吸光度260/280是什么意思

一般来说OD260代表核酸的吸光度，OD280代表蛋白质的吸光度。OD230来评估样品中是否存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等。

OD是optical density（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度， OD=lg（1/trans），其中trans为检测物的透光值。

扩展资料：

吸光系数与入射光的波长以及被光通过的物质有关，只要光的波长被固定下来，同一种物质，吸光系数就不变。

当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时，溶质吸收了光能，光的强度减弱。吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。

吸光度用A表示。

A=abc，其中a为吸光系数，单位L/(g·cm)，b为光在样本中经过的距离（通常为比色皿的厚度），单位cm ， c为溶液浓度，单位g/L。

A=Ecl

影响吸光度的因数是b和c。a是与溶质有关的一个常量。此外，温度通过影响c，而影响A。

参考资料来源： 百度百科-OD260/280比值

根据A260/A280值判断DNA溶液的浓度：

根据数据，当样品DNA的A260/A280为1.8-2.0时，认为已达到所要求的纯度。在样品中含有蛋白质或苯酚等杂质时，会使A260/A280的比值发生改变。如果A260/A280<1.7,说明蛋白质没有除干净。如果A260/A280>2，说明RNA没有除干净或DNA已变性。

原理

蛋白中trp、tyr、phe的吸光度为280nm，所以280nm常用来表示蛋白质吸光度；而260nm为DNA的吸光度。

样品中如果含有蛋白质及苯酚，A260/A280比值会明显下降。对于纯的样品只要读出260 nm 的A值即可以算出含量。通常以A值为1相当于50微克/ml 双螺旋DNA，或者40微克/ml 单链DNA（RNA），或者20微克/ml 寡核苷酸计算。

苯胺在酸性介质中会形成苯胺盐阳离子，苯胺形成盐后，氮原子的未成键电子消失，氨基的助色作用也随之消失，因此苯胺盐的吸收带也从230nm和280nm蓝移到203nm和254nm。

苯酚在碱性介质中能形成苯酚阴离子，其吸收带将从210nm和270nm红移到235nm和287nm，苯酚分子中OH基团含有两对孤对电子，与苯环上π电子形成n→π共轭，当形成酚盐阴离子时，氧原子上孤对电子增加到三对，使n→π共轭作用进一步加强，从而导致吸收带红移，同时吸收强度也有所加强。

A280nm 是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50％蛋白质/DNA溶液；

A230nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A230产生负值主要是由于在很低DNA 浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230的负值会被校正。

A260/A280和A260/A230 是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5，A260 / A280的比值， 用于评估样品的纯度， 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。 A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度，A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。A280是蛋白质的吸光度。

我的建议：将所提取的DNA跑琼脂糖凝胶电泳，然后回收纯化一下。

另提供一种CTAB改进法配方：

组份 Tris-HCl （pH8.0） 　EDTA （pH8.0） NaCl CTAB PVP40 β-巯基乙醇

终浓度 100 mM 20 mM 1.4M 3%(W/V) 5%(W/V) 2%（V/V）使用前加入

PVP（聚乙烯吡咯烷酮）是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。

希望对你有所帮助！

A260nm

是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为0.1至1.0。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于0.05，检查是否存在操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响。DNA样品的A260

吸光度值是否>0.1。（请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值<0.1）；

朗伯－比尔定律：

A吸光值

I0入射光强度

I投射光强度

c吸光物质的摩尔浓度（mol/L）

d光通过的液层厚度（cm）

ε摩尔吸光系数（Lmol-25px-1）

2.

A280nm

是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50％蛋白质/DNA溶液

3.

A230nm

是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA和

RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A230产生负值主要是由于在很低DNA

浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230的负值会被校正。

4.A320nm或A340nm

为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。该值应该接近0.0。如果不是，标明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。纯样品的A320一般是

0。

5.A260/A280和A260/A230

是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA，在pH7-8.5

下其比值应该在2.0

或2.5，A260

/

A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280

nm。纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8

或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。

A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度，A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0

。A280是蛋白质的吸光度。

第 2 页

苯酚在紫外区有三个吸收峰，在酸性或中性溶液中，λmax为196.3nm，210.4nm和269.8nm在碱性溶液中λmax位移至207.1nm，234.8nm和286.9nm。下图为0.021g/L的苯酚分别在0.010mol/L 盐酸溶液与氢氧化钠溶液中的紫外吸收光谱。由图知在盐酸溶液与氢氧化钠溶液中，苯酚的紫外吸收光谱有很大差别，所以在用紫外可见吸收分光光度分析苯酚时应加缓冲溶液，本实验是通过加氢氧化钠强碱溶液来控制溶液pH值的。

因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样品，比值大于 1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于 1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A 230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0。A 320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A 320 一般是 0。

我都n久没提过dna了，考虑下你用的试剂，看看有没有酚污染的可能