈橙色。用于作为酸碱指示剂，变色范围为3.5到5.2，碱态为红色，酸态为蓝紫色。也用于诊断淀粉样病变。

曾广泛用于棉。粘胶的染色，因其遇酸极易转变为蓝色，以及无适当处理方法使之提高其湿处理牢度，故自不溶性偶氮染料和直接耐酸大红4BS问世以来，该品在染色中的使用量逐减减少，但在造纸工业中用量颇大。还可作为酸碱指标剂，即刚果红试纸，pH3.5（蓝紫）-5.2（红）。另外还用于生物染色，分析试剂。用作吸附指示剂，用于测定卤化物、硫氰酸盐和锌等。用作薄层色谱法测定硫代磷酸盐除草剂的显色剂。还用作生物染色剂。

2、鉴别培养基加土豆汁是为了细菌更好的生长。因为土豆汁是比纤维素更好的碳源（你可以理解为更好吃的食物），有土豆淀粉的情况下细菌可以更好的生长和繁殖，只有细菌繁殖到一定数量才能进行下面的鉴定操作，所以土豆汁是必须加的。

3、假阳性反应就是假的阳性反应。我们认为，刚果红染色后，我们需要的菌会表现出阳性反应（即透明圈）。但方法二有可能出现不是我们要的菌，但也出现了透明圈，所以被误认为我们要的菌，这就是假阳性反应。

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其实方法一是后染色，方法二是先染色。先染色就导致染液在培养基中的时间较长，虽然刚果红是只染纤维素，淀粉等的分解产物虽不影响纤维素，但会冲淡染色反应，出现模糊透明圈（即假阳性）。另外还有色素分解的问题。如果是后染（方法一），之前没有染液存在，就没有冲淡的问题了，就没有假阳性了。

刚果红染色法的原理

刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物.当纤维素被纤维素酶分解后,刚果红——纤维素的复合物就无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈,通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌.

刚果红染色法：

常用的刚果红染色法有两种,一种是先培养微生物,再加入刚果红进行颜色反应,另一种是在倒平板时就加入刚果红.

方法一 在长出茵落的培养基上,覆盖质量浓度为1 mg／mI.的CR溶液,10～15 min后,倒去CR溶液,加入物质的量浓度为l mol／I.的NaCI溶液,15 min后倒掉NaCl溶液,此时,产生纤维素酶的茵落周围将会出现透明圈.

方法二 配制质量浓度为10 mg／mI.的CR溶液,灭菌后,按照每200 mI.培养基加入1 mI.的比例加入CR溶液,混匀后倒平板.等培养基上长出茵落后,产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈.

两种刚果红染色法的比较

刚果红在筛选纤维素分解菌上的应用已经有超过20年的历史,课本中给出了两种方法.方法一是传统的方法,缺点是操作繁琐,加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用.方法二的优点是操作简便,不存在菌落混杂问题,缺点是由于在纤维素粉和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质,可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应.但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊,因为培养基中纤维素占主要地位,因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分.方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力,它们在长时间培养过程中会降解刚果红而形成明显的透明圈,与纤维素分解菌不易区分.

常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。

方法一 在长出茵落的培养基上，覆盖质量浓度为1 mg／mI。的CR溶液，10～15 min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为l mol／I。的NaCI溶液，15 min后倒掉NaCl溶液，此时，产生纤维素酶的茵落周围将会出现透明圈。

方法二 配制质量浓度为10 mg／mI。的CR溶液，灭菌后，按照每200 mI。培养基加入1 mI。的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。等培养基上长出茵落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。

两种刚果红染色法的比较

刚果红在筛选纤维素分解菌上的应用已经有超过20年的历史，课本中给出了两种方法。方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于在纤维素粉和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红而形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。

（1）

墨汁染色：用接种环取一环菌液（108～1010／ml）放在洁净载玻片上，然后在相距2～3mm处放已稀释2～3倍的绘图用墨汁—接种环。覆盖盖玻片后镜检。也可将墨汁1滴与待检标本1滴混合于载玻片上的一端，以作血膜推片的方法制片，干后镜检。可见背景成黑褐色，菌体无色。

（2）

刚果红染色：在载玻片上置2％刚果红水溶液1小滴，以极少量的培养菌与其混合，涂成均匀厚片，待干，以1％盐酸乙醇洗涤，待自然干燥后镜检。可见背景为蓝色，菌体无色。

染色法常用于薄片或磨光面，亦可用于重砂。用试剂与矿物相作用，使试剂中的离子交换矿物中的某种离子，有色试剂离子被矿物所吸附，致使矿物染成不同的颜色，根据颜色的不同来鉴定矿物。

这种方法过去多用于鉴定碳酸盐矿物和粘土矿物，已能鉴别百余种矿物，包括某些硅酸盐、铌钽酸盐、钨酸盐、氧化物和硫化物等。

2、刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红——纤维素的复合物便没法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

he染色的操作步骤：

将石蜡切片置于烘箱中60℃烤1～2h；

石蜡切片常规二甲苯，乙醇脱蜡至水，

苏木素染10分钟，

流水冲洗，去余色，

0.7%盐酸乙醇分化数秒钟，

流水冲洗，切片变蓝约15分钟，

7.95%乙醇30秒钟，

8.酒精性伊红染30秒，

I 95%乙醇30秒钟，

II 95%乙醇30秒钟，

I 100%乙醇30秒钟，

II100%乙醇30秒钟，

石碳酸二甲苯30秒钟，（1： 4石碳酸1-二甲苯4）

I二甲苯30秒钟，

II二甲苯30秒钟，

中性树胶封片。

HE染色操作流程：

HE染色，即是苏木精-伊红染色法，是形态学最常用的染色方法，在质量较佳的HE染色切片上，各种组织或细胞的一般形态结特点都可以观察到。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

革兰染色的正确顺序是结晶紫、碘液、95%乙醇、稀释复红。

在结晶紫初染和碘液媒染之后，在这个细胞壁里面，细胞壁里面产生了复合物，这个时候由于细胞壁是非常厚的，而且肽聚糖网层又多又密，在遇到乙醇脱色处理的时候，网孔变小了。

这个时候乙醇处理就没有缝隙出现，这个时候相关的复合物，在细胞壁里面就会牢牢的停留住，不过这个时候仍然会呈现紫色，后面遇到脱色剂了之后有复合物溶出，虽然已经过了驼色的处理但是仍然是没有颜色，后面再经过红色染料复染，革兰氏阴性菌就变成了红色。

扩展资料

革兰氏染色反映是细菌分类和评定的必要性状。它是1884年由荷兰医生Gr二开创的。

革兰氏染色法（Gram stain）不但能观查到细菌的形态并且还可将全部病菌区别为两类：上色反映呈紫蓝色的称之为革兰氏阳性病菌，用G表明；上色反映呈鲜红色（复染色调）的称之为革兰氏阳性菌呈阴性病菌，用G一表明。

病菌针对革兰氏染色的不一样反映，是因为他们植物细胞的成份和构造不一样而导致的。