三氟乙酸standard for gc可用于液相色谱吗

1、须高pH。前曾述及当pH高于8会融溶“硅胶”的骨干造成伤害，因此 pH高于8的移动相，则不建议使用。若必须使用高 pH 移动相以增进分离效应者，须选用耐高 pH 的层析管。一般的认知，硅胶具高纯度、高质量的官能基化学键结及完善硅醇基的终结处理，都是降低或减少被融溶，即降低对层析管材质的伤害。或是少用“磷酸盐”因为高 pH会促进硅胶的融溶。或是有机相改用 Pyrrolidone 可防止在高 PH的融溶。即使是如此的注意使用，旦常用于高 pH 移动相，层析管寿命会受影响的。

2、须调和盐类的浓度。移动相调和盐类在于提供适切的 pH，若仅为 pH 需求，则些许少量即可。多数注入分析的量大约是在ng/ml至ug/ml范围，如此即使注入了 100ul 作分析，也不过是数百 ng 的量，只要些许于 pKa 值的一个pH 变化量的盐类即够充分。层析管材料被盐类充分布满也是 Buffer 量的考虑，然而，越是更纯的硅胶,越是毋须高 Buffer量的使用。这一点，可由 Figure 4，不同TFA使用量的移动相所获得不同的图峰型，Figure4左边的三种层析管，使用了 0.1% TFA 之图峰型优良。若降低为 0.01%TFA 时，有的图峰则变得不成峰型，以上就是三氟乙酸钠液相的分析方法。

超纯水冲洗柱——流动相分离样品——超纯水冲洗柱 ——纯乙睛保存柱

1． 电源准备

打开稳压器电源开关，须待电压指示至 220V 后，才能开启其他有关设备。

2． HP1100 高效液相色谱仪的准备

试剂：三氟乙酸

乙腈(Fisher 公司产品色谱纯)

超纯水(Millipore 超纯水)

冰乙酸

溶液配置：贮液瓶与流动相的准备

A 液 0.1%三氟乙酸 （三氟乙酸 1ml，超纯水 999ml）室温保存

B 液 60%乙腈 （乙腈 600ml， 超纯水 400ml）室温保存

样品液 0.01%乙酸 （冰乙酸0.01ml，超纯水 100ml）室温保存

泵头冲洗液：精滤后超纯水或者是 1%色谱纯甲醇 室温保存

注：贮液瓶应用超纯水清洗干净，备用。

流动相溶剂用洁净硼砂漏斗精滤除去微小颗粒。

操作者必须清楚并注明 A、B 贮液瓶盛装为何种溶剂。

冲 洗 泵 头 ： 用 注 射 管 于 软 塑 料 管 末 端 抽 吸 至 有 水 流 出 ， 调 节 流 速 开 关 控 制 流 速 为20-30drop/min.。

① 流动相管道排气

如果管道中气泡较多，可通过弹击管道，排除气泡，并逆时针旋转脱气泵活塞使其松动，用注射管于流动相出口的塑料管末端抽吸至管道内气泡排除完全。操作时，我们通常已经打开了脱气机（气泡严重影响分离效果，所以观察管道中液体是否有气泡非常重要。）

② 开机

③ 进入 HP1100 操作系统

a.双击 WIN-95 操作界面中左下角 Instrument 1 online 图标，进入 HP1100 工作站软件操作界面。单击工作站操作界面上方 Run control 菜单，在下拉菜单中找到 Sample Info 子菜单，单击。在 Sample Info 信息框内定义操作者、样品前缀及编号、保存路径等参数。在保存路径项下，将可定义子目录分别输入操作者拼音缩写，以方便检索时互不干扰。

b.等待工作站操作界面中泵、柱温箱、检测器各指示图标由灰色转变为绿色后，单击泵、检测器各图标可从其各自弹出的菜单中设定流动相各溶剂比例、流速等。

（1）

电源准备

打开稳压器电源开关，须待电压指示至

220V

后，才能开启其他有关设备。

2．LC-600高效液相色谱仪的准备

试剂：三氟乙酸

乙腈

超纯水（Millipore

超纯水）

冰乙酸

溶液配置：贮液瓶与流动相的准备

A

液

0.1%三氟乙酸

（三氟乙酸

1ml，超纯水

999ml）室温保存

B

液

60%乙腈

（乙腈

600ml，

超纯水

400ml）室温保存

样品液

0.01%乙酸

（冰乙酸

10

l

超纯水

100ml）室温保存

泵头冲洗液：精滤后超纯水或者是

1%色谱纯甲醇

室温保存

注：贮液瓶应用超纯水淌洗干净，备用。

流动相溶剂用洁净

G4

玻沙漏斗精滤除去微小颗粒（目前未滤过溶液）。

操作者必须清楚并注明

A、B

贮液瓶盛装为何种溶剂。

冲

洗

泵

头

：

用

注

射

管

于

软

塑

料

管

末端

抽

吸

至

有

水

流

出

，

调

节

流

速

开

关

控

制

流

速

为20-30drop/min.（

①

流动相管道排气

如果，管道中气泡较多，可通过弹击管道，排除气泡，并逆时针旋转脱气泵活塞使其松动，用注射管于流动相出口的塑料管末端抽吸至管道内气泡排除完全。操作时，我们通常已经打开了脱气机（气泡严重影响分离效果，所以观察管道中液体是否有气泡非常重要。）

②

开机

③

进入LC-600高效液相色谱仪操作系统

④

数据记录的终止与保存

3．

关机

1）N2000色谱工作站的关闭

在

N2000的主操作界面上分别单击关闭泵、检测器图标，或通过菜单关闭。关闭电脑主机及显示器。将所有使用仪器用布盖好。关闭排气扇、空调与稳压器开关。

2）

清洁卫生

实验完毕后，打扫仪器室桌面与地面清洁，保持桌面整洁。

3）

仪器使用记录

记录当天的仪器使用情况于指定记录本上，包括仪器使用起止时间与出现问题的解决方案，并签上操作者的名字.以上为－－-液相色谱仪的使用方法

常用做反相流动相的溶剂是甲醇和乙腈，甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统常用做反相流动相的溶剂是甲醇和乙腈，甲醇有其性价比的优势，但是甲醇活性高，可能与某些样品发生反应，而且甲醇在低波长下有紫外吸收，会降低分析方法的灵敏度乙腈虽然价格很高，毒性比甲醇大，但是洗脱能力比甲醇强，很少与样品发生反应，用作流动相系统压力要比甲醇低很多，且截止波长比甲醇低20nm，增加了检测出在低波长下才有吸收的杂质的可能性，所以我们一般倾向于多用乙腈，少用甲醇。但是有时候样品峰形不好或者分离不好，更换溶剂试试是一个很好的选择，毕竟不同的溶剂提供不同的选择性。

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对流动相的优化主要在水相上下功夫，水里可以加酸、加碱、加盐，从而改善峰形、提高分离度。流动相里加碱的情况比较少，主要还是加酸，常用的酸有磷酸、三氟乙酸、甲酸、乙酸、高氯酸、甲基磺酸等，其中最常用的是磷酸和三氟乙酸，磷酸在低波长下没有紫外吸收，而三氟乙酸在低波长下有，但是三氟乙酸易挥发而磷酸不行，所以单纯做液相，低波长下磷酸最合适，三氟乙酸有吸收，运行梯度时基线漂移很严重，而做液质就要考虑首选三氟乙酸了，近些年还比较流行加甲酸或乙酸。一般情况下这几种酸没有太大区别，我们更多的是考虑通过加酸改变流动相的pH值，从而改善样品的分离度和峰形。

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相同进样量样品峰越高则意味着峰形越好，从图中可以看出多数样品在低pH值下峰形都比中性要好，这个主要是由色谱柱本身的性质所决定的。色谱柱主要都是硅胶基质，现有的填料处理工艺无法将硅胶上残余的硅羟基全部去除，硅羟基会造成样品峰拖尾，一般认为硅羟基的pKa在到之间，低pH值能帮助抑制硅羟基的活性，减小拖尾，从而改善峰形，提高分离度。水溶液中添加%(体积)的磷酸或者三氟乙酸其pH值大概在2左右，用作流动相正好抑制硅羟基的活性，所以开发液相分析方法时流动相首选水加01.%的磷酸，然后再以此为基础做优化。

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在单独用酸不行的时候就要考虑使用缓冲盐，缓冲盐的选择原则是：简单、稳定、缓冲能力强、配制简单，需要调pH值时要有相应的酸或碱。常用的缓冲盐是磷酸盐，主要是钾盐和钠盐，再有就是醋酸盐，常用的盐浓度在10~20mM左右。以前因为色谱柱填料生产工艺的问题，往往需要在流动相里添加三乙胺来减少拖尾，但是三乙胺对色谱柱的寿命有很大影响，现在新的色谱柱都不再需要了。流动相里有时会需要调节pH值到碱性，具体pH要视色谱柱的耐受范围而定，常用 NaOH、KOH溶液或氨水做为调节缓冲盐溶液碱性pH的试剂，也可以往水里单独添加氨水做碱性流动相。

首先你需要知道超声的目的，一个是为了混合均匀，一个是为了脱气。

混合均匀你手动摇匀就可以，脱气的话减压抽滤。然后超声半分钟，拿出来晃一晃，把溶液和试剂瓶中间的气泡晃出来，然后在超声半分钟就可以了。

超声会加快分子间运动，时间久了温度也会升高。但是那需要长时间超声。而且既然是混合物，他们之间就应该有一个共沸点，不是你想象的那种三氟乙酸和甲酸一下子都跑没了的情况。

一般缓冲液是为了保证峰型，控制pH值等等。比如，你的流动相用水-甲醇就跑得很漂亮，那你就什么缓冲盐或者酸都不用加。

你的待测物质偏酸性，或者偏碱性，为了调整保留时间和峰型，会往里加磷酸盐，有的还会可以要求调节pH值至多少多少。典后面有很多不同pH值的磷酸盐缓冲液的配制方法。

三氟乙酸主要的功能是扫尾，但是它对色谱柱有一定损伤，如果峰型还好就不需要。