什么是pc色谱柱

http://www.pep.com.cn/gzhx/gzhxjs/0pl/kb/dzkb/xx23/201009/t20100916_900569.htm

人教版选修5中交待得很明确，楼上答得也很好。在酸催化下，羟基碳邻位碳上断开碳氢键，其中氢加到甲醛的氧上，碳加到甲醛的碳上，形成羟甲基苯酚。羟甲基苯酚再脱水得到高分子化合物，这个水就是羟甲基中的羟基、酚羟基另一个邻位碳上的氢组合出来的。

纯化DNA去除DNA溶液当中的酶类和蛋白质，经典的方法是使用氯仿抽提，或者是1:1的苯酚氯仿，或者是苯酚。两种有机溶剂混合使用要比使用单独的一种更好，因为这种方法非常有效的使蛋白质变性，酶类失活。然而，尽管苯酚可以有效的使蛋白变性，但是不能够抑制RNase的活性，而且其也是含有polyA的RNA的有效的溶剂，因此，可以通过使用两种有机溶剂同时使用的方法解决这一问题。注意：氯仿指的是24:1的氯仿异戊醇的混合物。苯酚指的是用0.1%的羟基喹啉和0.2%的贝塔巯基乙醇平衡的苯酚。1、将DNA溶液与等体积的苯酚氯仿混合2、混匀直到成为乳液状3、离心3分钟4、将上清液转移到干净的离心管中（注意不要吸取中间层）5、再重新用苯酚氯仿处理一次，即就是重复1、2、3、46、加入等体积的氯仿，混匀，重复2、3、47、用乙醇或者异丙醇沉淀注意：如果DNA片段大于10Kb，by gentle shaking。如果小于10Kb，by vortexing。如果大于10Kb，采用下列步骤:a. 20 rpm 缓慢摇匀。b. 使用大口径枪头转移DNA溶液c. 用乙醇沉淀DNA。d. 氯仿的去除可以通过透析，透析液用冷的TNE或者饱和的水。沉淀DNA最常用的是乙醇沉淀的方法。此过程是在低温（-20摄氏度）且适当的一价离子存在的情况下沉淀DNA。该方法快速且可以回收纳克级的DNA。1、确定DNA溶液的体积2、用pH8.0的水或者TE溶液调整DNA溶液中的一价离子的浓度，或者加入一定量的一价离子（见表）。浓度终浓度Sodium acetate 醋酸钠2.5 M（pH5.2）0.25 MSodium chloride 氯化钠5.0 M0.1 MAmmonium acetate 醋酸铵10.5 M2.0 M3、混匀后加入2倍体积的冷的无水乙醇，放置-20摄氏度。4、一般放置20-30分钟。如果片段小于1 Kb或者浓度非常低，可以适当延长时间或者放置-70摄氏度。5、0摄氏度离心。一般12000 rpm 离心10分钟足够。如果片度较小或者浓度较低则要延长离心时间和转速。6、去掉上清，使用吸水纸尽量吸干管中溶液，然后使用真空干燥机干燥。7、用pH8.0的水或者TE溶液溶解DNA沉淀。说明：A. 1倍体积的异丙醇通常用来代替2倍体积的无水乙醇。异丙醇的使用有其自身的特点，其终体积小，容易在1.5 ml离心管中进行。但是其不易挥发，且特别是在-70摄氏度放置沉淀时容易与蔗糖和氯化钾等共沉淀，因此，原则上使用无水乙醇沉淀。B. 如果要去除盐离子、有机溶剂等，可以用70%乙醇漂洗，但是70%乙醇漂洗后DNA沉淀与管壁结合较为松散，移去上清液时要小心。同时，加入的70%的乙醇要超过管子体积的三分之二。C. 小于200 bp的DNA使用乙醇沉淀非常的困难。因此，在加入乙醇前调整溶液中含有0.01 M 氯化镁，有利于小片段DNA的沉淀。D. 一般情况下，纯化后的DNA很容易复溶。但在溶液中含有氯化镁或者大于0.1 M 氯化钠的情况下，DNA难以溶解。可以通过使用少量的低盐离子浓度的溶液溶解后调整到一定的盐离子浓度。如果样品较难溶解于小体积的溶液中，则可以加入大体积的溶液然后重新用无水乙醇沉淀。E. 如果是纯化RNA，那么需要至少2.5倍体积的无水乙醇沉淀RNA。F. 去除DNA溶液中的三磷酸可以通过两次沉淀的方法实现。沉淀过程中加入终浓度为2 M 的醋酸铵 。浓缩DNA通过使用2-butanol（2丁醇）或者n-butyl alcohol（1-butanol，1丁醇）浓缩DNA溶液。因为在使用这两种有机溶剂时，水分可以部分的进入有机相，而DNA以及盐离子等无法进入有机相。因此，通过几次的重复，就可以浓缩DNA溶液。通过这样的方法可以将待沉淀的DNA样品的体积浓缩到可以用无水乙醇沉淀的体积。1、加入等体积的2-butanol到DNA溶液中，充分混匀。注意：加入太多体积的2-butanol会导致水分丧失，DNA浓缩沉淀出来。2、离心1分钟，1600 g，移去上层有机相。3、重复1、2步骤直到所需体积。4、用水饱和的乙醚抽提，去除溶液中的2-butanol5、使用真空抽提去除乙醚注意：因为2-butanol抽提不能去除盐离子，因此盐离子的浓度也是升高的。可以通过透析或者用乙醇沉淀去除盐离子。

通过K值判断反应产物

电离常数又叫电离平衡常数，用Ki表示。其定义为，当弱电解质电离达到平衡时，电离的离子浓度的乘积与未电离的分子浓度的比值叫做该弱电解质的电离平衡常数。一种弱电解质的电离平衡常数只与温度有关，而与该弱电解质的浓度无关。因为弱电解质通常为弱酸或弱碱，所以在化学上，可以用Ka、Kb分别表示弱酸和弱碱的电离平衡常数。

用HA表示弱酸，则其电离方程式为HA——H+A，则电离常数Ka=[H]*[A]/HA

电离常数K与电离度α的关系可近似的表示为K=cα2（α平方）其中c为弱电解质溶液的浓度。

你可以参考一下如下数据：

盐酸是强酸，HCl在水中几乎是全部电离的

苯酚的电离是C6H5OH<=>C6H5O+H(+)

常数大约是10

碳酸的一级电离，也就是H2CO3<=>HCO3(-)+H(+)

电离常数是6.35

二级电离，也就是HCO3(-)<=>CO3(2-)+H(+)

电离常数是10.33

电离常数反映的就是酸性的大小，电离的能力

电离常数越大，酸性越弱，电离出氢离子的能力越差

而苯酚的电离常数在碳酸和碳酸氢根之间

所以苯酚的酸性小于碳酸，大于碳酸氢根

简单的说，碳酸相对更容易与氢离子分开，形成碳酸氢根和氢离子，而反过来，氢离子和碳酸氢根结合形成碳酸的能力相对要弱一些，而苯酚的氢离子相比碳酸稍难些分离，而氢离子和苯酚根相比碳酸氢根稍容易些结合成苯酚，而碳酸氢根非常难电离出氢离子，而碳酸根相对于苯酚根，非常容易与氢离子结合成碳酸氢根。

【

已知亚硫酸（H2SO3）的二级电离常数K2比偏铝酸（HAlO2）要大。则将少量的SO2气体通入到偏铝酸钠溶液中发生的离子反应是：

AlO2-+

SO2+

2

H2O

→

Al（OH）3↓＋HSO3-

】

纯化DNA除DNA溶液酶类蛋白质经典使用氯仿抽提或者1:1苯酚氯仿或者苯酚两种机溶剂混合使用要比使用单独种更种非效使蛋白质变性酶类失尽管苯酚效使蛋白变性能够抑制RNase性且其含polyARNA效溶剂通使用两种机溶剂同使用解决问题注意：氯仿指24:1氯仿异戊醇混合物苯酚指用0.1%羟基喹啉0.2%贝塔巯基乙醇平衡苯酚1、DNA溶液与等体积苯酚氯仿混合2、混匀直乳液状3、离3钟4、清液转移干净离管（注意要吸取间层）5、再重新用苯酚氯仿处理即重复1、2、3、46、加入等体积氯仿混匀重复2、3、47、用乙醇或者异丙醇沉淀注意：DNA片段于10Kbby gentle shaking于10Kbby vortexing于10Kb采用列步骤:a. 20 rpm 缓慢摇匀b. 使用口径枪转移DNA溶液c. 用乙醇沉淀DNAd. 氯仿除通透析透析液用冷TNE或者饱水沉淀DNA用乙醇沉淀程低温（-20摄氏度）且适价离存情况沉淀DNA该快速且收纳克级DNA1、确定DNA溶液体积2、用pH8.0水或者TE溶液调整DNA溶液价离浓度或者加入定量价离（见表）浓度终浓度Sodium acetate 醋酸钠2.5 M（pH5.2）0.25 MSodium chloride 氯化钠5.0 M0.1 MAmmonium acetate 醋酸铵10.5 M2.0 M3、混匀加入2倍体积冷水乙醇放置-20摄氏度4、般放置20-30钟片段于1 Kb或者浓度非低适延间或者放置-70摄氏度5、0摄氏度离般12000 rpm 离10钟足够片度较或者浓度较低则要延离间转速6、掉清使用吸水纸尽量吸干管溶液使用真空干燥机干燥7、用pH8.0水或者TE溶液溶解DNA沉淀说明：A. 1倍体积异丙醇通用代替2倍体积水乙醇异丙醇使用其自身特点其终体积容易1.5 ml离管进行其易挥发且特别-70摄氏度放置沉淀容易与蔗糖氯化钾等共沉淀原则使用水乙醇沉淀B. 要除盐离、机溶剂等用70%乙醇漂洗70%乙醇漂洗DNA沉淀与管壁结合较松散移清液要同加入70%乙醇要超管体积三二C. 于200 bpDNA使用乙醇沉淀非困难加入乙醇前调整溶液含0.01 M 氯化镁利于片段DNA沉淀D. 般情况纯化DNA容易复溶溶液含氯化镁或者于0.1 M 氯化钠情况DNA难溶解通使用少量低盐离浓度溶液溶解调整定盐离浓度品较难溶解于体积溶液则加入体积溶液重新用水乙醇沉淀E. 纯化RNA需要至少2.5倍体积水乙醇沉淀RNAF. 除DNA溶液三磷酸通两沉淀实现沉淀程加入终浓度2 M 醋酸铵 浓缩DNA通使用2-butanol（2丁醇）或者n-butyl alcohol（1-butanol1丁醇）浓缩DNA溶液使用两种机溶剂水部进入机相DNA及盐离等进入机相通几重复浓缩DNA溶液通待沉淀DNA品体积浓缩用水乙醇沉淀体积1、加入等体积2-butanolDNA溶液充混匀注意：加入太体积2-butanol导致水丧失DNA浓缩沉淀2、离1钟1600 g移层机相3、重复1、2步骤直所需体积4、用水饱乙醚抽提除溶液2-butanol5、使用真空抽提除乙醚注意：2-butanol抽提能除盐离盐离浓度升高通透析或者用乙醇沉淀除盐离

pH会随浓度不同而不同的，

查的20摄氏度时苯酚pKa=9.89，

则1mol/L的苯酚钠溶液pH=9.89

0.1mol/L的苯酚钠溶液则……

A- + H2O = OH- + AH

0.1 0.1Kb

pOH= - lg（0.1Kb）= 1 + pKb =1+14-pKa（共轭碱的pKb=14-pKa）

则pH=14-pOH=pKa -1=8.89

当浓度为c时pH=pKa +lgc

当浓度很小时（接近7时）需考虑水的电离，就不能按上面的计算了，有点长，就不写了。

FeCl3能和含有烯醇结构的物质发生络合反应，生成有色物质。苯酚中含有烯醇结构（苯酚中的酚羟基就是烯醇结构），所以FeCl3能和苯酚发生显色反应，而苯甲酸什么的都不能与之反应。

注：烯醇结构为-C=C-OH，该结构不稳定，容易异构化变为醛基结构-CHO，但两者性质是不同的。另外，Fe3+能和SCN-发生络合而显紫色。

化学性质

可吸收空气中水分并液化。有特殊臭味，极稀的溶液有甜味。腐蚀性极强。化学反应能力强。与醛、酮反应生成酚醛树脂、双酚A，与醋酐；水杨酸反应生成醋酸苯酯、水杨酸酯。还可进行卤代、加氢、氧化、烷基化、羧基化、酯化、醚化等反应。

苯酚在通常温度下是固体，与钠不能顺利发生反应，如果采用加热熔化苯酚，再加入金属钠的方法进行实验，苯酚易被还原，在加热时苯酚颜色发生变化而影响实验效果。

FeCl3能和含有烯醇结构的物质发生络合反应，生成有色物质。苯酚中含有烯醇结构（苯酚中的酚羟基就是烯醇结构），所以FeCl3能和苯酚发生显色反应，而苯甲酸什么的都不能与之反应。注：烯醇结构为-C=C-OH，该结构不稳定，容易异构化变为醛基结构-CHO，但两者性质是不同的。

另外，Fe3+能和SCN-发生络合而显紫色。

已知苯酚的ka可以算出kb为kw/ka＝10^-14/1.3*10^-10 ，设OH为x已知C6H5O–为1.0*10^-3-x约为1.0*10^-3,C6H5OH为x则x^2/1.0*10-3＝10^-14/1.3*10^-10解出x再用14-logx，可得为10.44

选D

弱碱能被强酸直接滴定的条件是：C*Kb>=10^-8 C指弱碱的浓度，Kb指弱碱的解离常数。通常被滴定物质的浓度c=0.1mol/L左右，当然也可为别的浓度。

有些弱碱的解离常数可以直接查表，有些是不能查的，可根据其共轭酸的解离常数Ka值求算。共轭酸碱对的解离常数Ka与Kb的关系是：Ka*Kb=Kw（水的离子积常数）。

A. NAF的Kb=Kw/Ka=10^-14/10^-3.46=10^-10.54

B. NaAc的Kb=Kw/Ka=10^-14/10^-4.74=10^-9.26

C. 苯甲酸钠的Kb=Kw/Ka=10^-14/10^-4.21=10^-9.79

D. 苯酚钠的Kb=Kw/Ka=10^-14/10^-9.95=10^-4.05

根据求算的各个弱碱的Kb值，只有D的C*Kb>10^-8，ABC想要满足这个条件浓度都得特别大，100mol/L左右，所以不可能。