叶绿素的提取和分离实验怎么做

提取：

（1） 取菠菜或其他植物新鲜叶片4-5片（2g左右），洗净，擦干，去掉中脉剪碎，放入研。

（2） 研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2-3ml 95％乙醇，研磨至糊状，再加10-15ml 95％乙醇，离心35min，提取上清液过滤于三角瓶中，残渣用10ml 95％乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。

（3） 如无新鲜叶片，也可用事先制好的叶干粉提取。取新鲜叶片（以菠菜叶最好），先用105℃杀青，再在80℃下烘干，研成粉末，密闭储存。用时称叶粉2g放入小烧杯中，加95％乙醇20-30ml 浸提，并随时搅动。待乙醇呈深绿色时，滤出浸提液备用。

分离：

（1） 取圆形定性滤纸一张（直径11cm），将其剪成滤纸条（9cm×3cm），用滴管吸取乙醇叶绿体色素提取液，沿纸条的长度方向涂在纸条的一边（距边约1cm），使色素扩散的宽度限制在0.5cm以内，风干后，再重复操作数次。

（2） 在层析缸中加入适量的推动剂，将滤纸条带有色素的一端插入层析缸中，使滤纸条下端浸入推动剂中。迅速盖好层析缸盖。此时，推动剂借毛细管引力顺滤纸条向上扩散，并把叶绿体色素向上推动，不久即可看到各种色素的条带。

（3） 当推动剂前沿接近滤纸边缘时，取出滤纸，风干，即可看到分离的各种色素：叶绿素a为蓝绿色，叶绿素b为黄绿色，叶黄素为鲜黄色，胡萝卜素为橙黄色。用铅笔标出各种色素的位置和名称。

叶绿素提取的准备工作是在一个半暗的房间里，室温保持在25℃。

提取步骤如下：

(1) 取1000克新鲜的绿叶，在韦氏搅切器中粉碎。

(2)将粉碎的1000克绿叶放进加有少量的碳酸钙的丙酮中(温度20℃)进行萃取，直到过滤、清洗后的叶子碎片为无色。

(3)将过滤后的丙酮提取液放到盛有1升石油醚和100ml丙酮的漏斗中，然后轻轻地旋转，同时加放蒸馏水直到分层为止。水层的大部分丙酮和水溶杂质被丢弃，只剩石油醚溶液。

(4)将石油醚溶液用蒸馏水再次净化后，用含有石油醚和0.01克草酸的200ml80%的甲醇溶液清洗5次以上，最后得到黄绿色悬浮液。

(5)用无水硫酸钠对悬浮液进行干燥，并将其渗入到3cm厚的蔗糖粉末制成柱中，然后用石油醚清洗沉淀的色素去掉类胡萝卜素，使之只含有天然的叶绿素。

(6)含有天然叶绿素的蔗糖柱分两层，绿层有4-10mm的叶绿素b层，另一蓝层为2-6mm的叶绿素a层。

(7)将位于蓝层正中的部分(约占蓝层的一半) 放入醚中，对此悬浮液进行过滤、洗提，用蒸馏水清洗，用硫酸钠干燥，再用器皿进行过滤后，得到叶绿素a。

(8)将(6)中的绿层中间部分移出，迅速放入醚中过滤、洗提，制成叶绿素b醚溶液。

扩展资料：

叶绿素的分离

色谱法是一种很好的分离纯化、鉴定有机化合物的重要方法，尤其是在微量分析中应用的更是广泛。果蔬中色素主要包括脂溶性的胡萝卜素、叶黄素、叶绿素和水溶性的花青素。

在提取实验时，我们可以利用相似相溶的原理把水溶性的花青素滤掉，继而可以利用薄层色谱、柱色谱、高效液相色谱对胡萝卜素、叶黄素和叶绿素进行分离。

由于这三种色素的极性依次减弱，可以适当地选择单一的有机溶剂或者不同配比的混合溶剂作为展开剂和洗脱剂，确定最佳的优化分离条件。

叶绿素-百度百科

（1）②实验设计应遵循对照原则，所以本实验要设置四组实验，自变量是细胞分裂素的浓度，即细胞分裂素的浓度依次为0、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL．

③根据单一变量原则，每天同时分别用等量的蒸馏水、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL的细胞分裂素溶液给四组幼苗碰洒一次．

④2周后，各组取等量大小形态相同、长势相同、位置相同的叶片，放入烘箱中烘干，再取等量干粉放入研钵中，加入等量的二氧化硅（时研磨更充分），等量的碳酸钙（防止色素被破坏），等量的无水乙醇（提取色素），研磨后提取色素并测量叶绿素的含量．

⑤实验设计还应遵循平行重复原则，所以重复④若干次，最后取平均值．

（2）理论上预测的实验结果有多种，假设上述实验所用的细胞分裂素浓度中，使用40μg/mL的叶绿素相对含量最高，且各种浓度的实验结果各不相同，则存在三种情况，即40＞20＞60＞0、40＞20＞0＞60、40＞60＞20＞0．

故答案为：

（1）②四  

③同时分别用等量的蒸馏水、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL的细胞分裂素溶液给四组幼苗碰洒一次

④等量大小形态相同、长势相同、位置相同      无水乙醇

⑤取平均值

（2）

实验原理

植物叶绿体色素是吸收太阳光能，进行光合作用的重要物质。它一般由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。

实验材料

卤地菊叶片

器材：研钵、剪刀

实验步骤

（1）取植物新鲜叶片1克，洗净，擦干，去掉中脉剪碎，放人研钵中。

（2）研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，2-3 mL95%乙醇，研磨至糊状，再加2-3 mL95％乙醇，过滤，即得色素提取液。