DNA提取是为什么要加入两倍体积无水乙醇?
溶解的原理是被溶解溶质的分子分散到溶解该物质的溶液分子间隙的过程,这个原理同样适用于DNA溶于水的过程,即DNA分子同水分子相互结合。乙醇分子和水的结合力大于DNA与水的结合力,故乙醇分子会抢占原来已经溶于水的DNA分子的位置,DNA分子因此被析出。为保证所形成的乙醇溶液的浓度,要加两倍以上体积的乙醇,这样能形成60%以上浓度的乙醇溶液,不一定是两倍,但是一定要高于这个值,否则DNA不容易析出。DNA提取的下一步加70%洗涤也是这个原理,其实量多量少不重要,关键是达到一定的条件。
RNA在冷的无水乙醇里溶解度低,而蛋白溶解度高,因此可以用冷的无水乙醇把RNA沉淀下来从而达到提纯的目的。
2倍无水乙醇的是用来沉淀DNA的,也可以用2/3体积的异丙醇来沉淀DNA,NaAc则是提供钠盐环境,促进DNA沉淀,效果明显。
提取DNA时加入NaAc pH5.2和2倍体积的无水乙醇的作用是什么,主要是因为DNA在一定的盐浓度条件下才能更好地沉淀下来.如果你不急用其实可以沉淀过夜的。这样就可以少了75%乙醇洗涤的那一步,那一步主要是洗去多余的盐。急用的话就加吧,但是一定要用75%乙醇洗涤。
我是这样做的,我做时是行得通的,你可以试试。
例如1000ml的容量瓶加入10mg乙醇(0.1mg的分析天平称量)。
或者10000ml的容量瓶加入100mg乙醇(0.1mg的分析天平称量)。