茶多酚实验为什么没有形成蓝紫色络合物

易溶于水、乙醇、乙酸乙酯，微溶于油脂。

茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。主要为黄烷醇（儿茶素）类，儿茶素占60~80%。 类物质茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”。

茶多酚为淡黄至茶褐色略带茶香的水溶液、粉状固体或结晶，具涩味，易溶于水、乙醇、乙酸乙酯，微溶于油脂。耐热性及耐酸性好，在pH2~7范围内均十分稳定。略有吸潮性，水溶液pH3~4。在碱性条件下易氧化褐变。遇铁离子生成绿黑色化合物。

茶多酚具有较强的抗氧化作用，尤其酯型儿茶素EGCG，其还原性甚至可达L-异坏血酸的100倍。4种主要儿茶素化合物当中，抗氧化能力为EGCG>EGC>ECG>EC>BHA，且抗氧化性能随温度的升高而增强。茶多酚除具有抗氧化作用外，还具有抑菌作用，如对葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌等有抑制作用。茶多酚可吸附食品中的异味，因此具有一定的除臭作用。对食品中的色素具有保护作用，它既可起到天然色素的作用，又可防止食品退色，茶多酚还具有抑制亚硝酸盐的形成和积累作用。

1． 浸提 称取一定重量过20目的茶叶末，加入其重量15-25倍的60℃-80℃的热水，搅拌下恒温浸提20min-30min,过滤得到茶叶浸提液。即： 以料液比:1/15、1/20、1/25，提取温度:60℃、70℃、80℃，提取时间:20min、25min、30min为3因子3水平进行正交实验，然后对实验结果进行极差分析，选出最优组合，做验证性实验，如若符合最佳结果，进行下面的实验 1（料液比） 2（提取温度） 3（提取时间） 因素1 1:15 60℃ 20min 因素2 1:20 70℃ 25min 因素3 1:2580℃ 30min 测浸提液体积，并取样分析浸提液中茶多酚的含量，计算浸提液中茶多酚的总量、茶多酚的浸提率。

2．盐析 加氯化钠于茶叶浸提液中，质量分数为2-6％，静置0.5-1.5h后过滤（可用抽滤或者离心的方式）。

3．沉淀 在上述滤液中加入茶叶重量2%-5%的亚硫酸氢钠，然后加入茶叶重量15%-25%的硫酸铝饱和溶液，加热至上述最优组合温度，用10%-20%的碳酸氢钠溶液在快速搅拌下调节pH至5-6，此时有大量沉淀析出，沉淀自然沉降一段时间后过滤，最后用等体积最有温度热水洗涤沉淀三次。

4．酸溶 将沉淀在快速搅拌下放入到茶叶重量1-3倍的pH=2.5-4.5的盐酸水溶液溶解沉淀，控制酸转溶液的pH=2.5-4.5，酸转时间10min-50min,少量胶状沉淀经离心分离出去。即： 以酸浓度：pH=2.5，pH=3.5，pH=4.5，料酸比：1:1,1:2,1:3，酸转时间：10min,30min,50min为3因子3水平进行正交实验，在最优条件下测酸转溶液体积然后对实验结果进行极差分析，选出最优组合。1（酸浓度） 2（料酸比） 3（酸转时间） 因素1 pH=2.5 1:1 10min 因素2 pH=3.5 1:2 30min 因素3 pH=4.5 1:3 50min测酸转溶液体积并取样分析计算酸转溶液中茶多酚的含量和总量，计算茶多酚经过盐析、沉淀及酸溶后的回收率。

5．萃取 加入茶叶重量2％－5％的NaHSO3至酸转溶液中，然后用体积0.3-1.5倍的乙酸乙酯萃取1－5次，每次萃取时间2-10min，合并萃取液。 测萃余相体积，并取样分析计算萃余相中茶多酚的总量，计算茶多酚的萃取率。

6．洗涤 加入茶叶重量1-3％的维生素C至萃取液体积0.4倍的水中，用柠檬酸调节水溶液的pH=2.5-3.0，等分成2份对乙酸乙酯萃取液洗涤两次。

7．蒸发浓缩 将洗涤后的乙酸乙酯相在50～70℃下真空蒸发回收乙酸乙酯，待浓缩成膏状物时，加入膏状物2倍体积的无水乙醇洗涤挂在壁上的物料，继续浓缩成稠的膏状物。 计算其中茶多酚的含量。 提取过程中茶多酚的分析测定方法（定量） 准确吸取待测溶液1ml，将其稀释1～25倍（稀释成15倍），再从稀释液中准确吸取1ml，注入25ml的容量瓶中，加水4ml和酒石酸亚铁溶液5ml，充分混合，再加pH=7.5的磷酸盐缓冲溶液至刻度，用1cm比色杯，在波长540nm处，以试剂空白液作参比，测定吸光度。 计算公式： 茶多酚（g/ml）=1.957AX/500 A:吸光度 X:稀释倍数。 1）酒石酸亚铁溶液 1g硫酸亚铁和5g酒石酸钾钠用水溶解并定容至至1L，放置过夜后使用。 2）pH=7.5的磷酸二氢钾缓冲液 A液：称取磷酸氢二纳23.877g,溶解并定容至至1L； B液：称取经110度烘干2h的磷酸二氢钾9.078g，加水溶解并定容至至1L A液85ml和B液15ml混匀即可。

Al3+和Fe3+会与茶叶中的茶多酚反应，所以用矿物质含量过高的水泡茶会是茶汤加深，茶味变苦涩。茶叶灰化后，Al3+和Fe3+还是存在的，加入盐酸就会将Al3+和Fe3+变为游离态，所以可以测得出

实验四 茶叶中茶多酚含量的测定——高锰酸钾直接滴定法

一、目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作

二、原理

茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。根据消耗1mL mL的高锰酸钾相当于茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。

三、仪器与试剂

仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。

试剂：1、%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。

2、%草酸溶液：准确称取草酸，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。

3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。准确吸取%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。

四、测定步骤

1、供测试液的准备：

准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。

2、测定：

取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。同时做空白测定。

五、结果计算

X=

式中：X—茶多酚的含量，% ，B—空白消耗的高锰酸钾毫升数，mL

A—样品消耗的高锰酸钾毫升数，mL ω--高锰酸钾的浓度，%

m—样品的质量g， V1—测定用供测试液的体积，mL ，V2--供测试液的体积，mL

实验三 茶叶中茶多酚含量的测定——酒石酸铁比色法

一、实验目的：

1、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作。

2、进一步熟悉721－分光光度计的使用。

二、原理：

茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的20％～35％，由约30种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。按其化学结构分为四类：（1）儿茶素类，属黄烷醇类；（2）黄酮及黄酮醇类；（3）花白素及花青素，即羟基-［4］-黄烷醇及其钾盐；（4）醋酸及缩酚酸类。其中以黄烷醇类化合物最重要（占多酚的80％左右）。纯儿茶素一般为白色无定形粉末，在空气中极易氧化成棕色物，能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂中。茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。对热、酸较稳定，2%的溶液加热至120 ℃并保持30min，无明显变化。在碱性条件下易氧化变质。

实验表明，茶多酚清除活性氧自由基作用的活性，为等量维生素C的493倍，且能有效消除脂质过氧化产物丙二醛，具有降血脂的显着功效。还有研究表明，茶多酚还具有抑制痢疾、伤寒、霍乱、金黄色葡萄球菌等有害菌的作用；具有较强的抗放射性作用，以及在抗衰老，抑制瘤细胞，预防心脑血管疾病等方面都显示出很好的效应，是一种有开发前景的天然抗氧化剂。1988年7月我国已批准茶多酚作为食品添加剂。国内已建立了茶多酚工业化生产线，并开发研制出了茶多酚的第二代产品即儿茶素（TC）。

茶多酚的测定方法有高锰酸钾直接滴定法和酒石酸铁比色法，由于高锰酸钾直接滴定法操作比较复杂，且靠肉眼观察颜色判断终点，如果样品溶液颜色较深时，可能影响测定结果。本实验将应用酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量。

酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。因此可以用比色方法测定。该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。

三、仪器与试剂：

仪器：分光光度计

试剂：

（1）酒石酸铁溶液：称取 FeSO4·7H2O ，含 4个结晶水的酒石酸钾钠，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至1000mL

（2）的磷酸缓冲液： Na2HPO4·12H2O ，·2H2O，加蒸馏水溶解后．用蒸馏水稀释至1000mL．

四、步骤：

（l）样品溶液的制备方法：准确称取茶叶磨碎样品1g于200mL三角烧瓶中，加入沸水80mL，在沸水浴中浸提30min，然后过滤、洗涤，滤液倒人100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。

（2）测定：吸取样品溶液 1mL于 25mL容量瓶中，加蒸馏水4mL，加酒石酸铁溶液5mL，摇匀，再加入磷酸缓冲液稀释至刻度。以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白。选择540nm波长和1cm的比色杯测定吸光度。

五、计算：

式中：ω—茶多酚的含量，%，A—样品溶液的吸光度值，T—样品溶液的总体积，mL

V—测定用样品溶液的量，mL，m—样品质量，g

—用1cm比色杯，当吸光度为时，试液中茶多酚的浓度为mL

六、说明及注意事项：

1、磷酸盐缓冲液在常温下容易生长霉菌，放冰箱中保存或临用时现配。

2、样品溶液制备中的注意事项：

（1）较透明的样液，如果味茶饮料，将样液充分摇匀后，直接取样测定。

（2）较浑浊的样液，如果汁茶饮料、奶茶饮料等，称取充分混匀的样液25mL于50mL容量瓶中，加95%的乙醇15mL充分混匀，放置15min，用水定容至刻度，过滤。

（3）含有碳酸气的样液，如农夫汽茶，量取充分混匀的样液100mL于250mL的烧杯中，称取其总量，于电炉上加热至沸，在微沸状态下加热10min，以将二氧化碳排除，放冷，用水补足原来的质量，摇匀，备用。

测定

准确吸取试液1 ml， 注人2 5 m L的容量瓶中， 加水4 ml和酒石酸亚铁溶液5 ml， 充分混合， 再加p H 7 . 5 磷酸盐缓冲液至刻度， 用10mm比色杯，在波长540nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度( A)

茶叶研碎，取10g，加20%乙醇100ml，70~80度水浴30min，共提取3次，合并提取液，加入2gZnCl2作沉淀剂，加NaHCO3调pH至6.4~8.0，静置60min，离心或过滤，弃去水层，沉淀加40%硫酸溶解，乙酸乙酯萃取水层3次，合并乙酸乙酯，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸去乙酸乙酯，可得茶多酚

补充一下...如果要制取茶多酚,要用绿茶,别的茶多酚含量低,如果是工业制取茶多酚的原料是绿茶的茶碎茶末,或者绿茶老叶

茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。其中以黄烷醇类物质（儿茶素）最为重要。 茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。本草千叶IT茶中含有丰富的茶多酚 (学名Camellia sinensis)。研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”。

1、物理性质

茶多酚在常温下呈浅黄或浅绿色粉末，易溶于温水(40℃一80℃)和含水乙醇中；稳定性极强，在pH值4—8、250℃左右的环境中，1.5个小时内均能保持稳定，在三价铁离子下易分解。1989年被中国食品添加剂协会列入GB2760-89食品添加剂使用标准，1997年列为中成药原料。

2、化学性质

茶多酚是从茶叶中提取的全天然抗氧化食品，具有抗氧化能力强，无毒副作用，无异味等特点。

茶多酚是指茶叶中一大类组成复杂、分子量及其结构差异很大的多酚类及其衍生物混合物，主要由儿茶素、黄酮醇、花色素、酚酸及其缩酚酸等组成的有机化合物，以儿茶素为主的黄烷醇类化合物占茶多酚总量的60%一80%，其中含量最高的几种组分为L—EGCG(50%-60%)、L—EGC(15%-20%)、L—ECG(10%-15%)和L—EC(5%-10%)。

茶多酚提取、分离工艺研究

茶多酚(Tea Polyphenol简写TP)是一类以儿茶素(Catechine)类为主体的多酚类化合物，在茶叶中含量一般为8％-20％。由于其酚性羟基易氧化而提供质子H＋，而具有抗氧化和消除自由基作用。茶多酚抗氧化能力比人工合成的抗氧化剂BHA、BHT和PG强，且安全无毒，是一种理想的天然抗氧化剂。研究还证明：TP有多种生理活性作用：降血脂、抗血栓；降血糖；降血压；抗突变、防癌；抗菌、抗病毒以及抑制口臭等。

对茶多酚的提取工艺国内外做过不少研究，但应用于工业化生产尚存在一些问题。我

们利用低级绿茶为原料、进行了5种茶多酚精制试验，对茶多酚提取、分离工艺进行考察，初

步找出一条比较合理的工艺，可作为工业化生产茶多酚的参考。

1材料与方法

1．1 绿茶：市售7级绿茶。

试剂：硫酸亚铁、酒石酸钾钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、均为分析纯。乙醇：食用级。

1．2 茶多酚含量测定：采用GB8313-87 ·

1．3 茶多酚提取：

9倍量60%乙醇 滤液1

绿茶粉末—————→过滤＜ 5倍量60%乙醇 滤液2

75℃3h滤渣——————→过滤＜

75℃2h 滤渣（弃）

回收乙醇 离心

合并滤液————→溶液—→上清液(分5份)

1．4 精制

吸附树脂1 水洗至无色 乙醇洗脱回收乙醇蒸干

方法A：上清液—————→—————→—————→—————→———→成品

吸附树脂1 水洗至无色 NaOH液洗脱 中和 吸附树脂 水洗 乙醇洗脱 回收乙醇 蒸干

方法B：上清液————→————→—————→——→———→—→———→———→——→成品

吸附树脂1 水洗至无色 碱性乙醇洗脱 回收乙醇蒸干

方法c：上清液—————→—————→—————→—————→———→成品

吸附树脂2 水洗至无色 乙醇洗脱回收乙醇 蒸干

方法D：上清液—————→—————→—————→—————→———→成品

CaCl2溶液 离心 HCl酸化乙酸乙酯萃取回收乙酸乙酯 蒸干

方法E：上清液———————→——→沉淀————————→—————→———→成品

NaOH调节 PH=8.5

2 结果和讨论

以茶多酚的得率与含量为指标比较上述5种不同的精制方法，其结果见表1。

表1 不同精制方法茶多酚得率与含量

方法 A B C D E

得率(％) 5.4 3.7 9.8 8.0 8.9

含量 9986 99 75 90

从表1可见，综合得率和含量，方法C最佳。

吸附树脂1分子中含有多数酰胺基，在水溶液中能与酚羟基通过氢键结合而被吸附。如果化合物分子中酚羟基数目多，则被吸附越强，从而与不含酚羟基的化合物分离，故吸附树脂1所得茶多酚制品含量高。采用方法C，因乙醇洗脱液中含氨水，通过氨水和吸附树脂1的酰胺基形成新的氢键代替原有的氢键，而使茶多酚解吸下来，提高得率(9．8％)，并降低乙醇用量，而且流出液pH接近中性，在浓缩时，残余的氨水随蒸汽而蒸发掉，不影响产品质量。因此最佳提取方法为绿茶用乙醇提取后，回收乙醇，离心后的上清液，经吸附树脂1吸附，用碱性乙醇(氨水调节pH=8．5)洗脱，浓缩、蒸干，不仅提高茶多酚含量和得率，且工艺简单，成本低，无污染，适宜于工厂化生产。

(1)了解什么是茶多酚，茶多酚有什么作用（说明为什么要研究这个课题）

(2)了解茶多酚常用的提取方法有哪些（如果是做新方法的研究，这里应说明传统的提取方法的优势和劣势）。

(3)新方法的阐述，以及该方法对比以前的方法都有什么优点。

(4)总结。

如果是企业用的则应多出：

用什么原料提取该物质，原料的产地及分布，最佳采收季节，原料的质量如何评判，然后是提取用的方法，最后还要附上成本核算。

一.实验目的：

本试验的目的就是学习钙离子沉淀提取茶多酚的关键步骤方法和特点

二．村料与设备：

1.材料:绿茶磨碎样、沸水、脱脂棉、生石灰（兑成饱和石灰水）、pH试纸 、柠檬酸（5%）

2.设备：茶样粉碎机、水浴锅、漏斗、三角瓶、容量瓶、烧杯、离心机、玻棒

三．实验方法：

1．取绿茶磨碎样20克加人250ml沸水水浴浸提30分钟，棉饼过滤，滤液

定容为250ml，制得茶汤

2．取浸提茶汤5ml于100ml烧杯，先测试其PH值，再用饱和石灰水调

pH值至9.0,11.0；分别记录石灰水的用量

3．分别取两份浸提茶汤50ml于250ml烧杯中，根据2的结果，用饱和

石灰水调pH值分别至9.0,11.0；记录石灰水的用量。然后静置沉淀一

小时，每15分钟比较观察其变化

4．将沉淀弃上清夜后在4000转/分钟离心5分钟，弃上清夜

5．将沉淀收集于100ml小烧杯，缓慢加入5%的柠檬酸，边加边快速搅拌

直至全部溶解，记录酸的用量，并测试PH

四．试验结果：

将5ml茶汤PH调为9.0所用石灰水所用量为5.2ml；调为11.0所用石灰水量为7.9ml。将50ml茶汤PH调为9.0所用石灰水量为45ml；调为11.0所用石灰水量为60ml。溶解所用柠檬酸分别为11.2ml、15.8ml,PH均为3

过河卒推荐盐沉淀提取法

此法将茶叶用热水或乙醇溶液浸提过滤，调节滤液的pH值为碱性，在滤液中加入沉淀剂使茶多酚沉淀，过滤后滤液用于提取咖啡因，沉淀用稀 H2SO4溶解后用乙酸乙酯萃取, 得到含茶多酚的乙酸乙酯溶液，再经减压蒸馏浓缩、干燥得到茶多酚