dna的提取方法
一.DNA的提取方法简介
为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA.由于DNA分子在生物体内的分布及含量不同，要选择适当的材料提取DNA。
动植物中，小牛胸腺۰动物肝脏۰鱼类精子，植物种子的胚中都含有丰富的DNA。
微生物中，谷氨酸菌体含7%~10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠肝菌含9%~10%。
从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。
对于低等生物。如从病毒中提取DNA 比较容易，多数病毒DNA 分子量较小，提取时易保持其结构完整性。
从细菌及高等动植物中提取DNA难度大一些。细菌DNA 分子量较大，一般达2×10 道尔顿。因此易被机械张力剪断。细菌DNA，除核DNA 外，还有质粒DNA 等。
1、核酸的理化性质
RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。要从细胞中提取DNA 时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖，RNA 及无机离子等，从中分离DNA 。
DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中的溶解度很大，比纯水高2倍。
RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小，在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此，在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。
2.细胞的破碎
细菌有坚硬的细胞壁，首先要破碎经胞。方
法有三种：①机械方法：超声波处理法、研磨法、匀浆法；②化学试剂法：用SDS处理细胞； ③酶解法：加入溶菌酶或蜗牛酶，都可使细胞壁破碎。
由于高等动物DNA 主要存在于细胞核与线粒体中，所以提取时有两个困难（高等植物与此类似）：
①破碎细胞难；从处死动物٠分离组织器宫到破碎细胞费时长。在此时期间DNA 可能会被DN ase降解，而动物组织：特别是肌肉组织很难破碎,即使是较易破碎的肝٠肾等组织也往往使用组织匀浆器，易造成DNA 断裂。
②分子量大，一般比细菌的大2—3个数量级，比病毒的大4—5个数量。对不同生物材料，要根据具体情况选择适当的分离提取方法。
3.DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.
（2）.阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA.
（3）.苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 .
（ 4）.水抽提法:
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
甲苯不溶于水，所以不会影响？太好笑了。
穿孔萃取法测试木板的甲醛就是通过水与甲苯交换，把甲醛从甲苯中提取到水中。
好了，言归正传。
一般来说，如果方法中没有指明温度，则用常温下的水去洗；如果写的是热水，则用60℃以上的水去洗。通常洗3次就可以了。
我想，方法的目的要么是根据待测物在甲苯和水中的溶解性差别大，通过水洗把待测物转移到水中，然后测试水；要么就是用水出去甲苯提取液中的干扰物，三次足够了。
或者，将甲苯提取液和水一起放在超声水浴中，超声30分钟，取出静置分层就可以了。
目的：
1.掌握稀碱（NaOH）法分离酵母RNA的原理与方法
2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。
二、原理：酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA。提取的RNA有不同程度的降解。由此即得到RNA的粗制品。
三、器材
四、试剂和材料
将2mL 10％三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入 到400 mL浓盐酸中。
9．苔黑酚乙醇溶液 10 mL ：溶解6g苔黑酚于100 mL 95％乙醇中（可在冰箱中保存1个月）。
10．酵母粉 200 g
11.地衣酚（3,5—二羟甲苯试剂）：取比重1.19HCl 100ml，加入FeCl3·6H20 100mg及二羟甲苯100mg，混匀溶解后，置于棕色瓶中，此试剂必须在临用前新鲜配制。
五、操作
1.将15g酵母悬浮于90 mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液 中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150毫升锥形瓶 中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心（3000 r／min）15分钟，将上清液缓缓倾入30 mL酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离心（3000 r／min）3分钟。弃去清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。
2.核糖的鉴定：取试管两只，分别标明测定管与对照管，然后依次加入下列各试剂。
管号 RNA水解液 5％H2SO4 3，5-二羟甲苯
测定管 4滴 不加 6滴
对照管 不加 4滴 6滴
将两试管放入沸水浴内加热10分钟，比较两管之颜色。
实验结果
测定管由黄色变成绿色为阳性反应，对照管没有明显颜色反应。
注意事项
1.样品倒入玻璃离心管不能太满；
2.离心前玻璃离心管（套上塑料管套）放在天平上平衡好；
用硝酸银鉴定嘌呤碱基属于核酸的定性分析
【目的】
1 ．掌握测定核酸 的组成从而 定性分析 DNA 或 RNA 的方法。 2 ．熟悉测定核酸的组成从而定性分析 DNA 或 RNA 的 原理。
【原理】
RNA 和 DNA 均可被硫酸水解生成含氮碱（嘌呤碱与嘧啶碱）、戊糖（ RNA 中的核糖与 DNA 中的脱氧核糖）和磷酸。水解产物可用下列方法鉴定。 1 ．嘌呤碱的鉴定原理
嘌呤碱在弱碱性环境中能与硝酸银作用形成嘌呤银化合物。初为乳白色，稍放久为浅灰褐色絮状物。
2 ．核糖的鉴定原理
核糖经浓盐酸或浓硫酸作用，脱水生成糠醛，后者能与 3 ， 5- 二羟甲苯缩合形成鲜绿色化合物。该反应需三氯化铁作为催化剂。
3 ．脱氧核糖的鉴定原理
脱氧核糖在浓酸中脱水生成 ω- 羟基 γ- 酮基戊醛，后者与二苯胺作用生成蓝色化合物。
4 ．磷酸的鉴定原理
定磷试剂中的钼酸铵在酸性环境中以钼酸形式与样品中的磷酸反应生成磷钼酸。后者在还原剂氨基萘酚磺酸作用下形成蓝色的钼蓝。
【器材】
1 ． 试管与滴管
2 ． PH 试纸
3 ． 沸水浴
4 ． 带有长玻璃管的胶塞
【试剂】
1 ． 5% 硫酸
2 ． 5% 硝酸银溶液
3 ．浓氨水
4 ． 3,5- 二羟甲苯试剂
取 FeCl 3 ·6H 2 O 1.0g 溶于 6ml 水中，加浓盐酸 100ml ，混匀，此为 A 液。另配制 6%3,5- 二羟甲苯乙醇溶液为 B 液。临用时用 A 液 100ml 加 B 液
3.5ml 混合即可。
5 ．二苯胺试剂
取二苯胺 1.0g 溶于 100ml 冰乙酸中，加浓硫酸 2.75ml 。此二苯胺试剂遇光易变绿色，故临用前配制，贮于棕色瓶中，置冰箱保存。
6 ．钼酸试剂
取钼酸铵 2.5g 溶于 20ml 水中，加浓硫酸（ A·R ） 8.5ml, 冷却后再加水至 100ml ，放冷处可保存 4 周左右。
7 ．氨基萘酚磺酸溶液
取 15% 亚硫酸氢钠溶液 195ml 与 20% 亚硫酸钠溶液 5ml 混合，加氨基萘酚磺酸 0.5g ，在热水浴中搅拌使固体溶解（如不全溶，可滴加 20% 亚硫酸钠数滴，至多不超过 1ml 即可）。此溶液置冷处可保存 2-3 周，如颜色变黄需重新配置，临用前将上述溶液以蒸馏水稀释 10 倍应用。
8 ．核酸样品
称取粗制核酸样品 10mg/ 每组。或者，取本教材实验九从动物组织中提取出的核酸作为本次实验的样品。
【操作】
1 ．核酸的水解
向加入 10mg 核酸样品的试管（或者，向有核酸沉淀的离心管）中加入 5% 硫酸 4ml ，用玻璃棒搅匀，再用带长玻璃管的塞子塞紧管口，于沸水浴中加热 15min ，既得核酸的水解液。
2 ．核酸的鉴定
（ 1 ）嘌呤碱的鉴定：取小试管 2 支，分别标明测定与对照，按下表依次加入试剂，混匀，放置 15min ，观察嘌呤银沉淀的生成，并记录颜色。
注：加氨水（约 2 ～ 3 滴）以中和酸，呈碱性即可，需用 PH 试纸测试。若加氨水过多，则生成银氨络离子 [ Ag(NH 3 ) 4 ] + ，使银离子减少，嘌呤银沉淀减少。
（ 2 ）核糖的鉴定：取试管 2 支，分别标明测定与对照，按下表操作：
将两管同时放入沸水浴加热 15min ，观察颜色变化并记录。（煮 3 ～ 5min ，即可先观察）
（ 3 ）脱氧核糖的鉴定：取试管 2 支。分别标明测定与对照。按下表操作 :
将两管同时放入沸水浴中加热 10min ，观察颜色变化并记录。
（ 4 ）磷酸的鉴定：取试管 2 支，分别标明测定与对照，按下表操作：
于室温放置 10min 后，观察颜色变化并记录。
【注意事项】
1 ．为了安全，核酸水解时，避免将 长玻璃管的管口对准人 。
2 ．嘌呤碱的鉴定中氨水不能加的过多。
1,煤焦化副产的粗苯馏分中含甲苯15％～20％(质量)，其数量与原料煤的性质、焦化深度有关。一般生产每吨焦炭可副产甲苯1.1～1.3kg。用硫酸洗除粗苯馏分中不饱和烃和杂质，再经碱中和、水洗、精馏，可得到纯度很高的甲苯。
2,催化重整油中含芳烃50％～60％(体积)，其中甲苯含量可达40％～45％。催化重整油采用二甘醇、环丁砜、Ν －甲基吡咯烷酮等溶剂进行萃取以回收芳烃(见芳烃抽提)，最后经精馏得到高纯度甲苯。
3,裂解汽油中芳烃含量为70％（质量）左右，其中15％～20％是甲苯。裂解汽油经两段加氢脱除二烯烃、单烯烃和微量硫，再经萃取、精馏，可得到纯度99.5％以上的甲苯。
实验室这是一个烷基化的过程啦 傅-克烷基化咯
C6H6+CH3Cl=三氯化铝=C6H5CH3+HCl（反应号应用箭头 ）
生物碱是碱性的，与酸反应生成可溶于水的盐，加草酸就是用来中和生物碱生成可溶于水的盐的，这样就又能把生物碱弄到水相中，达到提纯的目的。
操作方法应当是一边添加草酸，一边检测pH，直到接近6.5~7时，停止添加草酸。
碳环密封资料碳环密封属于浮动密封的一种，因其材质为碳石墨而得名。碳环密封的结构包括环形密封腔体和环形轴套，密封腔体内有数量不等的环形槽，槽内至少装有二个截面为矩形的环形石墨密封环，石墨密封环的内径与环形轴套之间有0.01~0.04mm的间隙，轴套外表面涂有耐磨层，涂层材料一般为三氧化二铝或氧化二硌。
甲基是由一个碳原子和三个氢原子组成的化学基团。甲基化包括DNA甲基化和蛋白质甲基化，可以分别对核酸和蛋白质的结构或功能进行修饰，与恶性肿瘤、衰老、老年痴呆等众多疾病相关，是表观遗传学的重要组成部分。
2、 异丁烯法由异丁烯与苯在三氯化铝存在下烃化而得。将苯置于反应器中，加入催化剂三氯化铝，然后在1～1.5h内从反应器底部通入计量的异丁烯，反应放热，外部用冷却水冷却。反应结束后，加水分解催化剂，将液体转移到容器中静置分层，放出水层，有机层依次用水、5%碳酸钠水溶液、水洗至中性，静置分去水层，将苯层打入蒸馏釜进行蒸馏，80℃以下为苯/水混合物，80～160℃是苯，回收套用，160～180℃为叔丁苯馏分，釜底残渣为多烷基苯。投料量56份(质量)时得产品19份，回收量37份，产率59%。
3、 由苯、异丁基氯和三氯化铝制备，或用发烟硫酸处理苯和异丁醇制备。
你首先要确认，萃取出水溶液中确实含有生物碱。有些生物碱水溶性是很好的，几乎不溶于弱极性的有机溶剂，例如，胆碱，甜菜碱，这些生物碱在甲苯中的分配系数非常低，不可能用甲苯从水溶液中提取出来。
实验室制备甲苯：
1、用苯和一氯甲烷在无水三氯化铝的加热催化下进行反应（Friedel-Crafts反应），注意所有药品必须无水，所有仪器必须干燥，反应必须在无水状态下进行，否则会造成产率降低。
相关化学方程式：
C₆H₆ + CH₃Cl→ C₆H₅CH₃ + HCl (催化剂AlCl₃)
2、苯的氯甲基化，并还原生成物，制取甲苯。
相关化学方程式：
C₆H₆+ HCl + HCHO → C₆H₅CH₂Cl + H₂O
C₆H₅CH₂Cl + LiAlH₄ → C₆H₅CH₃
扩展资料：
甲苯使用注意事项：
1、危险性概述
健康危害：对皮肤、粘膜有刺激性，对中枢神经系统有麻醉作用。
急性中毒：短时间内吸入较高浓度该品可出现眼及上呼吸道明显的刺激症状、眼结膜及咽部充血、头晕、头痛、恶心、呕吐、胸闷、四肢无力、步态蹒跚、意识模糊。重症者可有躁动、抽搐、昏迷。
慢性中毒：长期接触可发生神经衰弱综合征，肝肿大，女工月经异常等。皮肤干燥、皲裂、皮炎。
环境危害：对环境有严重危害，对空气、水环境及水源可造成污染。
燃爆危险：该品易燃，具刺激性。
2、消防措施
危险特性：易燃，其蒸气与空气可形成爆炸性混合物，遇明火、高热能引起燃烧爆炸。与氧化剂能发生强烈反应。流速过快，容易产生和积聚静电。其蒸气比空气重，能在较低处扩散到相当远的地方，遇火源会着火回燃。
有害燃烧产物：一氧化碳、二氧化碳。
灭火方法：喷水冷却容器，可能的话将容器从火场移至空旷处。处在火场中的容器若已变色或从安全泄压装置中产生声音，必须马上撤离。
灭火剂：泡沫、干粉、二氧化碳、砂土。用水灭火无效。
参考资料来源：百度百科-甲苯
