酒精为什么能沉淀DNA
此次试验一般会有两个疑问:
1.为什么用无水乙醇沉淀DNA?
用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。
2.在用乙醇沉淀DNA时,为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1~0.25mol/L?
在pH为8左右的溶液中,DNA分子是带负电荷的,加一定浓度的NaAc或NaCl,使Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀,当加入的盐溶液浓度太低时,只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合,这样就造成DNA沉淀不完全,当加入的盐溶液浓度太高时,其效果也不好。在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响DNA的酶切等反应,必须要进行洗涤或重沉淀。
这个问题太笼统了,由于糖蛋白中糖含量可以由90%以上到1%以下,只要含有糖和蛋白且以共价键连接都可以叫糖蛋白,糖含量较多的当然性质就像糖,蛋白含量占主要的就和蛋白的性质相近。无水乙醇是可以沉淀蛋白的,在我们具体操作中,也可以用乙醇来沉淀多糖,所以,原理上说,无水乙醇是可以沉淀糖蛋白的,但是大多是大分子的,分子量过小的话很难沉淀下来
蒸馏酒的感官指标是"透明无色液体(配制酒可有色),无沉淀杂质,无异臭异味".作这样的规定,是因为各种类型的白酒都是蒸馏酒,所以,要求产品应是无色透明澄清液体,无异臭异味,不应含有悬浮物和沉淀物.白酒的组成除酒精外,还含有各种微量成分,由于工艺条件,设备和包装容器等的影响,有时会使酒产生色泽或浑浊沉淀,现分述如下.
一:白酒浑浊
白酒的酒度在50度以上时比较澄清,在50度以下,则随着酒度的降低透明度逐渐变差,甚至出现轻微的浑浊,这主要是酒中的杂醇油和高级脂肪酸乙酯溶解随着酒度的降低而产生.
二:悬浮物白酒在蒸馏,入库或包装过程中,如因冷凝器,盛酒器不清洁,容易产生悬浮物.
三:白色沉淀
由于加浆水的硬度大,无机盐含量高,如硫酸钙,硫酸镁等在水中溶解度较好,但对酒精的溶解度较底,当勾兑到酒中时,这些无机盐便大量析出,形成白色沉淀由于冷凝器的锡质含铅较多,与酒中的酸作用产生醋酸铅加浆时,如果水中含有硫酸盐类,便会产生硫酸铅的白色沉淀由于玻璃瓶内含有硅酸盐较多,与酒中的酸接触,也会产生二氧化硅沉淀.
四:蓝黑色沉淀
白酒中所含铁离子超过1mg/kg时,若使用软木塞作内塞,则酒中的铁与软木塞中的单宁形成单宁铁或单宁和铁的络和物,使酒产生蓝黑色沉淀.
五:黑色夏季酒醅升温过高,因受热而形成有色物质,或是接触了铁锈(如酒中含酸量高时,对铁更易腐蚀),如酒中含铁量超过1mg/kg时,就易受空气氧化而产生黄色.另外,蒸馏时火力过大,使酒醅中的有色成分随蒸汽拖带到酒中,也会使酒出现黄色.其他如杂醇油含量过高,或贮存时间过长,都会使酒出现黄色.
鞣质在水溶液中不能被乙醇沉淀。
乙醇可降低水的介电常数,导致具有表面水层的蛋白质分子脱水,相互聚集,最后析出沉淀。而鞣质易溶于水、乙醇、丙酮,故在水溶液中不能被乙醇沉淀。
鞣质
鞣质又称鞣酸或单宁,是植物界中由没食子酸(或其聚合物)的葡萄糖(及其他多元醇)酯、黄烷酵及其衍生物的聚合物以及两者混合共同组成的植物多元酚。这类化合物能与蛋白质结合形成不溶于水的沉淀,故可与兽皮的蛋白质形成致密、柔韧、不易腐败又难以透水的皮革,所以被称为鞣质。