Ni-NTA 树脂纯化his蛋白时为何用巯基乙醇

主要用途： 用于合成树脂及用作杀霉菌剂、杀虫剂、增塑剂、水溶性还原剂等。

其它理化性质： 1.4996

健康危害： 吸入 、摄入或经皮肤吸收后会中毒。中毒表现有紫绀、呕吐、震颤、头痛、惊厥、昏迷，甚至死亡。对眼、皮肤有强烈刺激性。可引起角膜混浊。

环境危害： 对环境有危害，对水体可造成污染。

燃爆危险： 本品可燃，有毒。

危险特性： 遇高热、明火或与氧化剂接触, 有引起燃烧的危险。受高热分解放出有毒的气体。加入保护剂 防止某些生物活性物质的活性基团及酶的活性中心受到破坏。如最常见的巯基，是许多活性物质和酶催化的活性基团，极易被氧化，故提取时常加入一些还原剂。一些易受重金属离子抑制生理活性的物质，加入某些金属螯合剂，把有害金属离子螯和掉，而保持被提取物的活性。 [螯合剂和巯基试剂] 巯基试剂在生化反应中有两个用途，一是防止蛋白质或酶等分子中的SH-基氧化成S-S，二是某些酶反应中维持体系的还原环境。经常应用的巯基试剂有二硫丁醇类化合物（如二硫苏糖醇DTT、二硫赤酰糖醇DTE）和2-巯基乙醇，谷胱甘肽也经常应用。一般来说二硫丁醇类是常选用的巯基试剂，不仅是因为挥发性低，难闻的气味较少，而且氧化电位低，比2-巯基乙醇浓度低很多的情况下，可以使其他二硫化合物完全还原。螯合剂用于控制反应中金属离子浓度或去除金属离子，常用的螯合剂有EDTA（乙二胺四乙酸）、EGTA、1,10-二氮杂菲、柠檬酸和磷酸等。

外观：无色透明液体。

香气：具有少许硫醇气味。

熔点(℃)： -100

沸点(℃)： 157~158

相对密度(水=1)： 1.1143

相对蒸气密度(空气=1)： 2.69

饱和蒸气压(kPa)： 0.133(20 °C)

闪点(°C)： 73

pKa：Value: 9.64±0.10 (25 °C)

溶解性：易溶于水，乙醇和乙醚等有机溶剂，与苯可以任意比例混溶。

水中溶解度：1 mg/mL 敏感性：对空气敏感，易吸潮 用途用于合成树脂及用作杀霉菌剂、杀虫剂、增塑剂、水溶性还原剂等。 聚合级高纯巯基乙醇可用作氯乙烯、丙烯腈等的调取剂，以及聚合催化剂、聚合物交联剂、固化剂。该品得到美国食品药物管理局的批准，可用作丙烯腈、苯乙烯、甲基丙烯酸甲酯三元树脂制食品包装用吹塑容器时的添加剂。 生物学应用2-巯基乙醇可以打开蛋白质中存在的二硫键：cysS-Scys + 2 HOCH2CH2SH → 2 cysSH + HOCH2CH2S-SCH2CH2OH

二硫键被打开后可以使蛋白质的四级或三级结构被破坏。[2]由于2-巯基乙醇能够打开蛋白质的结构，它常常被用于蛋白质分析。而2-巯基乙醇也常常被用于保护蛋白质中自由的半胱氨酸巯基之间不会错误形成二硫键。

作为还原剂，2-巯基乙醇常常可以与二硫苏糖醇（DTT）或三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐（TCEP）互换使用。

2-巯基乙醇是少数几种被发现可以延长小鼠寿命的化合物。[3]在微克量级水平上，2-巯基乙醇被观察到对实验鼠的生命具有多种可能的正面效应。 制备早期采用氯乙醇与硫氢化钠反应制得。环氧乙烷与硫化氢按摩尔比1：3.5配合，以强碱性阴离子交换树脂为催化剂，在42℃左右反应。所得粗品含量约52%，还含少量硫二甘醇（沸点282℃），较易分离获得2-巯基乙醇。2-巯基乙醇可以通过环氧乙烷和硫化氢反应来生成。 危害毒性分级：高毒

急性毒性：口服-大鼠 LD50: 244 毫克/公斤；口服-小鼠 LD50: 190 毫克/公斤

刺激：皮肤-兔子，10毫克/24小时，重度；眼睛-兔子，2毫克，重度

健康危害： 吸入 、摄入或经皮肤吸收后会中毒。中毒表现有紫绀、呕吐、震颤、头痛、惊厥、昏迷，甚至死亡。对眼、皮肤有强烈刺激性。可引起角膜混浊。

环境危害： 对环境有危害，对水体可造成污染。

燃爆危险： 本品可燃，有毒。

危险特性： 遇高热、明火或与氧化剂接触, 有引起燃烧的危险。受高热分解放出有毒的气体。 操作处置与储存安全操作的注意事项：避免接触皮肤和眼睛。 避免吸入蒸气或雾滴。切勿靠近火源。严禁烟火。采取措施防止静电积聚。

安全储存条件： 使容器保持密闭，储存在阴凉、干燥通风处。打开了的容器必须仔细重新封口并保持竖放位置以防止泄漏。建议贮存温度 2- 8 oC。 其他2-巯基乙醇可以与醛或酮反应，生成相应的氧硫杂环化合物，这使得2-巯基乙醇可以作为羰基的保护基。

见http://zhidao.baidu.com/question/292063616.html或

镍柱分离纯化

固定金属离子亲和柱主要用于金属螯化离子。位于许多蛋白中的组氨酸残基将会和许多金属离子，例如锌。铜，镍，铁等形成复合物。因此，该柱料能选择性螯合一些具有组氨酸残基的蛋白质。但是半胱氨酸和咯氨酸残基也能和固定化金属螯和。但是亲和力比组氨酸要弱。所以，结合的强度是和缓冲液的PH和金属离子决定的。

金属螯和柱料主要是由亚氨基的乙酰乙酸成分耦联琼脂糖柱料，借助醚长生7个原子的空间。

全部容量：24-30um的含有zn的干胶

柱料结构：6%的高铰链的琼脂糖

柱料大小：45-165um

平均微粒：90um

直流速度：25度/0.1MPa/30倍柱床/5厘米高度/每小时可达700厘米

最大压强：0.3MPa

PH变化：长期3-13

短期2-14

化学稳定：通用含水缓冲液

0.01M盐酸，1.0M NAOH, 20%乙醇（保存7天）

物理性质：可以忽略在PH或者离子变化下的体积变化

耐热性能：121度下0.1M乙酸钠作用半小时

金属螯和柱料保存于事先填充于20%乙醇。所以要搅拌驱除20%乙醇溶液。换成去离子水。比例是25%去离子水和75%处理胶。

处理金属螯和柱料：

1 平衡所有用到的材料于室温。

2 搅拌金属螯和柱料

3 倒水进柱子，驱除气体。用无离子水液封几厘米。

4 将金属螯和柱料连续倒进柱子，用玻璃棒支撑柱壁防止气泡形成。

5 然后立即用无离子水液封，装上柱盖，连接上泵。

6 打开柱子底部的开关，然后调节泵的流速。通常是不超过0.3MPa的。

7 经过一个稳定的柱床填鸭后，维持填压速度为3个柱床。

使用adaptor

1 经过上溯填鸭后，关闭柱床下面开关，移开上面的薄膜，小心的加上去离子水进行液封。

2 一定角度插入adaptor，确保没有气泡。

3 确保所有的连接都没有问题，柱子/泵/样品接受器

4 倾斜插入活塞确保没有气泡和管道充满液体。利用活泵正反向的流动确保没有气泡。

5 固定adaptor，打开柱子开关，开始缓冲液的流动。先以填鸭的速度直到柱床稳定后。

固定金属离子：

金属螯和柱料通过水来螯和金属的，避免发生沉淀在胶上。

1 确保柱子已经平衡好。如果有必要可以洗2个柱床（去离子水）

2 选择金属离子和0.1-0.3M中弱性酸。例如铁离子PH 3左右就好，避免形成沉淀和共沉。

3 加入一倍柱床的金属离子溶液

4 5倍柱床的去离子水洗涤

5 至少2倍柱床的平衡缓冲液

结合：

发生于PH5.5-8.5之间.最强反映发生于最后

初始缓冲液的选择决定于金属离子和样品的结合性质。乙酸钠或者磷酸钠是比较好的缓冲液中不能使用EDTA或者柠檬酸盐

最通用缓冲液：

0.01-0.2M磷酸钠

0.05M乙酸钠

强烈推荐加入0.15-0.5M NaCl用于防止离子交换。

通常如果不知道一个蛋白的结合能力，最好的就是使用锌离子和中性的磷酸或者乙酸盐，同时含有0.15-0.5M NaCl

去垢剂不会影响蛋白质的结合能力

金属离子的取代意味着蛋白发生了结合。这种现象可以通过颜色来决定

洗脱蛋白：（3种方法）

1 降低PH(一步或者分步)，大部分蛋白溶解于PH4-6最终3-4是可容的。可选择柠檬酸盐，磷酸或者乙酸盐。

2 逐步提高咪唑的浓度（0-0.5M），梯度变化最好是在初始缓冲液的PH范围。

3 加入EDTA或者EGTA可洗脱蛋白质。但是不是通用的。

利用离心或者重力作用纯化组氨酸位点蛋白

通过上镍进行选择性结合含有组氨酸位点蛋白，然后利用含有咪唑的缓冲液洗脱蛋白。

以下的实验是为了最大化将组氨酸位点蛋白结合到金属螯和柱料，然后确保能够洗脱下来。当结合和洗脱的条件尚未明了时，这些方法也是很好用的。

为了获得高纯度的蛋白，必须摸索咪唑的缓冲液在样品上柱和洗脱时的浓度。通常使用10mM-500mM范围的咪唑的缓冲液进行剃度洗脱，然后通过收集和SDS-PAGE 蛋白电泳确定洗脱浓度。

为了纯化不可容的含有his位点的蛋白质，（包含体），可以在变性条件下进行。利用8M尿素或者6M盐酸呱进行溶解蛋白。

样品处理：

样品要经可能溶解，避免出现堵塞现象，所以可以利用0.45uM虑膜过滤杂志

如果样品时溶解于20mM磷酸缓冲液中（含有0.5M Nacl,PH7.4），必须调整PH到7－8。

上柱前准备：

洗柱料：

1 亲柔震动胶瓶充旋胶料

2 利用吸管吸出足量柱料用以纯化目的。每毫升柱料可以吸纳5毫克蛋白

3 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

4 小心去除上清

5 加入5倍体积去离子水，充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟，不要机械搅拌。

6 再次500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

7 再次小心去除上清

挂镍：

1 加入0.5倍柱床体积0.1M硫酸镍，充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟，不要机械搅拌。

2 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3 小心去除上清

洗柱：

1加入5倍体积去离子水，充分振荡柱料，来回倒置5分钟

2 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3小心去除上清

4 再洗两次柱料（一共3×5柱床去离子水）

5 最后用一倍体积起始缓冲液充旋柱料（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）

利用离心来纯化：

上样：

1 在起始缓冲液中加入样品，然后使整体胶浓度达到50％

2 亲柔搅拌，室温离心5－30分钟，结合能力取决于蛋白和样品浓度。

3 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

4 取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳

洗胶：

1 加入5倍体积起始缓冲液，搅拌5分钟

2 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳

4再洗两次柱料（一共3×5柱床起始缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白

电泳

洗柱：

1 加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5分钟

2再次500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脱缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN

利用流速和重力纯化：

1 在柱子底部加上滤器

2 加水排气

3 加柱帽，去除残余水。推荐是最多2 Ml柱料就可以了

样品结合：

1 倒胶进入柱子

2 小心上样，用波棒室温搅拌5－30分钟

3 打开柱帽，收集流出峰用于分析

洗胶：

1 加入5倍体积起始缓冲液，收集流出液用于SDS-PAGE 蛋白电泳

2再洗两次柱料（一共3×5柱床起始缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白

电泳

洗柱：

1 加上柱帽，加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5分钟。打开柱帽，收集流出峰

2再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脱缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN

注意：0.5M咪唑的280nM吸光值＝0.5

常见问题：

1 样品太粘稠

答：核酸存在影响，可以继续超声，加入RNA酶至10ug/ml DNA酶至5ug/ml。然后冰浴1

0－15分钟。或者也可以用注射器来回充旋。这样可以防止堵塞柱料。

2 平衡时样品洗脱了下来

答: 检查PH和缓冲液成分，如果缓冲液成分不正确，EDTA加入，强还原剂加入，都会导致这个现象出现。

加大胶的量，如果胶料承载能力过头，也绘出出现这现象。

准备新鲜的柱料，如果柱料断裂，也挂不上蛋白。

3 在洗脱液中不含有组氨酸蛋白

答：如果SDS-PAGE 蛋白电泳已经发现蛋白存在于超声液中

超声可能不完全。可以用显微镜观察超声情况。AD260/280比值。（通常是超声前将10mg/ml溶菌酶加入25mM Tris-HCL，PH6-8），避免发泡以降解融合蛋白。

蛋白可能是是包含体，可以使用4－6M盐酸呱或者4－8 M尿素溶解。

尿素溶解的可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳，盐酸呱溶解的不可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳，必须换缓冲液。

洗脱液浓度太稀，可以加大咪唑浓度或者降低PH 来决定最佳洗脱条件如果在平衡前的洗柱发现了目的蛋白，证明起始缓冲液中的咪唑浓度太高，可适当降低。

4 考马氏亮蓝或者银染发现多条带

答：加入蛋白激酶抑制剂。可能是蛋白降解。用凝血酶切割前必须去除丝氨酸蛋白酶抑制剂采用梯度咪唑来洗脱蛋白。在平衡洗脱液中加入10mM咪唑可以洗脱大量杂质而不会洗脱融合蛋白。低于500mM咪唑可以洗掉绝大部分杂质。

在洗脱步奏往起始缓冲液加入去垢剂（2％TRITON x-100或者2％Tween20）50% 葡萄糖，20mM B-巯基乙醇。记得杂质通常没有特意结合能力，可以改变缓冲液来洗脱。

如果杂志和目的蛋白有相同结合能力，那就不能用于纯化。因此可以使用别的纯化系统，例如含有GST尾巴就用谷胱甘肽琼脂糖4B

柱料再生，清洁和保存

柱料再生：

1 使用0.05M EDTA,0.5M NaCl来洗脱镍离子。然后用3柱床的0.5M NaCl来洗干净EDTA

2如果是铁离子可以用0.05M EDTA泡过夜

3 这一步可以洗脱上面未能洗脱的残余结合蛋白

清洗柱料：

1 0.5倍柱床2M NaCl，反向洗脱10－15分钟

2 1M NaOH洗1小时去除残余蛋白

3 每一步都要用3倍柱床起始缓冲液清洗

4 4倍柱床70%乙醇洗脱强亲水蛋白和脂类蛋白。

也可以使用2倍柱床去垢剂。0.1-0.5%非离子去垢剂溶于0.1M乙酸。浸泡1－2小时。最后用5个柱床的70％乙醇去除去垢剂。

清洁：

1 尽可能去除微生物

2 0.5-1M NaOH反向流动半小时

3 再用3－5倍柱床消毒的起始缓冲液平衡

4 这个清洁步奏不一定能够提高纯化能力

保存：

长期保存于20％乙醇或者0.01M NaOH 于4度

以上来自百度文库，希望能帮到你。

早期采用氯乙醇与硫氢化钠反应制得。环氧乙烷与硫化氢按摩尔比1：3.5配合，以强碱性阴离子交换树脂为催化剂，在42℃左右反应。所得粗品含量约52%，还含少量硫二甘醇（沸点282℃），较易分离获得2-巯基乙醇。

引自：http://baike.baidu.com/view/146559.htm

按照这个比例52%稀释。

SDS 是一种阴离子表面激活剂，在蛋白质溶液里加入 SDS 后， SDS 能使蛋白质的氢键、疏水键打开并结合到蛋白质分子上，因此它与蛋白质结合后，还引起蛋白质构象的改变。此复合物的流体力学和光 学性质均表明，它们在水溶液中的形状近似雪茄形的长椭圆棒。

通常加SDS的同时还要加入巯基乙醇，巯基乙醇可使蛋白质分子中的二硫键还原，使多肽组分分成单个亚单位。

这样两者共同作用就会使得最终的复合物呈线状。

水与氢氧化钠不反应。

1、氢氧化钠易溶于水，溶于水后电离成钠离子和氢氧根离子，溶液为碱性

NaOH=Na+

+

OH-

2、氢氧化钠溶解过程分为两步。第一步，氢氧化钠的钠离子与氢氧根离子扩散，分散到水中，这个过程吸热。

第二步，这种离子分别与水分子水合，形成水合离子，这个过程放热，并且放出的热远大于第一步吸收的热

所以氢氧化钠溶于水时，温度升高。

实验原理是：在电场的作用下，带电粒子能在聚丙烯凝胶中迁移，其迁移速度与带电粒子的大小、构型和所带的电荷有关。十二烷基磺酸钠（SDS）能与蛋白质的结合，改变蛋白质原有的构象，使其变成近似于雪茄烟形的长椭圆棒，其短轴长度一样，而长轴与分子量大小成正比。在SDS-PAGE中，SDS-复合物的迁移率不再受蛋白的电荷和形状的影响，而只与蛋白质的分子量正相关。在一定浓度的凝胶中，由于分子筛效应，则电泳迁移率就成为蛋白质分子量的函数，实验证实分子量在15kD～200

kD

的范围内，电泳迁移与分子量的对数呈直线关系，用此法可根据已知分子量白质的电泳迁移率和分子量的对数做出标准曲线，再根据未知蛋白质的电泳迁移率求得分子量。同时也可根据不同分离级分的蛋白条带的多少来判定分离纯化产物的纯度。

巯基乙醇提取rna作用 Tris饱和酚一般PH大于7.8，用于DNA的提取。其中，酚是强的蛋白变性剂，可以使细胞或组织中的蛋白质变性析出。 而Tris的主要作用是防治止酚类氧化，若酚类氧化，则会形成醌（两个苯环），醌含有强自由基，会破坏核酸结构。 同时，由于PH值大于7，在碱性环境中DNA处于水相，RNA处于有机相。从而分离上清，即可得到DNA。 Tris饱和酚的配置： 1、冰箱取出重蒸酚，室温放置－－－68度水浴溶化，切勿立即放入68度的水浴中，以防玻璃炸裂 2、加8－羟基喹啉至0.1％和β－巯基乙醇至0.2％，（原液14. 4MOL/ML），混匀，溶液呈现黄色，倒入分液漏斗中（也可在烧杯中进行） 3、加入等溶剂的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反复混匀后，静至分层；放出下层黄色酚液，弃上层 4、加固体Tris约1g/100ml酚，摇匀，去水相 5、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)平衡数次，至PH为8.0 6、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)于棕色瓶中4度保存 7、如黄色消失或呈粉红色（说明酚已经被氧化），则不能使用 巯基乙醇提取rna作用机理 RNasin是一类从大鼠肝或人胎盘中提取出来的酸性糖蛋白质，鼠肝RNasin分子量为40KD；来源于人胎盘的RNasin分子量为51KD，等电点为4.7，最适pH为7～8。RNasin能与RNase非共价结合（Ki=3×1010）从而抑制了它们的活力，RNasin是RNA酶的一种非竞争性抑制剂。1mmol/L的二巯基乙醇对于RNasin的发挥抑制RNase的最大活性非常重要。 RNasin最好不要与某些蛋白质变性剂（如7mol/L的尿素）同时使用，因为尿素能使RNase-RNasin复合物分离，并释放出活性的RNase。 rna提取中乙醇的作用 1. 按照Invitrogen公司的Tizro说明书，在提取RNA过程中进行到加入75%乙醇后，可使RNA沉淀在4度保存一个月，在-20度保存一年。 2. 一般这种方法用的比较少，因为每次提RNA都是一气下来，中间没有停顿的，除非一次提很多，上午时间不够用，可进行到加入乙醇未知，然后放到-20度冰箱，下午可继续进行。 3. 一般保存方法都是RNA溶解到无RNase的水中，然后-80度冰箱保存。 4. 反复冻融对RNA的长时间保存肯定是有影响的，可分成小量保存，尽量减少冻融。 5. 现在有些试剂公司有相关的产品，可用于保存RNA，不过可能会有植物或动物，细胞或组织之分。 二巯基丙醇怎么提取 二巯基丙醇古代叫砒霜解药，二巯丙醇为无色或几乎无色、易流动的澄明液体。有类似葱蒜的气味。在甲醇、乙醇或苯甲酸苄酯中极易溶解，溶于水，在脂肪油中不溶，可防止砷、汞、铋、金、锑等金属对身体组织的中毒作用。名称介绍 中文名称：2,3-二巯基丙醇；2,3-二氢硫基-1-丙醇；2,3-二巯基-1-丙醇；二巯基丙醇；3-羟基-1,2-丙二硫醇；巴尔；巴尔双硫代甘油；英国抗路易斯气剂 dna提取中巯基还原剂 DTT作用如下： 1、DTT的作用之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。 这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。 2、DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。 但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M盐酸胍、8M尿素或1%SDS）。 反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。 DTT即DL-Dithiothreitol，中文名为二硫苏糖醇。分子式为C4H10O2S2，分子量为154.25，纯度>99%。常用还原剂，有抗氧化作用，进口分装。DTT和巯基乙醇相比，作用相似，但DTT的性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。 而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近，但DTT价格略高一些。 RNA提取中巯基乙醇如何除去 是 TRIzol有毒性，trizol中含有苯酚，苯酚是刺激性气味。对呼吸道有伤害，闻久了会有晕的感觉。 1、TRIZOL的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，核酸物质解聚得到释放。 2、苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（RNA酶）。 巯基乙醇作用Rna提取 Trizol就是酚氯仿提取法的常用试剂 Trizol中有酚，异硫氰酸胍和B-巯基乙醇。他们的作用都是使蛋白变性，使蛋白质与核酸解聚。加入氯仿，用来分相，实际上是加速有机相和水相的分层，当溶液pH在酸性的时候，DNA分子就会沉淀在酚与溶液的界面，就是白色层，只有RNA分子留在水相，但溶液pH不在酸性范围内，会使DNA溶解在水相，所以使用时按照说明书要求根据细胞数或培养器皿底面积适量加入Trizol。最后异丙醇沉淀，将水相中RNA提取出来。 提rna加巯基乙醇 材料、试剂及器具 1、 材料 总rna提取物。 2、 试剂 (1)0.1%DEPC水：200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。 (2)10x电泳缓冲液。 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) 0.4mol/L(pH 7.0) NaAc 0.1mol/L 乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L (3)50mL变性琼脂糖凝胶(1%) (4)10x电泳缓冲液 5 mL 琼脂糖 0.5 g 0.1%DEPC水 36.5 mL 加热溶解，稍冷却，加入8.5 mL 37%甲醛。 (5)上样缓冲液：50%，1mmmol/LEDTA，0.4% 溴酚兰，0.4%二甲苯蓝。 (6)甲酰胺(去离子)。