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酒精为什么能沉淀DNA

如意的魔镜
坚定的柠檬
2023-01-25 13:10:23

酒精为什么能沉淀DNA

最佳答案
落寞的朋友
任性的山水
2026-05-01 04:48:40

此次试验一般会有两个疑问:

1.为什么用无水乙醇沉淀DNA?

用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。

DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。

2.在用乙醇沉淀DNA时,为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1~0.25mol/L?

在pH为8左右的溶液中,DNA分子是带负电荷的,加一定浓度的NaAc或NaCl,使Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀,当加入的盐溶液浓度太低时,只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合,这样就造成DNA沉淀不完全,当加入的盐溶液浓度太高时,其效果也不好。在沉淀的DNA中,由于过多的盐杂质存在,影响DNA的酶切等反应,必须要进行洗涤或重沉淀。

最新回答
炙热的白羊
过时的钢笔
2026-05-01 04:48:40

核酸不溶于乙醇,所以可以使用乙醇对核酸进行漂洗,使残留的杂质溶解于乙醇,并最终通过离心去除。可总结为去除DNA中的残留杂质(对混杂的RNA无效)。

提取时,保证核酸一级结构的完整性;核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度;其他核酸分子,如RNA,也应尽量去除。

扩展资料:

通常与已知分子量的标准DNA片段一起电泳,经比较可获知DNA标本大小。如条带拖尾,系加入DNA量太多或凝胶未制好。若DNA分子量小或一片模糊,表明DNA有降解。

破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

单薄的冬瓜
现代的高山
2026-05-01 04:48:40
乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。

DNA 溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混 合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代懈水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增 大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙醇,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15-30分钟即可。

乙醇:乙醇是一种有机物,俗称酒精,化学式为CH3CH2OH(C2H6O或C2H5OH)或EtOH,是带有一个羟基的饱和一元醇,在常温、常压下是一种易燃、易挥发的无色透明液体,它的水溶液具有酒香的气味,并略带刺激。有酒的气味和刺激的辛辣滋味,微甘。

乙醇液体密度是0.789g/cm(20C°) ,乙醇气体密度为1.59kg/m,沸点是78.3℃,熔点是-114.1℃,易燃,其蒸气能与空气形成爆炸性混合物,能与水以任意比互溶。能与氯仿、乙醚、甲醇、丙酮和其他多数有机溶剂混溶,相对密度(d15.56)0.816。

乙醇的用途很广,可用乙醇制造醋酸、饮料、香精、染料、燃料等。医疗上也常用体积分数为70%-75%的乙醇作消毒剂等,在国防工业、医疗卫生、有机合成、食品工业、工农业生产中都有广泛的用途。

DNA:脱氧核糖核酸(英语:Deoxyribonucleic acid,缩写为DNA)又称去氧核糖核酸,是一种分子,双链结构,由脱氧核糖核苷酸(成分为:脱氧核糖及四种含氮碱基)组成。可组成遗传指令,引导生物发育与生命机能运作。

主要功能是长期性的资讯储存,可比喻为"蓝图"或"食谱"。其中包含的指令,是建构细胞内其他的化合物,如蛋白质与RNA所需。

带有遗传讯息的DNA片段称为基因,其他的DNA序列,有些直接以自身构造发挥作用,有些则参与调控遗传讯息的表现。

组成简单生命最少要265到350个基因 。

迅速的钢笔
称心的含羞草
2026-05-01 04:48:40
核酸提取时,用异丙醇和乙醇的区别是什么

异丙醇比较疏水,能很更好地沉淀核酸,用乙醇的目的是去盐,它比异丙醇更亲水,所以能去掉一些盐离子.有时还用70%的乙醇洗样品也是为了增加盐的溶解度.在沉淀核酸时可用乙醇与异丙醇,乙醇的极性要强于异丙醇,所以一般用2倍体积乙醇沉淀,但在多糖、蛋白含量高时,用异丙醇沉淀可部分克服这种污染,尤其用异丙醇在室温下沉淀对摆脱多糖、杂蛋白污染更为有效.

异丙醇沉淀核酸时,高浓度盐存在将使大量多糖存在在溶液中,从而可达到去多糖的作用.但高浓度的盐存在会影响核酸的进一步操作,因此必须用乙醇多次洗涤脱盐

生动的板栗
要减肥的电灯胆
2026-05-01 04:48:40

异丙醇是可以沉淀DNA的。后续或者前面应该有分离掉DNA的方法,因为DNA假如你是真核的话,通常是染色体的形式出现,分子量很大的,很容易沉淀下来,但是RNA的分子量就比较小,从而产生分离。

异丙醇可以沉淀RNA和蛋白质,其实。。。。假如很本质的看,都是差不多的,就是抢水。但是其还会让蛋白质变性,RNA什么的,不会,假如你不是研究什么二级结构的话。

异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护,等同于沉淀,但是这是个反应时发生在水相中,

氯仿的作用有多个方面,一是作为有机溶剂变性蛋白,使其沉淀并通过离心除去,同时也通过变性作用抑制RNase活性;二是RNA提取试剂中通常含有苯酚(Trizol主要成分就是苯酚,很多自己配试剂提的方法也用苯酚,抽提蛋白时也会用到苯酚),苯酚微溶于水,抽提烷之后水相里有痕量的酚,如果不除去会损伤核酸,需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉;三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质(比如油脂、脂溶性色素等),起到一定除杂作用。

通常氯仿里面会加少量异戊醇(1/25),减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫,影响后续操作,不过个人经验感觉加不加没什么太大区别,也许是我的样品里蛋白不多吧

异丙醇是沉淀核酸用的,作用和乙醇一样。只不过用量少一点,0.6V~1V就够了,不像乙醇沉淀需要至少2V,一般需要2.5倍体积。在水相很多,离心管容积有限,加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀。不过感觉效果不如乙醇,偶尔会有沉淀不出来东西的时候。

踏实的小海豚
健忘的墨镜
2026-05-01 04:48:40
乙醇沉淀DNA的原理是当乙醇比例大于60%时,乙醇和DNA竞争性的争夺水分子,破坏了核酸表面的水膜,使核酸沉淀下来。所以你加了1ml的乙酸钠-EDTA后,总的水体积变了,然后你再按原体积加2倍体积的原乙醇,乙醇的比例不够自然不会有沉淀。

怕孤独的书本
动人的芒果
2026-05-01 04:48:40
乙腈和甲醇是常用的溶剂,在生物样品沉淀中常被用到。乙腈和甲醇有一些独特的特性,使它们在生物样品沉淀中更加有效。

首先,乙腈和甲醇都具有很好的溶解能力,可以溶解大多数蛋白质和核酸。因此,在沉淀生物样品时,乙腈和甲醇可以有效地溶解蛋白质和核酸,使它们更容易被沉淀。

其次,乙腈和甲醇具有较低的沸点,使它们在沸腾时更容易蒸发。因此,在沉淀生物样品时,乙腈和甲醇可以较快地蒸发,使样品沉淀速度更快。

此外,乙腈和甲醇还具有较低的自溶能力,使它们在沉淀生物样品时不易被溶解。因此,乙腈和甲醇可以有效地沉淀生物样品,而不会对样品产生负面影响。

相比之下,乙醇具有较高的沸点和自溶能力,使它在沉淀生物样品时效果较差。乙醇在沸腾时蒸发得较慢,并且易被溶解,这可能会对生物样品产生负面影响。

丰富的发夹
害羞的老虎
2026-05-01 04:48:40
70%酒精是为了沉淀核酸的

β巯基乙醇 是为了保护蛋白质的巯基的。

PCR和核酸提取中应该不需要用到β巯基乙醇的。

一般蛋白质提取等相关操作才会用到β巯基乙醇