CTAB缓冲液怎样配制

可以的。

DTT和2-ME（2-mercaptoethanol的简称，下同）都属于巯基试剂。

也就是说DTT和2-ME的作用是一样的：可以防止蛋白质或酶等分子中的巯基氧化成二硫键，维持体系的还原性环境。

β-巯基乙醇和DTT都是还原剂，防止蛋白质被氧化，β-巯基乙醇常用浓度为5-20MMOL/L，DTT为0.5-1MMOL/L。因为β-巯基乙醇加入缓冲液后24小时易被氧化，其后加速蛋白质的失活，而DTT氧化后形成稳定的分子内二硫健，并不危及蛋白的巯基，所以在蛋白制备中常用β-巯基乙醇，而长期储存用DTT。还有其上提到的试剂浓度均指终浓度。

至于使用浓度，DTT和2-ME的工作浓度一般为1-5mM，如果2-ME的浓度是1mM，由于DTT的氧化能力强于2-ME，DTT的浓度用0.5-1mM就可以了。

巯基乙醇提取rna作用 Tris饱和酚一般PH大于7.8，用于DNA的提取。其中，酚是强的蛋白变性剂，可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出。 而Tris的主要作用是防治止酚类氧化，若酚类氧化，则会形成醌（两个苯环），醌含有强自由基，会破坏核酸结构。 同时，由于PH值大于7，在碱性环境中DNA处于水相，RNA处于有机相。从而分离上清，即可得到DNA。 Tris饱和酚的配置： 1、冰箱取出重蒸酚，室温放置－－－68度水浴溶化，切勿立即放入68度的水浴中，以防玻璃炸裂 2、加8－羟基喹啉至0.1％和β－巯基乙醇至0.2％，（原液14. 4MOL/ML），混匀，溶液呈现黄色，倒入分液漏斗中（也可在烧杯中进行） 3、加入等溶剂的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反复混匀后，静至分层；放出下层黄色酚液，弃上层 4、加固体Tris约1g/100ml酚，摇匀，去水相 5、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)平衡数次，至PH为8.0 6、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)于棕色瓶中4度保存 7、如黄色消失或呈粉红色（说明酚已经被氧化），则不能使用 巯基乙醇提取rna作用机理 RNasin是一类从大鼠肝或人胎盘中提取出来的酸性糖蛋白质，鼠肝RNasin分子量为40KD；来源于人胎盘的RNasin分子量为51KD，等电点为4.7，最适pH为7～8。RNasin能与RNase非共价结合（Ki=3×1010）从而抑制了它们的活力，RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂。1mmol/L的二巯基乙醇对于RNasin的发挥抑制RNase的最大活性非常重要。 RNasin最好不要与某些蛋白质变性剂（如7mol/L的尿素）同时使用，因为尿素能使RNase-RNasin复合物分离，并释放出活性的RNase。 rna提取中乙醇的作用 1. 按照Invitrogen公司的Tizro说明书，在提取RNA过程中进行到加入75%乙醇后，可使RNA沉淀在4度保存一个月，在-20度保存一年。 2. 一般这种方法用的比较少，因为每次提RNA都是一气下来，中间没有停顿的，除非一次提很多，上午时间不够用，可进行到加入乙醇未知，然后放到-20度冰箱，下午可继续进行。 3. 一般保存方法都是RNA溶解到无RNase的水中，然后-80度冰箱保存。 4. 反复冻融对RNA的长时间保存肯定是有影响的，可分成小量保存，尽量减少冻融。 5. 现在有些试剂公司有相关的产品，可用于保存RNA，不过可能会有植物或动物，细胞或组织之分。 二巯基丙醇怎么提取 二巯基丙醇古代叫砒霜解药，二巯丙醇为无色或几乎无色、易流动的澄明液体。有类似葱蒜的气味。在甲醇、乙醇或苯甲酸苄酯中极易溶解，溶于水，在脂肪油中不溶，可防止砷、汞、铋、金、锑等金属对身体组织的中毒作用。名称介绍 中文名称：2,3-二巯基丙醇；2,3-二氢硫基-1-丙醇；2,3-二巯基-1-丙醇；二巯基丙醇；3-羟基-1,2-丙二硫醇；巴尔；巴尔双硫代甘油；英国抗路易斯气剂 dna提取中巯基还原剂 DTT作用如下： 1、DTT的作用之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。 这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。 2、DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。 但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M盐酸胍、8M尿素或1%SDS）。 反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。 DTT即DL-Dithiothreitol，中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2，分子量为154.25，纯度>99%。常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。 而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近，但DTT价格略高一些。 RNA提取中巯基乙醇如何除去 是 TRIzol有毒性，trizol中含有苯酚，苯酚是刺激性气味。对呼吸道有伤害，闻久了会有晕的感觉。 1、TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。 2、苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。 巯基乙醇作用Rna提取 Trizol就是酚氯仿提取法的常用试剂 Trizol中有酚，异硫氰酸胍和B-巯基乙醇。他们的作用都是使蛋白变性，使蛋白质与核酸解聚。加入氯仿，用来分相，实际上是加速有机相和水相的分层，当溶液pH在酸性的时候，DNA分子就会沉淀在酚与溶液的界面，就是白色层，只有RNA分子留在水相，但溶液pH不在酸性范围内，会使DNA溶解在水相，所以使用时按照说明书要求根据细胞数或培养器皿底面积适量加入Trizol。最后异丙醇沉淀，将水相中RNA提取出来。 提rna加巯基乙醇 材料、试剂及器具 1、 材料 总rna提取物。 2、 试剂 (1)0.1%DEPC水：200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。 (2)10x电泳缓冲液。 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) 0.4mol/L(pH 7.0) NaAc 0.1mol/L 乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L (3)50mL变性琼脂糖凝胶(1%) (4)10x电泳缓冲液 5 mL 琼脂糖 0.5 g 0.1%DEPC水 36.5 mL 加热溶解，稍冷却，加入8.5 mL 37%甲醛。 (5)上样缓冲液：50%，1mmmol/LEDTA，0.4% 溴酚兰，0.4%二甲苯蓝。 (6)甲酰胺(去离子)。

提取DNA配方

CTAB为十六烷基三甲基溴化铵，

CTAB提取缓冲液的经典配方

Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏；

EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性；

NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中；

Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。

CTAB 4g

NaCl 16.364 g

1M Tris-HCl 20ml( PH8.0)

0.5M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌

冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇（400ul）氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可。

提取RNA配方

2% CTAB（W/V）

2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V）

100 mM Tris-HCl（pH8.0,DEPC处理的水配置）

25mM EDTA

0.5g/L 亚精胺Spermidine

2.0M NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）

由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC 处理的水配制即可。

CTAB即十六烷基三甲基溴化胺，别名溴化十六烷基三甲基胺,鲸腊基三甲基溴化胺，分子式C19H42NBr，理化性质为白色或黄色膏体或固体粉末,有刺激气味.熔点32℃,HLB值15.8,熔于热水、乙醇、三氯甲烷,易熔于异丙醇水溶液,微溶于丙酮,不溶于醚.加热至多24.5—25.2℃分解。有良好的表面活性、稳定性、杀菌性及生物降解性。在强酸及强碱中穏定,耐热、耐光。与非离子及两性离子表面活性剂有良好的配伍性,对多种油脂具较好的乳化作用.对皮肤及粘膜刺激性小,有轻微脱脂作用。是一种阳离子去污剂，广泛用于润湿、杀菌、抗静电、去污、增溶等方面。

CTAB提取缓冲液的经典配方

Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏；

EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性；

NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中；

Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。

CTAB 4g

NaCl 16.364 g

1M Tris-HCl 20ml( PH8.0)

0.5M EDTA 8ml，先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml灭菌

冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇（400ul）氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可。

我是做动物的，没有提过植物的dna，对β-巯基乙醇也只在提蛋白的时候用过。

百度知道里有这么一句：“用ctab法提取某些易发生褐变物种的dna时不加肯定会对细胞产生影响，但具体会有何影响则视具体物种，操作环境和具体方法的不同而定”。虽然百度知道的可信性有点...不过物种不同所以效果不同也的确是普遍存在的现象。

我做实验的感觉是，东西做出来是王道，现成的protocol只是参考。比如我自己提蛋白用的裂解液的配方是自己摸出来的，跟其他人和文献上都不一样。如果你们实验室这种提取方法提取出的dna质量的确好，并且是可重复的，那就这么做好了。机理细节，也许就是物种特异性、氧化性不强，也有可能是你们用的这一批巯基乙醇质量一般，或者混入了其他东西。如果想要验证，可以再买另一个公司的试试，当然如果只focus在dna上，并且现在已经很好了，就这么做下去也不妨。不是不求甚解，而是主次有别。

植物学门外汉，一家之言，仅供参考。祝实验顺利=)

SDS使蛋白质变性，用于确定蛋白分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳。也可以用于核酸抽提操作中破坏细胞壁及裂解核酸-蛋白复合物。在乳液聚合反应中，可充当两相溶液的乳化剂。

巯基乙醇用于打开二硫键的，使蛋白质的四级或三级结构被破坏。

甘油使样品处于下面，不易飘起，并有保护作用。

溴酚蓝用于显色，起指示作用。

扩展资料

SDS的用途

1、用作洗涤剂和纺织助剂，也用作牙膏起泡剂、矿井灭火剂、乳液聚合乳化剂、羊毛净洗剂等。

2、用作阴离子型表面活化剂、乳化剂及发泡剂。

3、GB 2760-96规定为食品工业用加工助剂。发泡剂；乳化剂；阴离子型表面活性剂。用于蛋糕、饮料、蛋白、鲜果、果汁饮料、食用油等。

4、用作药物、化妆品、合成树脂的乳化剂。牙膏、灭火器的发泡剂。用作丝毛类精品织物的洗涤剂。金属选矿的浮选剂。

5、用作洗涤和纺织助剂，也用作牙膏发泡剂，灭火泡沫液，乳液聚合乳化剂，医药用乳化分散剂，洗发剂等化妆制品，羊毛净洗剂。

6、生化分析，电泳，离子对试剂。

RNAgents总RNA提取系统

1)Promega有哪些系统用于提取总RNA及poly(A)+RNA？

2)RNAgents®总RNA提取系统的工作原理怎样？

3)RNAgents®总RNA提取系统的一般得率是多少？

4)RNAgents®总RNA提取系统的各组分的功能是什么？

5)RNAgents®总RNA提取系统中平衡的苯酚：氯仿：异戊醇的配比是多少？

6)对初始材料的用量有什么限制？

7)提取RNA用作RT-PCR的方法作了哪些修改？

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1)Promega有哪些系统用于提取总RNA及poly(A)+RNA？

Promega用于提取总RNA及poly(A)+RNA的系统包括：

：用RNAgents®总RNA提取系统从组织及培养的细胞中提取总RNA。

：用SV总RNA提取系统从组织，血液及培养的细胞中提取总RNA。

：用PolyATtract®mRNA提取系统从总RNA中提取poly(A)+RNA。

：用PolyTtract®ystem1000从组织及培养的细胞中提取poly(A)+RNA。

：用PolyTtract®Series

9600TMmRNA从少量样品中快速提取mRNA（cDNA第一条链的纯化）。

2)RNAgents®提取总RNA提取系统的工作原理怎样？

RNAgents®总RNA提取系统用溶剂法为基础，从多种材料中快速，有效地提取总RNA。

简单而言，有亚硫氢胍及巯基乙醇时，制组织匀浆，可使内源的RNA酶失活，n-月桂肌氨酸将核蛋白复合物变性。用酸平衡的苯酚：氯仿：异戊醇抽提后，RNA脱离DNA及蛋白，从混合液中层析到水相。抽提后，用异丙醇将RNA沉淀浓缩。用RNAgents®总RNA提取系统所得RNA纯度好，用途广，适用于PolyATtract®mRNA提取系统。如RNA中必须完全去除染色体DNA，需用1-2个单位的无RNA酶污染的DNA酶处理。然后用65oC加热10分钟，或用苯酚及氯仿抽提使DNA酶失活。

3)RNAgents®总RNA提取系统的一般得率是多少？

得率受多个因素的影响，包括组织来源及培养的细胞数。如提取的RNA量多，可通过光吸收测定（A260读数）来定量RNA，

1OD=40ugRNA。

RNAgents®总RNA提取系统的一般得率

组织

总RNA得率

Hela细胞

1.6mgRNA/10的8次方个细胞

鼠内脏

2.3mgRNA/g组织

鼠脾

8.3mgRNA/g组织

鼠肺

1.9mgRNA/g组织

鼠肾

3.1mgRNA/g组织

鼠肝

8.1mgRNA/g组织

4)RNAgents®总RNA提取系统的各组分的功能是什么？

(1)

变性剂:

柠檬酸钠溶液中含亚硫氢胍，巯基乙醇，n-月桂肌氨酸

。可变性细胞内及核蛋白复合物，释放RNA。这些试剂还可有效抑制核酸酶。

(2)

苯酚：氯仿：异戊醇（125：24：1）（pH4.7）:酸平衡苯仿可抽提去除杂物。DNA及蛋白沉淀到有机相，RNA留在水相。酸性有机溶剂的抽提可免除用氯化锂选择沉淀RNA。用锂沉淀导致小于5.8sRNA的丢失，并不利于下游操作。

(3)

乙酸钠（pH4.0）：维持变性的细胞裂解液的pH值，及沉淀RNA所需。

(4)

异丙醇：沉淀浓缩RNA。

5)RNAgents®总RNA提取系统中平衡的苯酚：氯仿：异戊醇的配比是多少？

苯酚：氯仿：异戊醇的配比是125：24：1，用42mM柠檬酸钠溶液平衡(pH4.3-4.7)。这一配比可有效去除染色体DNA。残留染色体DNA会干扰RT-PCR。

6)对初始材料的用量有什么限制？

最初的设计方案是用作提取比较大量的RNA，RNAgents®总RNA提取系统可从5mg

组织，或5倍10的5次方的细胞中提取RNA。少量RNA提取的步骤可见RNAgents®总RNA提取系统技术手册TB087。初始材料用量的上限是每次用1g组织。

7)提取RNA用作RT-PCR的方法作了哪些修改？

快速提取RNA用作RT-PCR，可省去在变性溶液中液化和沉淀的步骤。简化的步骤可在90分钟内完成。

http://www.promega.com.cn/files/changjian/rnagents.htm