碱性磷酸酶
碱性磷酸酶英文简称AKP或ALP,是广泛分布于人体各脏器器官中,其中以肝脏为最多其次为肾脏,骨骼、肠、和胎盘等组织,。它不是单一的酶,而是一组同功酶。目前已发现有
AKP1
、AKP2
、AKP3
、AKP4
、AKP5
与
AKP6
六种同功酶。其中第
1
、
2
、
6
种均来自肝脏,第
3
种来自骨细胞,第
4
种产生于胎盘及癌细胞,而第
5
种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。
血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞,少量来自肝。
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碱性磷酸酶是成骨细胞的一种外酶,它的表达活性是成骨细胞分化的一个明显特征。碱性磷酸酶广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾、和胎盘等祖师经肝脏想胆外排除的一种酶。
碱性磷酸酶的作用原理:
碱性磷酸酶能催化除去DNA、RNA、三磷酸核糖核苷和三磷酸脱氧核糖核苷的5′磷酸基团。由于CIP处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端,因此它们不能进行自连接(1)。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景
用途:切除DNA, RNA, rNTPs及dNTPs的5′末端磷酸基团;防止克隆载体的自环化连接;蛋白质丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的去磷酸化。
人体中碱性磷酸酶的作用:
碱性磷酸酶但它不是单一的酶,而是一组同功酶。目前已发现有AKP1、AKP2、AKP3、AKP4、AKP5与AKP6六种同功酶。其中第1、2、6种均来自肝脏,第3种来自骨细胞,第4种产生于胎盘及癌细胞,而第5种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。
碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。患这些疾病时,肝细胞过度制造ALP,经淋巴道和肝窦进入血液,同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍,反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此,孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时,血清碱性磷酸酶亦可升高,应加以鉴别。
本篇文章转自 生化试剂 。
分子克隆中使用的碱性磷酸酶(alkaline:phosphatase)主要来源于牛小肠碱性磷酸酶(Calf:intestinal:alkaline:phosphatase),简称CIP或CIAP,也有来自细菌的碱性磷酸酶(Bacterial:alkaline:phosphatase,BAP)和虾的碱性磷酸酶(Shrimp:alkaline:phosphatase,SAP),它们均能催化除去DNA或RNA5′-P的反应。通过去除5′-P,可用于防止DNA片段自身连接,或标记(5′端)前除去DNA或RNA5′-P。CIAP可用蛋白酶K消化灭活,或75摄氏度处理10:min,然后用酚氯仿抽提,纯化去磷酸化的DNA,从而去除CIAP的活性。与CIAP不同,SAP在65摄氏度处理15:min后不可逆地失去活性,因此在去除残留的酶活性方面SAP更有优势。
碱性磷酸酶碱性磷酸酯酶alkaline phosphataseALP
是一种糖蛋白,酶分子中含有唾液酸。也是一种含锌离子的金属酶,不同的同工酶,含有不同数目的唾液酸。超离心法测得人结晶的ALP4,分子量为125 000;是二聚体,两个单体的分子量相等,都是58 000。Mg2+、Zn2+是酶的激活剂;Zn2+可能与酶的结构和酶的催化活性有关。其他激活剂如氨基醇等;抑制剂有无机磷、一乙醇胺、铍等。存在于动物血液、肝、骨、小肠等组织及大肠杆菌中催化磷单酯水解。一般从动物小肠或大肠杆菌发酵提取。主要用于医学和生化研究。
基因工程中,广泛使用的碱性磷酸酶有两种,一种是从大肠杆菌提取的BAP,另一种是从牛小肠提取的CIP。两种碱性磷酸酶均能催化去除DNA、RNA、rNTP和dNTP的5′磷酸基,产生5′羟基末端。两种酶反应均需Zn2+。区别在于BAP耐热,而CIP在70℃加热10分钟或经酚抽则灭活;CIP的特异活性较BAP高出10~20倍。因此,CIP应用更广泛。碱性磷酸酶主要用于:①去除DNA和RNA的5′-磷酸基,然后在T4多聚核苷酸激酶催化下,用[r-32P]ATP进行末端标记,继而进行序列分析;②去除载体DNA5′磷酸基,防止自我环化,降低本底,提高重组DNA检出率。
形态特征过氧化物酶体(peroxisome)又称微体(microbody), 过氧化物酶体在1954年被发现时, 由于不知道这种颗粒的功能,将它称为微体(microbody)。
过氧化物酶体是由一层单位膜包裹的囊泡, 直径约为0.5~1.0μm, 通常比线粒体小。普遍存在于真核生物的各类细胞中,在肝细胞和肾细胞中数量特别多。过氧化物酶体的标志酶是过氧化氢酶,它的作用主要是将过氧化氢水解。过氧化氢(H2O2)是氧化酶催化的氧化还原反应中产生的细胞毒性物质,氧化酶和过氧化氢酶都存在于过氧化物酶体中,从而对细胞起保护作用。
过氧化物酶体是由一层单位膜包裹的囊泡, 直径约为0.5~1.0μm, 通常比线粒体小。与溶酶体不同,过氧化物酶体不是来自内质网和高尔基体,因此它不属于内膜系统的膜结合细胞器。过氧化物酶体普遍存在于真核生物的各类细胞 中,但在肝细胞和肾细胞中数量特别多。过氧化物酶体含有丰富的酶类,主要是氧化酶,过氧化氢酶和过氧化物酶。氧化酶可作用于不同的底物,其共同特征是氧化底物的同时,将氧还原成过氧化氢。过氧化物酶体的标志酶是过氧化氢酶,它的作用主要是将过氧化氢(H2O2, Hydrogen Peroxide)水解。过氧化氢(H2O2)是氧化酶催化的氧化还原反应中产生的细胞毒性物质,氧化酶和过氧化氢酶都存在于过氧化物酶体中,从而对细胞起保护作用。
植物体中含有大量过氧化物酶,是活性较高的一种酶。它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有关系。在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。一般老化组织中活性较高,幼嫩组织中活性较弱。这是因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素,增加木质化程度,而且发现早衰减产的水稻根系中过氧化物酶的活性增加,所以过氧化物酶可作为组织老化的一种生理指标。此外,过氧化物同工酶在遗传育种中的重要作用也正在受到重视.
催化从底物移去电子,并转给过氧化氢反应。
即:供体+H2O2→氧化的供体+2H2O,是一种血红素蛋白(hemoprotein)。
如过氧化氢酶便是过氧化物酶的一种。过氧化氢酶可与葡萄糖氧化酶配合使用,脱除蛋清中的葡萄糖,代替了传统的自然发酵的方法,从而提高产品质量,缩短生产周期。
在医学上,也可作为工具酶,用于检验尿糖和血糖。
现代医学上认为机体衰老与氧化有关,例如染色体、酶等的氧化。所以,一些有还原性功能的物质可以在某种程度上抗衰老,如过氧化物酶体,维生素C、E也有抗衰老作用。
碱性磷酸酶(ALP)属磷酸单酯水解酶,是一组特异的磷酸酯酶。
水解酶是催化水解反应的一类酶的总称(如胰蛋白酶就是水解多肽链的一种水解酶),也可以说它们是一类特殊的转移酶,用水作为被转移基团的受体。
碱性磷酸酶(ALP或AKP)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶,而是一组同功酶。目前已发现有AKP1、AKP2、AKP3、AKP4、AKP5与AKP6六种同功酶。其中第1、2、6种均来自肝脏,第3种来自骨细胞,第4种产生于胎盘及癌细胞,而第5种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。