0.2%的蒽酮-硫酸如何配置

可以,时间越长标曲线性越好,但是加热时间要是太长了用这个方法就不划算了.在比色管水平加热半个小时足够,若担心显色不完全,可以适当加长反应时间.反应后关于冷却的问题不知怎么解释,不过我做稳定性实验的时候,吸光值基本保持不变了.有时我测的时候反应液还热着呢,凉了之后再测基本上没多大变化.标准方法上说冷却至室温估计是为了实验安全着想,一般比色反应都这么说,所以我认为,想怎么冷却就怎么冷却喽!

糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛，生成的糖醛或羟甲基糖醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糖醛衍生物在定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比。糖类与蒽酮反应生成的有色物质，在可见光风的吸收峰为630nm,可在此波长下进行比色，故可用于糖的定量。

半乳糖糖醛

这里介绍的是蒽酮比色法，糖在硫酸的作用下生成糖醛，糖醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物，颜色的深浅与糖含量有关。方法简便，但没有志一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。

根据原理是硫酸提供的酸性环境使得糖转化为糠醛衍生物

糠醛衍生物和蒽酮反应显色

仔细看蒽酮的结构式 里面的酮羰基不是很稳定的 硫酸环境下 很容易被破坏 久置会变质

其他常见的硫酸萘酚试剂 乙酰丙酮试剂等 都需要现用现配 原理类似的

[a]多糖含有几百个或更多残基，但只有一个还原基团，因此它的还原能力极弱，对于他们的测定，应先将它们用酸水解成单糖组分。

蒽酮比色法是一种快速而简便的定糖方法，糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛及其衍生物，该衍生物与蒽酮发生反应，反应后溶液呈蓝绿色，于620nm处有最大吸收。因此可用此方法测定多糖含量。

[b]试剂

2g/L蒽酮试剂：溶解2g蒽酮于1L浓硫酸（98%的浓硫酸）中，当日配制使用。

0.01g/L葡萄糖溶液（可加几滴甲苯作防腐剂）

0.1g/L糖元溶液

[c]实验器材

试管及试管架 吸量管（1ml，5ml) 恒温水浴箱（100℃） 制冰机 紫外分光光度计 滴管 白瓷板

制作标准曲线

准确称取0.1g葡萄糖（分析纯），溶解并用蒸馏水定容至100ml后，分别取出1ml,2ml,3ml,4ml,5ml分别加入到50的容量瓶中，并用蒸馏水定容到50ml，配成浓度分别为20ug/ml,40ug/ml,60ug/ml,80ug/ml,100ug/ml,各取1ml于试管中，再加入3ml的蒽酮试剂，迅速浸入冰水中冷却，待几支试管均匀加完后，一起浸入100℃恒温水浴箱中，为防止水分蒸发，应在试管口上加盖一个玻璃球或者加一个塞子，自温度重新升至100℃起计时，准确保温10min后取出，用流动水冷却，然后，于室温中平衡片刻（约10min左右），在分光光度计上，波长620nm处，用0.5cm厚度的比色杯，以空白管做对照空白（此处的空白是指不加葡萄糖的蒽酮试剂，其他反应条件都一致），进行比色。

既得标准曲线。

如下表格 编号123456体积ml1（蒸馏水）11111浓度ug/ml020406080100 [d]样品测定

如上述条件一致，但要记得用除去蛋白质的样品溶液进行测定，否则会影响测定结果。

样品含糖量计算：

C×V2×D

样品含糖量（%）=----------------------×100%

W×V1×10

其中C----在标准曲线上查出的糖含量（ug),

V2---提取液总体积（ml）

V1---测定时取用体积（ml）

D-----稀释倍数

W-----样品重量（g）

10-----样品重量单位g换算成ug的倍数

注意事项：

1.一定要注意温度要控制在100℃

2.从100℃开始准确计时10min,然后迅速冷却，于室温中平衡10min.

3.蒽酮要注意避光保存。配置好的蒽酮试剂也应注意避光，当天配制好的当天使用。

4.试管要保证干燥清洁，无残留水滴。

量取双蒸水75ml，倒入一烧杯中，量取225ml浓硫酸，沿烧杯壁缓慢加入烧杯中，边加边搅拌，冷却后使用。

蒽酮反应液

称取0.6g蒽酮，倒入棕色瓶中，加10ml无水乙醇助溶，将300ml75％硫酸倒入棕色瓶中，用吸管轻轻吹打，直至蒽酮完全溶解，临用前配制。

你根据自己想要的浓度换算一下就可以的

Fe(OH)2——白色沉淀 Fe3+——黄色 Fe (OH)3——红褐色沉淀 Fe (SCN)3——血红色溶液

FeO——黑色的粉末 Fe (NH4)2(SO4)2——淡蓝绿色 Fe2O3——红棕色粉末 FeS——黑色固体

铜：单质是紫红色 Cu2+——蓝色 CuO——黑色 Cu2O——红色 CuSO4（无水）—白色 CuSO4�6�15H2O——蓝色 Cu2 (OH)2CO3 —绿色 Cu(OH)2——蓝色 [Cu(NH3)4]SO4——深蓝色溶液

BaSO4 、BaCO3 、Ag2CO3 、CaCO3 、AgCl 、 Mg (OH)2 、三溴苯酚均是白色沉淀

Al(OH)3 白色絮状沉淀 H4SiO4（原硅酸）白色胶状沉淀

Cl2、氯水——黄绿色 F2——淡黄绿色气体 Br2——深红棕色液体 I2——紫黑色固体

HF、HCl、HBr、HI均为无色气体，在空气中均形成白雾

CCl4——无色的液体，密度大于水，与水不互溶 KMnO4--——紫色 MnO4-——紫色

Na2O2—淡黄色固体 Ag3PO4—黄色沉淀 S—黄色固体 AgBr—浅黄色沉淀

AgI—黄色沉淀 O3—淡蓝色气体 SO2—无色，有剌激性气味、有毒的气体

SO3—无色固体（沸点44.8 0C） 品红溶液——红色 氢氟酸：HF——腐蚀玻璃

N2O4、NO——无色气体 NO2——红棕色气体 NH3——无色、有剌激性气味气体

配制蒽酮试剂时硫酸的浓度（若硫酸浓度过高会脱水太过强烈导致炭化过度，太低反应不完全，可生成沉淀），所以需要硫酸的氧化作用。

浓硫酸，俗称坏水，化学分子式为H?SO?，是一种具有高腐蚀性的强矿物酸。

【实验原理】 本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量.糖在硫酸作用下生成糠醛,糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物,颜色的深浅与糖含量有关.在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比.由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化,故必须在反应后立即在同一时间内比色.该实验方法简便,但没有专一性,绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮试剂反应,产生颜色. 【器材与试剂】 1. 实验仪器分光光度计,恒温水浴,电子天平,烘箱,刻度试管,漏斗 2. 实验试剂活性炭,乙醇 葡萄糖标准液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重的葡萄糖100 mg,用80%乙醇配制成1000 ml溶液,即得每ml含糖为100 μg的标准液 蒽酮试剂：称取1 g 蒽酮,溶解于1000 ml稀硫酸（将760 ml相对密度为1.84的浓硫酸用蒸馏水稀释成1000 ml）溶液中,置于棕色瓶中,当日配置使用. 3. 实验材料植物叶片或种子 【实验步骤】 1. 可溶性糖的提取 植物叶片或种子在110℃烘箱烘15 min,然后调至70℃过夜.干叶片磨碎后称取50 mg样品倒入10 ml刻度离心管内加入4 ml 80%乙醇,置于80℃水浴中不断搅拌40 min,离心,收集上清液,其残渣加2 ml 80%乙醇重复提2次,合并上清液.在上清液中加10 mg活性炭,80℃脱色30 min,80%乙醇定容至10 ml,过滤后取滤液测定.