纸层析法无水乙醇的作用
纸层析法无水乙醇是溶解叶绿素用的。
提取叶绿体中的色素时加入无水乙醇让色素溶解,少许碳酸钙的目的是防止色素被破坏;少许二氧化硅的作用是便于将叶片研磨成匀浆。
纸层析法特点:
滤纸纤维与水有较强的亲和力,滤纸纤维能吸附25-29%的水分,其中6-7%的水以氢键与纤维素的羟基结合,在通常条件下较稳定,不易除去。这种水分组成为固定相。而有机溶剂与滤纸的亲和力甚弱,因而有机溶剂为流动相(在纤维间空隙中流动),它沿着滤纸移动。溶剂由下向上移动的,称上行法;由上向下移动,称下行法。
如下:
(1)实验原理:可以利用有机溶剂无水乙醇提取绿叶中的色素,分离色素的原理是利用色素在层析液中的溶解度不同,溶解度高的在滤纸上扩散速度快,反之则慢。
(2)实验结果:层析后,在滤纸条上会出现四条色素带,色素分布自上而下依次是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b,色素带最宽的颜色是蓝绿色,最窄的颜色是橙黄色。
(3)绿叶中的色素分布在叶绿体的类囊体薄膜。
基本简介
叶绿素,是植物进行光合作用的主要色素,是一类含脂的色素家族,位于类囊体膜。叶绿素吸收大部分的红光和紫光但反射绿光,所以叶绿素呈现绿色,它在光合作用的光吸收中起核心作用。叶绿素为镁卟啉化合物,包括叶绿素a、b、c、d、f以及原叶绿素和细菌叶绿素等。
叶绿素不很稳定,光、酸、碱、氧、氧化剂等都会使其分解。酸性条件下,叶绿素分子很容易失去卟啉环中的镁成为去镁叶绿素。叶绿素具有抗癌、抑菌、抗氧化等作用,可用于医疗、食品、化妆品等行业。
分离提取液中的色素的方法:
1、首先我们把二氧化硅和碳酸钙和丙酮,前两种是粉末状药品,各加少许,后者是有机溶剂,研磨时加约5ml即可。
2、然后我们在制备滤纸条,把预备在试验桌上的滤纸条一端剪去两个角使之呈梯形,这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀,也会便于观察实验结果的。
3、再然后画滤液细线:有细,匀,直,浓,在之前用铅笔轻轻地画一道线,放在色素带重叠,在用提取液反复划好几次,吹干,不要弄破纸条。
4、还有就是叶绿体中色素是有机物,我们应用有机溶剂来提取,因为不同色素在层析夜中的溶解度不同的。
5、剪去滤纸条的两角可以使层析液在纸条上 扩散速度均衡,得出清晰漂亮的色素带,然后在利用在层析液中的溶解度高低来分离。
6、最后我们在去观察实验结果:最后滤纸条上将分离出四条色素带,颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色等。
总结
1.首先把二氧化硅、碳酸钙和丙酮,各加少许。
2.然后在制备滤纸条,一端剪去两个角使之呈梯形。
3.最后色素带重叠,提取液划几次,吹干,不要弄破纸条。
利于色素在滤纸条上的 扩散,从而得出清晰漂亮的色素带。
要上到下依次为:胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b等。
色素提取的原理是色素能溶解与有机溶剂。色素提取的步骤是先取绿色叶片的叶肉部分,然后加无水乙醇、碳酸钙、二氧化硅,之后研磨,最后过滤并取滤液。
色素分离的原理是不同种类的色素在层析液中的溶解度不同,在滤纸条上的扩散速度不同。色素分离的步骤是先画滤液细线,之后在纸上层析。
不同的光合色素在层析液中的溶解度不同.溶解度高的光合色素随层析液在滤纸上扩散得快;溶解度低的光合色素在滤纸上扩散得慢.所以叶绿体色素分离用层析液.
可能光合色素在无水乙醇中的溶解度差不多.
B、无水乙醇可以溶解色素,可以用无水乙醇提取叶绿体中的色素,B正确;
C、加入二氧化硅便于将叶片研磨成匀浆,C错误;
D、在研钵中加入碳酸钙的目的是防止色素被破坏,D错误.
故选:B.
叶绿素提取的准备工作是在一个半暗的房间里,室温保持在25℃。
提取步骤如下:
(1) 取1000克新鲜的绿叶,在韦氏搅切器中粉碎。
(2)将粉碎的1000克绿叶放进加有少量的碳酸钙的丙酮中(温度20℃)进行萃取,直到过滤、清洗后的叶子碎片为无色。
(3)将过滤后的丙酮提取液放到盛有1升石油醚和100ml丙酮的漏斗中,然后轻轻地旋转,同时加放蒸馏水直到分层为止。水层的大部分丙酮和水溶杂质被丢弃,只剩石油醚溶液。
(4)将石油醚溶液用蒸馏水再次净化后,用含有石油醚和0.01克草酸的200ml80%的甲醇溶液清洗5次以上,最后得到黄绿色悬浮液。
(5)用无水硫酸钠对悬浮液进行干燥,并将其渗入到3cm厚的蔗糖粉末制成柱中,然后用石油醚清洗沉淀的色素去掉类胡萝卜素,使之只含有天然的叶绿素。
(6)含有天然叶绿素的蔗糖柱分两层,绿层有4-10mm的叶绿素b层,另一蓝层为2-6mm的叶绿素a层。
(7)将位于蓝层正中的部分(约占蓝层的一半) 放入醚中,对此悬浮液进行过滤、洗提,用蒸馏水清洗,用硫酸钠干燥,再用器皿进行过滤后,得到叶绿素a。
(8)将(6)中的绿层中间部分移出,迅速放入醚中过滤、洗提,制成叶绿素b醚溶液。
扩展资料:
叶绿素的分离
色谱法是一种很好的分离纯化、鉴定有机化合物的重要方法,尤其是在微量分析中应用的更是广泛。果蔬中色素主要包括脂溶性的胡萝卜素、叶黄素、叶绿素和水溶性的花青素。
在提取实验时,我们可以利用相似相溶的原理把水溶性的花青素滤掉,继而可以利用薄层色谱、柱色谱、高效液相色谱对胡萝卜素、叶黄素和叶绿素进行分离。
由于这三种色素的极性依次减弱,可以适当地选择单一的有机溶剂或者不同配比的混合溶剂作为展开剂和洗脱剂,确定最佳的优化分离条件。
叶绿素-百度百科
1、选取叶子。此实验必须选择绿色且容易研磨的叶子,所以一般选择鲜嫩的菠菜叶,而且量不宜过多但也不能过少。过多不易研磨,过少则色素量太少。
2、研磨。研磨时注意先将叶子剪碎放入研磨,研磨前还必须加入适量的二氧化硅、乙醇和碳酸钙。此过程中三种物质必须先加,研磨要迅速,否者色素容易挥发,研磨完毕要保存好。
3、过滤。过滤选择的是单层尼龙布,不能是滤纸。因为滤纸孔特别小,而且吸附能力特别强,所以需要用纱布较好。
4、制作滤纸条。制作滤纸条时必须剪去一端的两个角,并且在靠近剪去角的一端画铅笔细线,注意此细线必须细而且直。
5、画滤液细线。化滤液细线可以用两种方法,一种是用毛细吸管一滴滴沿着滤纸条上的细线来画,必须保证滤液不扩散。在画细线的时候要先干燥之后再画一次,目的是有更多的色素。另一种方法是用盖玻片沾一下滤液,再像印章一样印在滤液细线上。
6、分离色素。将刚才画好的滤纸条放入到层析液中。此过程必须注意不能让滤液细线被层析液淹没,而且需要盖好盖子,因为层析液有毒而且易挥发。
7、干燥滤纸条。一段时间后取出滤纸条,可以用嘴巴吹干,也可以用风扇加速干燥,一段时间就能观察到滤纸条上出现的色素带。
B、加入二氧化硅是为了充分研磨,从而使叶绿体中的色素释放出来,B正确;
C、各色素随层析液在滤纸上扩散速度不同,从而分离色素.溶解度大,扩散速度快;溶解度小,扩散速度慢,C正确;
D、在滤纸条上最下端的色素是叶绿素b,呈黄绿色,D正确.
故选:A.