三氯乙酸的作用及原理
三氯乙酸与蛋白质之间主要有以下几个方面的作用:
①在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐.
②作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团,使之聚集沉淀.
③随着蛋白质分子量的增大,其结构复杂性与致密性越大,TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去,在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片,而且随时间的延长这一作用愈加明显; 在电泳时使用TCA对蛋白质样品的浓缩或除盐时,对于分子质量大的蛋白质,要慎重选择TCA.对小分子量蛋白质的浓缩,采用TCA时也有两点需要注意:一是用TCA沉淀后,尽量用丙酮彻底抽提TCA二是样品处理后要尽快进行电泳分析,以免发生聚集及断裂,造成结果分析的不准确。
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得到氯仿,二氧化碳,水。机理:—CCl3为吸电子基,羧基碳缺电子性增强,受OH-进攻,CCl3—基团离去,得到碳酸(分解),CCl3-与水反应,得到CHCl3与OH-
在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐.这样可以尽量保证细胞中蛋白质等有效成分的流失。才会更有利于我们对细胞的研究。
三氯乙酸,有机化合物,又名三氯醋酸,无色结晶,有刺激性气味,易潮解,溶于水、乙醇、乙醚。主要用于有机合成和制医药、化学试剂、杀虫剂。
由三氯乙醛与发烟硝酸共熔氧化而得,反应温度80~100℃。用硝酸或高锰酸钾氧化三氯乙醛、在碘或三氯化磷催化和光照下直接氯化乙酸可制得三氯乙酸。
扩展资料:
TCA与蛋白质在酸性条件下与蛋白质形成不溶性盐。作为蛋白质变性剂使蛋白质构象发生改变,暴露出较多的疏水性基团,使之聚集沉淀。
随着蛋白质分子量的增大,其结构复杂性与致密性越大,TCA可能渗入分子内部而使之较难被完全除去,在电泳前样品加热处理时可能使蛋白质结构发生酸水解而形成碎片,而且随时间的延长这一作用愈加明显。
在电泳时使用TCA对蛋白质样品的浓缩或除盐时,对于分子质量大的蛋白质,要慎重选择TCA.对小分子量蛋白质的浓缩,采用TCA时也有两点需要注意:一是用TCA沉淀后,尽量用丙酮彻底抽提TCA二是样品处理后要尽快进行电泳分析,以免发生聚集及断裂,造成结果分析的不准确。
参考资料来源:百度百科——三氯乙酸