苯酚硫酸法出许多碳粒,比色不能, 求助!

正常的反应溶液是深棕色。糖越多颜色越深。注意硫酸的纯度。空白的颜色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌（苯酚氧化生成）的颜色。颜色过深的话说明你的酚的浓度过大，一般是5%，不是深红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能

淀粉、纤维素的构成单位是葡萄糖，但植物多糖的话，种类就很多了，构成的单元也很多，多种单糖---果糖、半乳糖、木糖、甘露糖等等都可以作为构成单位。比如银耳多糖、香菇多糖，成分极为复杂。

苯酚硫酸法师利用糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物。在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量。

此时，对于杂聚多糖，只用葡萄糖溶液做标准曲线，是不准的。有时用多种单糖标准品作标准曲线，但不同单糖标准品在相同浓度下其吸收值相差较大（葡萄糖显色最大），分别制作标准曲线对杂多糖测定的结果也就不同。因此，苯酚硫酸法对于成分复杂的多糖来说，只能是一个参考。

对杂多糖往往不用单一的苯酚硫酸法。比如，采用气相色谱法对杂多糖的组成进行分析，再配合苯酚硫酸法可以得到更可靠的结果，比单用苯酚 硫酸法更可靠、准确。

1、反应液碱度。

2、热源强度。

3、煮沸时间和滴定速度。糖类与硫酸加热产生糠醛或糠醛衍生物，然后用苯酚显色，由于不同糖类可以得到不同色泽，可制成对应的各类糖的标准曲线，借此可以测定样品中的糖

问题一：苯酚-硫酸法的注意 （1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。（4）测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1――0.3之间。比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。

问题二：苯酚硫酸法测定多糖需要注意哪些问题 苯酚硫酸法测定多糖需要注意哪些问题

原理

多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物.再以比色法测定.

试剂

1． 浓硫酸：分析纯,95.5%

2． 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存.

3． 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制.（每次测定均需现配）

4． 标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖.

5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解,可置冰箱中长期储存.

6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解,可置冰箱中长期储存.

7． 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水.

8． 6mol/L 盐酸

问题三：硫酸苯酚法测多糖有什么要特别注意吗 苯酚硫酸法测定多糖需要注意：①、试管要洗干净，苯酚硫酸法很灵敏，试管没有刷干净会有很大影响。②、操作手法一致，尤其是硫酸加入的方式和速度，要尽量一致。建议用移液管移取，直接松开按住上面的手指，让其自行流下。最后加入硫酸后，立即摇匀和隔段时间摇匀，室温和冰浴，这些都不是造成平行样不平行的原因，只要处理样品方法是一样的，切勿一个样一种方法。③加硫酸必须要快，建议用5mL的移液枪，另外样品的稀释浓度要合理。⑤药品要求：A、 浓硫酸：分析纯,95.5% B、80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存。C、 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制.（每次测定均需现配）D、标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。E、15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。F、 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解,可置冰箱中长期储存。G、 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。H、6mol/L 盐酸。⑥酚要4℃冰箱保存，拿出来到室温后用，加浓硫酸后一定要摇匀，水浴温度和时间尽量一致，冷水冲凉的时间也尽量一致，试样温度不一样对吸光度也有影响，还有可以的话样品和标曲同时做，误差就小了。

问题四：苯酚-硫酸法的介绍 苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。

问题五：苯酚硫酸法测多糖，苯酚硫酸怎么配制 苯酚硫酸法测多糖，苯酚硫酸怎么配制

在单因素试验基础上,选择对多糖含量测定结果产生显著影响的4个显色因素:6％苯酚用量、浓硫酸用量、反应温度、水浴显色时间进行正交试验,获得传统苯酚-硫酸法测定多糖含量的最佳显色条件是1 mL 6％苯酚溶液、7 mL浓硫酸、4℃反应温度、30 min水浴显色.改进后的多糖含量测定的显色条件即按照1:7的比例直接配制苯酚-硫酸显色液,在4℃条件下加入样品溶液,在90℃水浴进行30 min显色后,于490 nm处测定吸光度,计算多糖含量.通过传统最佳显色方法的验证试验和改进后的显色方法测定多糖含量的结果比较,表明改进后的方法具有操作简便、精密度高、准确度高、实用性强的优势.

1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。 2．样品含量测定： ①取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意：总的溶液不要超出10毫升。（既不要超出离心管的容量）。 ②离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。） ③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。 ④定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。

文献报道中，苯酚制剂的制备方法如下：取苯酚200g，加铝片O.2g和碳酸氢钠O.1g，蒸馏，收集182摄氏度馏分，称取20g，加入300ml蒸馏水混匀，溶解即得。置棕色瓶中，放冰箱内备用。

制备苯酚制剂的目的，就是因为苯酚的纯度对实验影响很大，不得已而为之。

如果限于实验室条件不能进行高温蒸馏，那么建议你采用蒽酮硫酸法测定多糖，很可能比NDS测定方法重现性还好，但需注意一点：蒽酮剧毒！所以一般用的都是NDS方法，虽然麻烦一些。