三氯乙酸沉淀蛋白的作用机理是什么啊

故事如下“

第一次世界大战中,索坶河前线德法交界处法军哨兵林立,对过往行人严加盘查。一天,有位挎篮子的德国农妇在过边界时受到盘查。篮内都是鸡蛋,毫无可疑之处,一年轻好动的哨兵顺手抓起一只鸡蛋无意识地向空中抛去,又把它接住,此时那位农妇立即变得情绪很紧张,这些引起了哨兵长的怀凝,鸡蛋被打开了,只见蛋清上布满了字迹和符号。

原来,这是英军的详细布防图,上面还注有各师旅的番号。这个方法是德国的一位化学家给情报人员提供的,其做法很简单：用醋酸在蛋壳上写字,等醋酸干了以后,无任何痕迹。但再将鸡蛋煮熟,字迹便会奇迹般地透过蛋壳印在蛋清上。

为什么化学家能巧出主意,蛋中藏机密呢?这主要是醋酸与其它物质反应的结果。鸡蛋壳的主要成分是碳酸钙,用醋酸写字时,醋酸与鸡蛋壳碳酸钙反应,生成了醋酸钙,然后醋酸渗入蛋壳,和鸡蛋清发生反应,鸡蛋清是可溶性蛋白质,蛋白质是由多个a-氨基酸分子间失水形成酰胺键而组成的链状高分子化合物,它不很稳定,在受热、紫外线照射或化学试剂如硝酸、三氯乙酸、单宁酸、苦味酸、重金属盐、尿素、丙酮等作用下,发生蛋白质凝固,变性。渗入的醋酸,与鸡蛋清发生反应,在蛋清上留下了特殊的痕迹,待鸡蛋煮熟后就会有清晰可认的字迹来。所以化学家巧用醋酸反应,情报妙藏蛋中。

一、实验目的与原理

鸡卵粘蛋白存在于鸡蛋清中,对胰蛋白酶有强烈的抑制作用,高纯度的鸡卵粘蛋白抑制胰蛋白酶的分子酶的分子比为1:1.鸡卵粘蛋白在中性或酸性溶液中对热和高浓度的脲都是相当稳定的,而在碱性溶液中较不稳定.

由于鸡卵粘蛋白对胰蛋白酶有强烈的抑制作用,因此可以用鸡卵粘蛋白做亲和配基配制纯化胰酶的亲和材料.

二、材料与试剂：

1．材料：新鲜鸡蛋2只

2：仪器：抽滤瓶500－1000ml、烧结漏斗、移液器、磁力搅拌器

3：试剂：

10％TCA,用固体NaOH调调PH至1.05－1.10,需要50ml、5N HCL、5N NaOH、冷丙酮、胰蛋白酶液、BAEE-0.05M,PH8.0Tris-HCL缓冲液（每ml含0.34BAEE和2.22mgCaCL2）,50ml

pH8.0,0.1M Tris-HCL缓冲液

三、操作步骤

1,取两只新鲜鸡蛋,得蛋清50ml,置于烧杯中,外用温水浴25℃－30℃,在不断搅拌条件下,缓慢加入等体积得三氯乙酸－丙酮（1:2V/V）,立即出现大量白色絮状沉淀,加完后最终PH约3.5,再继续搅拌30min,然后在4℃冰箱中放置过夜.

2,次日用布氏漏斗抽滤,得黄绿色清液.

3,边搅拌边加入4℃预冷的丙酮200ml沉淀蛋白,在4℃放置2h之后将上清液小心倒入瓶中回收,下部沉淀部分于4000rpm离心5min,收集沉淀.

4,将沉淀溶于10ml无离子水中,对无离子水（50倍）透析4h,换水两次,再对碳酸钠缓冲液透析过夜,4000rpm离心10min ,去除不溶物.

三氯乙酸是一种有机酸，使多糖提取液中的蛋白质与有机酸作用而变性沉淀。 该法是 在多糖水提液中滴加 5 %～10 %与多糖水提取液等体积的三氯乙酸，混匀静置过夜，离心除 去胶状沉淀，重复以上的操作直至溶液不再继续混浊为止，得无蛋白质的多糖。 三氯乙酸浓度越大，除蛋白质效果越好，但对多糖的影响也越大，可能是三氯乙酸对多糖结构具有破坏作用，使多糖降解，而且这种破坏作用随着三氯乙酸浓度增大而增强。 植物多糖常采用三氯乙酸法除蛋白质，也可先用蛋白水解酶，使样品中的蛋白质部分降解后再用 Sevag 法效果更好；微生物多糖去除蛋白常采用 Sevag 法、三氟三氯乙烷法；也可用盐析法、有机溶剂萃取等方法除蛋白。