三氟乙酸的作用与用途

看文献是直接往乙腈溶液里加三氟乙酸配制的.正常的0.1%TFA加入后PH大约在2.5左右,估摸你可能加多了,可以用三乙胺调节.注意过强酸性柱子可能受不住哦,可以的话买市售的0.1%三氟乙酸-乙腈吧.

常用做反相流动相的溶剂是甲醇和乙腈，甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统常用做反相流动相的溶剂是甲醇和乙腈，甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。但是有时候样品峰形不好或者分离不好，更换溶剂试试是一个很好的选择，毕竟不同的溶剂提供不同的选择性。

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对流动相的优化主要在水相上下功夫，水里可以加酸、加碱、加盐，从而改善峰形、提高分离度。流动相里加碱的情况比较少，主要还是加酸，常用的酸有磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸、甲基磺酸等，其中最常用的是磷酸和三氟乙酸，磷酸在低波长下没有紫外吸收，而三氟乙酸在低波长下有，但是三氟乙酸易挥发而磷酸不行，所以单纯做液相，低波长下磷酸最合适，三氟乙酸有吸收，运行梯度时基线漂移很严重，而做液质就要考虑首选三氟乙酸了，近些年还比较流行加甲酸或乙酸。一般情况下这几种酸没有太大区别，我们更多的是考虑通过加酸改变流动相的pH值，从而改善样品的分离度和峰形。

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相同进样量样品峰越高则意味着峰形越好，从图中可以看出多数样品在低pH值下峰形都比中性要好，这个主要是由色谱柱本身的性质所决定的。色谱柱主要都是硅胶基质，现有的填料处理工艺无法将硅胶上残余的硅羟基全部去除，硅羟基会造成样品峰拖尾，一般认为硅羟基的pKa在到之间，低pH值能帮助抑制硅羟基的活性，减小拖尾，从而改善峰形，提高分离度。水溶液中添加%(体积)的磷酸或者三氟乙酸其pH值大概在2左右，用作流动相正好抑制硅羟基的活性，所以开发液相分析方法时流动相首选水加01.%的磷酸，然后再以此为基础做优化。

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在单独用酸不行的时候就要考虑使用缓冲盐，缓冲盐的选择原则是：简单、稳定、缓冲能力强、配制简单，需要调pH值时要有相应的酸或碱。常用的缓冲盐是磷酸盐，主要是钾盐和钠盐，再有就是醋酸盐，常用的盐浓度在10~20mM左右。以前因为色谱柱填料生产工艺的问题，往往需要在流动相里添加三乙胺来减少拖尾，但是三乙胺对色谱柱的寿命有很大影响，现在新的色谱柱都不再需要了。流动相里有时会需要调节pH值到碱性，具体pH要视色谱柱的耐受范围而定，常用 NaOH、KOH溶液或氨水做为调节缓冲盐溶液碱性pH的试剂，也可以往水里单独添加氨水做碱性流动相。

三氟乙酸可由3,3,3-三氟丙烯经高锰酸钾氧化制得；或由三氯乙腈与氟化氢反应,首先生成三氟乙腈,继而水解制得；也可用乙酸或乙酸酐进行电化学氟化制得。

密度相对密度(水=1)1.5351

114*1=114g

114/1.5351=74.3ml

所以1L4mol/L的三氟乙酸需要水1000-74.3=925.7ml,需要纯三氟乙酸=74.3ml。

扩展资料：

在HPLC中的应用：

在反相色谱分离多肽和蛋白质的实验中，使用三氟乙酸 （TFA） 作为离子对试剂是常见的手段。流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性表面以多种模式相互作用，来改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。

三氟乙酸与多肽上的正电荷及极性基团相结合以减少极性保留，并把多肽带回到疏水的反相表面。以同样的方式，三氟乙酸屏蔽了固定相上残留的极性表面。三氟乙酸的行为可以理解为它滞留在反相固定相的表面，同时与多肽及柱床作用。

成都摩尔公司的PS系列填料是采用世-界领先的微球合成技术可规模化制备聚苯乙烯/二乙烯基苯（PSDVB）和聚甲基丙烯酸酯为基质的两种性能互补的高性能聚合物反相色谱填料，这些填料具有刚性强、粒径均一、低反压、耐酸碱等特点。聚合物反相色谱填料具有不同的粒径规格（3μm、5μm、10μm、15μm、20μm、25μm、30μm、40μm和50μm）和优化的孔径结构（100Å、300Å、500Å和800Å四种孔径）以及无孔结构，可以满足从实验室分析到大规模工业分离的各种需求，如天然产物、抗生素、有机化合物、多肽、蛋白质和寡核苷酸等药物分子的高效分离。

图1. Target PS聚合物反相色谱填料不同粒径大小的扫描电镜图

聚合物反相色谱填料的特点：

●球形，粒径高度均一

●化学稳定性高和宽pH值范围（pH=1-14）

●优化的孔径结构

●高比表面积和高载量

●机械强度高

●低反压、柱效高

●不同极性基质的选择

粒径高度均一

控制微球的粒径和均一性对色谱应用至关重要，因为微球的粒径和粒径分布通常可以决定柱效。在色谱分离中，溶质的纵向扩散是色谱带和色谱峰拓宽的主要原因。对于特定大小的微球，采用均一微球装填的色谱柱可以有效地缩窄色谱带和色谱峰，还可以获得******的反压，从而使这些色谱柱呈高柱效和高分辩率。

可以提供从3μm到100μm范围内任意大小、粒径均一的聚合物反相色谱填料，客户可以任意选择，知益能够根据客户的需求定制。图1显示了 Target PS系列聚合物反相色谱填料不同粒径大小的扫描电镜图。

采用Beckman Coulter Counter测量Target PS系列聚合物色谱填料的粒径分布图，如图2所示，填料的变异系数即CV<3%。结果表明知益科技的聚合物色谱填料具有高度的均一性。 

优化的孔结构

微球的孔径大小与色谱填料的比表面积有很大的关系，孔径越小则比表面积越大。目标分离物质为小分子，通常选择孔径小的色谱填料；目标分离物质为生物大分子，则选择孔径较大的色谱填料。对于特定的目标分离物质，选择优化的孔径结构色谱填料不仅可以增加上样量，而且还可以提高分离纯度。

可以提供不同孔径大小的色谱填料，包括100Å、300Å、500Å和800Å四种孔径。图3为Target PS系列四种不同孔径大小的均一聚合物反相色谱填料的扫描电镜图。

图3. Target PS系列四种不同孔径大小的均一聚合物反相色谱填料的扫描电镜图

  批次间的稳定性

摩尔公司采用领先的聚合物微球规模化生产技术，能确保色谱填料的批次稳定性。我们对每批次产品的性能（如粒径大小和粒径分布等）都进行质量评价。图4显示了不同批次的填料产品性能，说明了我们规模化生产的填料具有良好的稳定性。图5显示了18批次的填料应用于蛋白的分离纯化，色谱图进一步说明了我们的色谱填料批次间的稳定性。

图5. 色谱填料分离蛋白18批次的重现性

色谱柱：4.6 mm I.D. x 250 mm, Target PS-300 300A 40um

流动相 A：0.1%三氟乙酸的水溶液

流动相 B：0.1%三氟乙酸的乙腈溶液

梯  度：20%B到40% B，20 min； 40% B，10 min

流  速：1 ml/min；80%B到95%B，10min

检测波长：UV @ 280nm

化学稳定性高

   Target PS系列聚合物反相色谱填料是由高交联的聚苯乙烯/二乙烯基苯或者是高交联的聚甲基丙烯酸酯组成，其在全pH值范围（pH 1-14）内具有良好的温度性。在极端的酸性溶液（如1M HCl）或极端的碱性溶液（如1M NaOH）和有机溶剂（包括乙醇、甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、DMSO、四氢呋喃等）中都可以保持微球的结构稳定和性能的稳定性。

反压低、高柱效

Target PS系列聚合物反相色谱填料的粒径高度均一、刚性强，因此，填装后的色谱柱的柱床稳定，反压低。Target PS-300 10um色谱填料的塔板数可以达到50000 N/m。

色谱填料的多种选择

纯化工艺基本分为粗提、中间纯化和精细纯化等三个分离步骤。Target PS系列聚合物反相色谱填料可以提供从样品的粗提、中间纯化和精细纯化整个分离过程的选择。

粗提 ：是指从样品中捕获目标成分，初步分离目标物，属于低分辨率的分离纯化，纯度一般能达到70~90%。可选择100um的Target PS系列色谱填料。

中间纯化 ：是指从捕获到的目标物中除去大部分杂质，属于中高等分辨率的分离纯化，纯度能达到90~98%。可选择30um或40um的Target PS系列色谱填料。

精细纯化： 是指目标物达到预期的纯度，除去与目标物结构类似的物质，属于高分辨率的分离纯化，纯度能达到98~99%以上。可选择10um的Target PS系列色谱填料。

聚合物反相填料分离纯化案例

胰岛素的分离纯化

 摩尔公司开发了一整套完整的胰岛素分离纯化工艺，成功的将胰岛素粗品从45%一步纯化到99%。

制备条件：

仪器：高压纯化设备

上样量：100mg/ml

检测：214nm

Target PS系列聚合物填料技术参数

Target PS系列聚合物反相色谱填料产品规格 

如有需要欢迎搜索成都摩尔科学仪器有限公司

首先你需要知道超声的目的，一个是为了混合均匀，一个是为了脱气。

混合均匀你手动摇匀就可以，脱气的话减压抽滤。然后超声半分钟，拿出来晃一晃，把溶液和试剂瓶中间的气泡晃出来，然后在超声半分钟就可以了。

超声会加快分子间运动，时间久了温度也会升高。但是那需要长时间超声。而且既然是混合物，他们之间就应该有一个共沸点，不是你想象的那种三氟乙酸和甲酸一下子都跑没了的情况。